HBV整合的致癌性研究

Abstract

HBV的4个亚基因产物中,HBx具有反式激活、介导细胞凋亡作用,HBs具有反式激活因子的作用。肝细胞癌(HCC)的发生与HBV的整合及整合后染色体重排有关。为探讨HBV整合及HBx、HBs亚基因在HCC发生中的可能作用,我们制备了HBV亚基因探针,并以此对肝细胞癌中HBV整合及亚基因转录进行了研究,以期为阐明HBV感染后HCC发生机制提供一定的实验资料和依据。本研究中,首先以BamHⅠ、BglⅡ酶切扩增回收的HBVDNA ,回收其HBV亚基因HBx、HBc、HBs、PreSDNA片段,以地高辛甙元随机引物法标记成敏感性与特异性俱佳的HBV亚基因探针,再以HBV探针点杂交检测HCC标本中HBVDNA的阳性率,对阳性的标本,继以Southern转膜杂交检测其整合情况,最后取HBVDNA阳性的HCC标本,按经典方法抽提其mRNA ,分别以HBV亚基因探针Northern转膜杂交检测亚基因的表达率。结果显示:4 4例HCC标本中,75 %的标本显示有HBVDNA的存在;Southern杂交分析,HBV纯整合型HCC为6 3.6 % ,混合型HCC为36 .4 % ,未见单纯游离型HCC标本存在;17例HBVDNA阳性..