Enhancement of Gene Targeting Efficiency of Pichia pastoris

基因打靶技术是研究酵母分子生物学的重要工具，是研究特定基因功能或胞内蛋白相互作用的重要手段之一，模式酵母，如酿酒酵母或裂殖酵母，已经建立了较为有效的基因打靶系统。然而与模式酵母相比，巴斯德毕赤酵母的基因打靶效率低下，大大限制了其在基础研究和工业上的应用。 鉴于巴斯德毕赤酵母近十年在蛋白表达和化学品生产上日益广泛的应用，本研究拟从分子水平改造毕赤酵母菌株，提高其基因打靶效率，以满足其在基因工程和代谢工程中改造的需求。 为达到上述研究目的，主要采取以下两个策略进行改造：1）通过提高靶细胞适应性来加强基因打靶效率。以参与巴斯德毕赤酵母GS115糖基化途径的OCH1基因敲除为例，首先通过一个辅助载...Gene targeting has provided important molecular and genetic tools for addressing the function of annotated genes and for studying the interaction of cellular proteins in model yeasts. In contrast to model yeasts, gene targeting efficiencies of non-conventional yeasts are usually low, which greatly limits the research and applications of these organisms. In this study, we aimed to enhance the ge...学位：工学硕士院系专业：化学化工学院_生物化工学号：2062010115149

Direct secretory expression of active microbial transglutaminase in Pichia pastoris

使用异源表达系统直接分泌表达具有活性的微生物谷氨酰胺转氨酶(MICrObIAl TrAnSgluTAMInASE,MTg)是目前最具前景的MTg生产方法之一,但由于产量较低无法实现工业化生产。毕赤酵母是近年来发展出的高效蛋白表达系统。通过采用PrO序列与成熟MTg基因共表达的策略,成功地实现了用重组毕赤酵母分泌表达具有活性的茂原链霉菌STrEPTOMyCES MObArAEnSE MTg。进一步通过对PrO序列和MTg基因拷贝数以及重组酵母培养条件的优化,最终使得MTg在1 l发酵罐中高密度发酵的酶活达到7.3 u/Ml,为MTg的工业化生产奠定了基础。Direct secretory expression of active microbial transglutaminase(MTG) using heterologous hosts is a promising strategy,although its production level still needs to be improved for industrial production.Pichia pastoris is one of the most efficient expression systems developed in recent years.In this study,secretory expression of active MTG was successfully achieved by co-expressing the pro sequence and mature MTG genes in P.pastoris.Furthermore,we optimized the copy number of pro/MTG expression cassettes and the fermentation conditions.MTG production level reached 7.3 U/mL in 1-liter fermentor through high density fermentation,providing the feasiblity for industrial scale preparation of MTG.国家自然科学基金(No.31000026); 中国科学院“知识创新”工程重要方向项目(No.KSCX2-EW-G-15-03)资助~

Species composition and ecological distribution of planktonic diatoms in the Changjiang River estuary during Spring

20 0 2年春季 ,在长江口附近海域典型赤潮高发区 2 8个大面站位采集了 5 3个样品 ,从中共鉴定出隶属于 31个硅藻属的 80个种和变种 ;其中种类多样性较高的属为圆筛藻属 (Coscinodiscus) ,有 17个种 ,斜纹藻属 (Pleurosigma) ,有 8个种和变种 ;数量上较优势的种为柔弱拟菱形藻 (Pseudo nitzschiadeli catissma) ,为 3.4 8× 10 3 cells·L-1,占 2 8.5 4 % ;具槽直链藻 (Melosirasulcata) ,为 1.4 3× 10 3 cells·L-1,占16 .98% ;尖刺拟菱形藻 (Pseudo nitzschiapungens) ,为 0 .71× 10 3 cells·L-1,占 9.85 % .它们在大部分站位中都有出现 ;柔弱拟菱形藻和尖刺拟菱形藻的高细胞密度区主要出现在 12 30E断面的站位 ,而具槽直链藻则主要出现在长江口的 31～ 32°N断面的站位 .浮游硅藻总细胞丰度变化于 0 .4 3× 10 3 ～ 2 3.3× 10 3 cells·L-1,平均 4 .6 1× 10 3 c... 【英文摘要】 water samples were collected from 28 stations in typical regions where redtide frequently occurred in the Changjiang River estuary during Spring, 2002. In total, 80 diatom species and varieties belonging to 31 genera were identified, among which, genera with high species biodiversity included Coscinodiscus which contained 17 species and Pleurosigma which contained 8 species and varieties. Quantitative analysis of diatom cell density showed that Pseudo-nitzschia delicatissma (3.48×10 3cells·L -1, 28.54%...国家重点基础研究发展规划资助项目 ( 2 0 0 1CB40 970 1)

《黄土高原杏子河流域自然资源与水土保持》

《黄土高原杏子河流城自然资源与水土保持>》一书详细地论述了流域的侵蚀地貌和土壤侵蚀及其防治；系统深入地分析和评价了流域气候、水、土地、植被、土壤水分、土壤肥力等各项自然资源，并提出了合理开发利用的途径与建设；详细地分析了农业生产、农作物品种、林业、果树、畜牧业、草场、水利水土保持工程、农业经济等及其与水土保持的关系，全面地论证了生产和治理中存在的重要问题，并提出了改进的途径与措施；对在农业自然资源与水土流失进行综合分析的基础上，制定了水土保持林草建设方案、土地合理利用与农林牧综合发展分区规划纲要、典型小流域综合治理示范。本专著是黄土高原典型流域综合考察的科学成果。对杏子河流域治理和类似地区的流域整治都有着重要的参考价值，本专著对探索有效地控制黄土丘陵区的水土流失，保护土地资源、最有效地发挥生产力以及提高水土保持科学水平也有重要意义。本项成果达到国内同类研究的先进水平

中国海区几种隐藻类鞭毛藻的扫描电镜观察(英文)

报道了来自香港吐露港、中国长江口及厦门港的3个属的3种隐藻及1个变种, 即半片藻Hemiselmis sp. Novarino、伸长斜片藻Plagioselmis prolonga Butcher ex Novarino, Lucas & Morrall、伸长斜片藻北方变种Plagioselmis prolonga var. nordica Novarino, Lucas & Morrall、尖尾全沟藻Teleaulax acuta (Butcher) Hill, 并对每个种类的分类特征、生态分布进行描述, 同时提供每个种的光镜和扫描电镜照片。其中, 半片藻属Hemiselmis Parke是中国海区首次记录的属, 而伸长斜片藻Plagioselmis prolonga和尖尾全沟藻Teleaulax acuta可以引发赤潮