Monoclonal antibodies against HPV11 virus-like particles: functional characteristics and application on quality assessment

目的分析和鉴定抗HPV11病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)鼠源单克隆抗体的性质,筛选性质和生物学活性较优的抗体,并初步应用于抗原或疫苗的质量分析。方法分别利用间接ELISA法和Western blot对HPV11的22株单克隆抗体的亚类、与HPV11 VLP的结合能力和构象敏感性进行检测;采用血凝抑制实验对单克隆抗体的血凝抑制活性进行分析;运用基于假病毒的抗体中和实验对单克隆抗体的中和活性进行鉴定,选出中和活性高的单抗进行两两配对,采用双抗夹心ELISA法捕获单抗并筛选合适的配对双抗。结果对22株单抗的性质进行了详细和完整的鉴定,并根据构象敏感性进行排序,筛选出6株型别特异、结合活性强且中和活性高的单抗(2A2、4A1-3、16G7、14A6、9C12和19C7);成功建立了基于单抗的双抗夹心(14A6∶Ag∶9C12-HRP)ELISA定量分析方法。结论获得了较全面的HPV11 VLP单抗性质信息,建立了重组HPV11抗原质量分析的双抗夹心ELISA法,为HPV11抗原的生命周期管理或尖锐湿疣疫苗的研发、工艺优化、产品放行和稳定性研究等提供了技术支持。Objective To quantitatively analyze the characteristics of a panel of murine anti-human papillomavirus( HPV) 11 L1-derived virus-like particle( VLP) monoclonal antibodies( m Abs) and establish the m Ab-based methods for antigen quality analysis. Methods A panel of 22 murine anti-HPV11 m Abs were characterized in details with their isotype,and binding affinity,conformational sensitivity were examined quantitatively in the direct binding ELISA and Western blot. The hemagglutination inhibition activity of m Abs were identified using the hemagglutination inhibition assay and the pseudovirus( Ps V) neutralization efficiency were examined quantitatively using the Ps V-based neutralization assay. The type-specific, highly conformational sensitive and neutralizing m Abs were selected to be used in the sandwich ELISA assay. Results Based on the quantitative and semi-quantitative results,six type-specific,highly conformational sensitive and neutralizing m Abs( 2A2,4A1-3,16G7,14A6,9C1 and 19C7) were identified. These m Abs,along with 10D6 were screened as the capture m Ab or as the detection m Ab in the sandwich ELISA. Conclusion The binding affinity,conformational sensitivity and neutralization efficiency of anti-HPV11 m Abs were characterized in details. A m Ab-based sandwich ELISA assay( 14A6∶Ag∶9C12-HRP) were developed,which could be used in the in vitro potency analysis of HPV11 VLP-based vaccine.重大新药创制(2015ZX09101034

五种西部药用植物及植物内生真菌的化学成分研究

我国西部山区，特别是青藏高原地区独特的生态环境孕育了数百种高原特有的药用植物，而这些药用植物必然也蕴含一些特殊的内生菌。对这些特有药用植物及其内生菌进行系统的化学成分研究，从中寻找结构新颖的活性成分和先导结构是我们研发具有自主知识产权新型药物的重要途径之一。本论文以液质联用和活性追踪为引导，利用各种色谱、波谱技术对2种藏药材（唐古特铁线莲、唐古特马尿泡）和1种西部特有属药用植物（斜萼草）以及2株分别从唐古特马尿泡和岩白菜植物体中分离出的内生真菌—Lachnum palmae和Saccharicola bicolor进行了化学成分研究，从中共分离鉴定出117个化合物，发现了35个新结构。生物活性筛选表明部分化合物具有一定的细胞毒活性和抑菌活性。详细研究结果如下：第一章报道了从藏药材唐古特铁线莲全草的正丁醇部位分离得到的18个齐墩果烷型三萜皂苷，其中新化合物8个（CT-1~CT-8），水解制备1个新的次级苷。其中，化合物CT-4~CT-7为在自然界少有的23,28位双糖链糖苷，CT-8及其次级苷CT-8a为含有多达8个糖基的皂苷。细胞毒活性测试显示，化合物CT-11~CT-14对所测细胞株SGC-7901、HepG2、U251MG和HL-60均具有细胞毒性（IC50范围为8.18~27.20 μmol/L），而化合物CT-4和CT-6也对SGC-7901表现出一定的细胞毒活性，IC50分别为24.14和21.35 μmol/L。第二章报道的是从藏药材唐古特马尿泡全草正丁醇部位分离鉴定出的22个化合物，其中新化合物3个（PT-13~PT-15），均为氯代酚苷类化合物。另外，化合物PT-7，PT-8，PT-10，PT-16和PT-18-PT-22为首次从该种植物中分离得到。细胞毒活性测试表明，化合物PT-13对SMMC-7721显示出微弱的细胞抑制作用，IC50值为38.1 μmol/L。第三章为斜萼草的化学成分研究。从该西部特有属药用植物全草醇提物的乙酸乙酯萃取部位分离鉴定了5个化合物，其中有3个新化合物（LU-1~LU-3），均为劳丹烷型二萜类；从其正丁醇萃取部位分离鉴定出19个苷类化合物（LU-6-LU-24），均为首次从该种植物中分离得到。细胞毒活性测试显示化合物LU-3对A549具有较弱的细胞毒活性，其IC50为22.4 μmol/L。第四章的内容是我们利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏诺立他对唐古特马尿泡内生真菌Lachnum palmae的次生代谢产物进行表观遗传调控的研究。从调控代谢物中分离鉴定出化合物25个，其中新化合物有9个，包括7个卤代异香豆素（LP-1~LP-7）和2个环戊烯酮衍生物（LP-20，LP-21）。抑菌活性测试表明卤代异香豆素（LP-1~LP-7）对细菌（Bacillus subtilis）和真菌（Cryptococcus neoformans, Penicillium sp.）显示出较好的抑菌效果，MIC值范围为20~55 μg/mL。第五章报道了利用OSMAC（一菌多产）策略对岩白菜内生真菌Saccharicola bicolor进行次生代谢产物调控的研究。从其发酵产物中共分离鉴定出化合物28个，有12个为新化合物，包括10个卤代环戊烯衍生物（SB-1~SB-10）和2个氯代酚苷类化合物（SB-27，SB-28）。抑菌活性测试显示卤代环戊烯衍生物（SB-1~SB-10）对细菌（Bacillus subtilis）和真菌（Cryptococcus neoformans, Penicillium sp.）显示出较好的抑菌效果，MIC值范围为15~55 μg/mL。最后一章为综述，概述了近年来科学家利用表观遗传修饰来调控微生物产物的多样性，进而开展新化合物寻找的新策略

OSI运输层软件设计与实现

国际标准化组织推出的开放系统互连模型（OSI RM），为信息处理、数据通信及开放系统互连提供了一种标准模式。各国计算机界都在积极研究和开发OSI产品。制定相应的国内标准，开发OSI软件已列为我国“七·五”攻关的重点项目，是信息处理和网络通信研究与开发的重点课题之一。本文根据ISO运输层标准，以独立性、可移植性、多协议类别动态选择为目标，以软件工程思想为指导，采用自顶向下的方法设计和实现了运输层软件。介绍了为提高软件独立性而划分的软件层次结构；用高级语言和标准接口以提高软件的可移植性；讨论了多协议类别动态选择的策略。软件实现了0、2类运输协议，具有同时支持多个采用不同协议类别的连接的能力。采用带优先级的协议事件处理方式，软件具有较大的灵活性

基于专利的冠状病毒技术发展分析

新型冠状病毒SARS⁃CoV⁃2 是目前已知的第7 种可以感染人的冠状病毒，尚无用于预防和治疗的药物。本文以全球人类冠状病毒的技术专利为研究对象，采用专利分析和文本挖掘的方法，分析了专利的技术发展趋势和技术分布特点，梳理了关键技术的最新发展动向，以期为SARS⁃CoV⁃2 检测技术、药物筛选、疫苗及抗体研发提供参考。</p

藏菖蒲烟曲霉的化学成分

为从藏药材内生菌次生代谢产物中寻找具有活性、结构新颖的化合物,对藏菖蒲中一株内生真菌烟曲霉(Aspergillus fumigatus)发酵液进行化学成分研究,采用多种色谱技术对乙酸乙酯部位进行分离和纯化,并运用波谱技术进行结构鉴定.共分离鉴定了15个化合物,分别为ergosterol endoperoxide(1)、phenazine-1-carboxamide(2)、bis(2-ethylhexyl)phthalate(3)、fumitremorgin B(4)、spirotryprostatin A(5)、spirotryprostatin C(6)、fumigaclavine C(7)、fumiquinazoline C(8)、pseurotin A(9)、azaspirofurans A(10)、3,5-dihydroxy-4-methyl-phthalaldehydic acid(11)、decumbic acid(12)、monomethylsulochrin(13)、cyclo[L-(4-hydroxyprolinyl)-L-leucin](14)和4,6-dihydroxy-5-methylphthalide(15).其中化合物2、3、11、12、14、15为首次从烟曲霉中分离

Chemical Constituents from Przewalskia tangutica

目的:对马尿泡全草化学成分进行研究。方法:采用各种色谱技术分离纯化马尿泡全草醇提物正丁醇部位的化学成分,并运用波谱技术进行结构鉴定。结果:从马尿泡正丁醇部位分离鉴定了12个化合物,分别为:东莨菪苷(1)、法荜枝苷(2)、芦丁(3)、queroetin-3-O-rutinoside-7-O-β-D-glucopyranoside(4)、原儿茶酸(5)、香草酸(6)、胸腺嘧啶(7)、尿嘧啶(8)、胞嘧啶(9)、腺嘌呤(10)、尿嘧啶核苷(11)、腺嘌呤核苷(12)。结论:其中,化合物3~5、8~12为首次从该植物中分离得到

响应面法优化污泥炭催化湿式过氧化氢氧化降解间甲酚模拟废水

以污水处理厂剩余污泥为原料制备硝酸改性活性炭,用于催化湿式过氧化氢氧化(CWPO)处理间甲酚模拟废水,以实现剩余污泥的资源化利用.使用物理吸附、程序升温脱附(TPD) 、X射线荧光光谱(XRF)等表征方法对污泥炭的物理化学性质进行测定.而后采用响应面法(RSM)优化污泥炭CWPO降解间甲酚的反应条件,选取反应温度、反应时间、初始pH值、过氧化氢(H_2O_2)投加量及催化剂投加量为影响因子,总有机碳(TOC)去除率为响应值,应用中心组合设计(CCD)建立响应值与各影响因子之间关系的二次多项式数学模型,采用后退回归法进行模型精简,并通过方差分析对模型进行可信程度检验.优化结果表明,在反应温度为60 ℃,反应时间为120 min,初始pH= 3.00,H_2O_2投加量为2.03 g?L~(-1),催化剂投加量为0.78 g?L~(-1)的条件下,可达到最佳效果,此时预测模型的TOC去除率为44.6%,间甲酚转化率为100%.通过模型验证实验得到的TOC去除率为46.6%,仅与理论值相差2.0%,在95%的置信区间内,说明该模型具有可靠性.最后采用GC-MS对污泥炭CWPO降解间甲酚中间产物进行分析

响应面法优化污泥炭催化湿式过氧化氢氧化降解间甲酚模拟废水

以污水处理厂剩余污泥为原料制备硝酸改性活性炭,用于催化湿式过氧化氢氧化(CWPO)处理间甲酚模拟废水,以实现剩余污泥的资源化利用.使用物理吸附、程序升温脱附(TPD) 、X射线荧光光谱(XRF)等表征方法对污泥炭的物理化学性质进行测定.而后采用响应面法(RSM)优化污泥炭CWPO降解间甲酚的反应条件,选取反应温度、反应时间、初始pH值、过氧化氢(H_2O_2)投加量及催化剂投加量为影响因子,总有机碳(TOC)去除率为响应值,应用中心组合设计(CCD)建立响应值与各影响因子之间关系的二次多项式数学模型,采用后退回归法进行模型精简,并通过方差分析对模型进行可信程度检验.优化结果表明,在反应温度为60 ℃,反应时间为120 min,初始pH= 3.00,H_2O_2投加量为2.03 g?L~(-1),催化剂投加量为0.78 g?L~(-1)的条件下,可达到最佳效果,此时预测模型的TOC去除率为44.6%,间甲酚转化率为100%.通过模型验证实验得到的TOC去除率为46.6%,仅与理论值相差2.0%,在95%的置信区间内,说明该模型具有可靠性.最后采用GC-MS对污泥炭CWPO降解间甲酚中间产物进行分析