重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定

根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列,设计并合成了6个89bp左右的DNA小片段,经重叠延伸PCR扩增获得464bp的rhLep的完整基因片段。构建pET22b(+)/rhLep表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%以上。表达产物用Ni2+亲和层析柱纯化,SDS-PAGE结果表明,含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD。MTT比色法实验显示,当低剂量(10~30ng/mL)时,rhLep具有促进内皮细胞生长的作用;在高剂量(50~225ng/mL)时,rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性。其最大杀伤率达到98.8%。吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用。以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础

李永康膏滋对小鼠胸腺端粒酶活性等免疫功能的影响

通过臭氧(O_3)致小鼠衰老模型,对各组抗衰老实验小鼠的生理和免疫功能进行检测,采用端粒重复序列分析(TRAP)方法检测衰老小鼠胸腺组织的端粒酶活性。李永康膏滋能使衰老小鼠爬绳、游泳和抗冻能力增强(P<0.05或P<0.01),血清总IgG浓度提高(P<0.01),脚掌发疱增重明显(P<0.01),胸腺指数增加(P<0.05或P<0.01);并使衰老小鼠胸腺端粒酶活性增强。表明李氏膏滋有延缓臭氧致小鼠衰老的作用,提高衰老小鼠体液和细胞免疫功能。使衰老小鼠胸腺端粒酶活性增强可能与该器官富含活化的淋巴细胞有关。教育部厦门大学细胞生物学和肿瘤细胞工程重点实验室开放研究基

诱骗受体DcR3的基因构建、表达及特异性鉴定

目的:构建适于原核表达的人诱骗受体DcR3基因,并进行重组蛋白的表达纯化及特异性鉴定。方法:查得人DcR3cDNA全序列,将其分段设计引物,通过重叠PCR获得DcR3基因。构建pET-22b(+)/DcR3表达载体,转化大肠杆菌Rosseta-gami,IPTG诱导表达,Ni柱纯化。采用ELISA进行特异性鉴定。结果:通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。ELISA结果表明所纯化的蛋白可与抗DcR3抗体发生特异结合。结论:诱骗受体DcR3基因的成功构建、表达及纯化,为进一步的功能研究奠定了基础

猪瘟病毒EO蛋白的原核表达及其重组蛋白活性测定

通过重叠PCR合成猪瘟病毒EO基因,将该片段定向插入到pET-22b载体中,构建原核表达载体pET-22b／EO,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,比较不同诱导条件下的蛋白表达,确定其最佳表达条件。重组蛋白主要以包涵体的形式表达,Ni2+亲和层析柱纯化蛋白,逐步透析法复性。通过方阵试验确定包被抗原的最适工作浓度,为了测定EO蛋白的活性,本文初步建立了检测猪瘟血清抗体水平的间接 ELISA方法,为开发检测猪瘟抗体诊断试荆奠定基础

猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸的研制

应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记PCV-2抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原和兔抗PCV-2抗体,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸。当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色。整个试验过程只需15min。试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点

数形结合思想在初中数学课堂教学中的渗透

初中数学学科的知识偏向于繁琐，主要以培养学生的数学应用能力为主，因此作为初中数学教师，在教学的过程中应当对教学方法和教学内容进行不断的研究，根据新课程改革的要求合理的安排课堂教学内容，从数学概念学科教学重难点等方面对数学学科进行理论研究和实践探索。近些年来，随着教育事业的不断发展，数形结合的思想在数学课堂教学中得到了广泛的应用，对于初中阶段的数学学习来说也是如此，数形结合的思想既够培养起学生的自主思考能力也有助于提高课堂教学效率，本文就是从数形结合思想在初中数学课堂上的应用展开的研究。</jats:p