Establishment and Characterization of a Targeting Tumor Vesseles System for Inducing Thrombosis

目的建立一种新型的靶向高效诱发肿瘤血管血栓栓塞体系磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子(Mf-A6-SA:b-TTf)。方法化学交联技术制备神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素、磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素和生物素-短截型组织因子交联物,凝血因子X活化实验鉴定复合体系活化凝血因子X的活力,荧光显微镜技术和普鲁士蓝染色法同时观察施加外界磁场后复合体系的靶向作用,凝血实验直接观察复合体系引入链霉亲和素:生物素的生物放大效应,体内生物分布实验观察复合体系的安全性。结果成功制备磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素及生物素-短截型组织因子,磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子体系保留有高效激活凝血因子X的活性,与靶点的结合具有靶向性及高效富集性,体内实验证实能安全有效诱发肿瘤血管栓塞。结论成功制备的具有靶向诱发肿瘤血管血栓栓塞体系磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子为进一步探索肿瘤血管的靶向治疗奠定基础。OBJECTIVE To establish a novel targeting tumor vessels system MF-A6-SA:B-tTF for efficiently inducing thrombosis.METHODS Chemical cross-linking technique was used to prepare a cross-linking agent of the A6-Streptavidin( A6-SA),MFA6-SA and Biotein-tTF(B-tTF).FX coagulation assay was used to test MF-A6-SA:B-tTF system's FX activity.Fluorescence microscopy and prussian blue staining were used to simultaneously observe the targeting activity of MF-A6-SA:B-tTF with an external magnetic field.Hemagglutination was directly used to study the system' s biological amplification by SA /B.Biodistribution experiment was used to observe the toxicity of MF-A6-SA:B-tTF.RESULTS MF-A6-SA and B-tTF were successfully prepared.MF-A6-SA:B-tTF system could activate FX,inducing the blood coagulating cascade powerfully.MF-A6-SA:B-tTF could be accumulated to the desired target area with targeting and induce thrombosis in tumor blood vessels in vitro and in vivo.CONCLUSION The double targeting tumor vessels system MF-A6-SA:B-tTF maybe provide a basis for developing the tumor blood vessels targeting therapy.国家自然科学基金资助项目(30973485;81172970); 国家级大学生创新性实验项目(201210384134

オルトバナジン酸ナトリウムによるp53転写非依存性アポトーシス抑制機構及び放射線防護効果

我々はチロシンホスファターゼ阻害剤として広く用いられているオルトバナジン酸ナトリウム（バナデート）が、DNA損傷誘導アポトーシスを抑制し、その抑制作用の標的分子が、p53であることを、明らかにした。これ迄に、バナデートのp53に対する抑制機構として、その構造を不活性型構造に変化させること、不活性化されたp53にはDNA結合能がなく、照射後のp53標的遺伝子の転写活性化が阻害されること、さらにp53遺伝子型の異なる細胞株、およびp53shRNAの細胞内恒常発現によって得られたp53ノックダウン細胞株の比較から、バナデートの抗アポトーシス作用のp53特異性を報告している。　さらに、他のp53転写阻害剤との比較や、ミトコンドリア局在シグナルを付加した改変p53ベクター導入実験等による詳細なp53経路の解析結果から、他のp53阻害剤に勝るバナデートの抗アポトーシス効果は、近年注目されているp53の転写非依存的なミトコンドリア経由のアポトーシス誘導作用を抑制することに基づくものであることを見出した。具体的には、転写非依存性経路に対するバナデートの効果としてp53とBcl-2の結合を抑制することを見出した。また、バナデート投与マウスの放射線照射後の急性障害抑制効果についても代表的なp53阻害剤であるピフィスリンalphaを凌ぐ防護効果が得られた。この発見は、効果的なアポトーシス制御を達成する為にはp53の転写活性を抑制するだけでなく、p53の転写非依存性の経路も抑える必要があることを意味し、より効果的なp53阻害剤を開発する上で非常に重要な知見であると考えられる。日本放射線影響学会第52回大