Construction of eukaryotic vector pcDNA3.1-flag-pygo2 and expression in C6 cell

目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ,HindⅢ酶切分析及测序检查,表明真核表达载体构建正确;瞬时转染C6细胞后,免疫细胞荧光染色及蛋白印迹检测表明转染细胞能够表达外源Pygo2基因。结论成功构建了pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并能够在真核细胞中进行表达,这为今后研究pygo2基因在胶质瘤中的作用机制奠定了基础。Objective To construct the eukaryotic expression vector pcDNA3.1-flag-pygo2 and express the combined protein in C6 cell line.Methods To extract total RNA from primary glial cell of mouse and to synthesize c DNA by RT-PCR,then design primer and clone whole segment of pygo2 gene.After the targeted gene was inserted into vector pcDNA3.1-flag,the recombined plamid was transformed into E coli DH5α for LB agar plate screening and the recombined plasmid were extracted and purified.After verification by double enzyme digestion and sequencing.,the constructed eukaryotic expression plamid was transfected to C6 cell line by lipofectamin method,finally the protein expression was detected by immunocytochemical staining as well as western blot.Results The new constructed vector was confirmed by restricted enzyme Eco R I,HindIII digestion assay and correct Pygo2 was verified by sequenceing.finally,pcDNA3.1-flag-hpygo2 can express exogenous pygo2 gene in glioma C6 cell line after transient transfection by the determination of immunocytofluorescent staining and western blot.Conclusion The new plamid pcDNA3.1-flag-pygo2 was constructed successfully,and can express fused protein in eukaryotic cell,which establish the foundation for future research on pygo2 gene function in human glioma

Base State with Amendments Spatio-Temporal Data Model Based on Operand Sequenc

传统的基态修正模型多以时序的方式选择基态进行操作,并且对时间段检索的处理也都是采用对时间点检索的简单扩展,忽视时间段内时刻连续相邻的特性.引入操作基态和操作数的概念,提出一种动态选择基态的基态修正时空数据模型,即检索时刻在相邻基态中选择操作数较小的基态作为操作基态,解决了时序检索方式选择操作基态时舍近求远而造成大量多余操作的问题,在时间段检索时提出了临时基态的概念,将当前检索时刻设定为临时基态,下一时刻在临时基态与固定基态中选择操作数较少的作为操作基态,大大减少重复操作,提高检索效率

离子液体体系电解铝技术的研究与应用进展

指出了传统高温电解铝工艺存在的严重问题,在此基础上总结了新型低温熔盐–离子液体的结构和性质,重点综述了近年来离子液体低温电解铝技术的特点、基础研究与应用进展. 通过系统分析表明,离子液体法的反应温度可降至100℃以下乃至室温附近,反应能耗一般低于10 kW×h/kg,同时也减少了CO_2, CO和氟化氢等有害物质的排放. 以铝为阳极时,该技术还能应用于低温铝精炼、铝合金与纳米铝的制备,不仅提高了反应效率和产物纯度,也扩展了铝产品种类和研究领域. 这主要归功于离子液体良好的物理化学性能和较强的结构可调性. 未来应进一步加深对体系构效关系的认识,建立电极反应的调控机制,实现技术的集成放大

多元蛋白质光学芯片

生物芯片是生物工程的新热点,它可以将大量分离式生物化学分析过程(例如:样品制备,生化反应和分离检测等)集成到小尺度的固体芯片载体上,进行快速处理和自动化检测.它将推动生物识别、分子生物学、疾病诊断和医疗、新药开发等领域的发展.目前,配合基因组工程,已经出现商品型的基因芯片,如:惠普公司(AgilentTechnologies)的组合核酸分析系统和清华大学生物芯片研究与开发中心研制的DNA芯片等.但是,基因仅仅是遗传信

一种波导微带转换器

本实用新型提供一种波导微带转换器，其包括：一矩形的波导；一介质基片，其包括一第一矩形基片以及一自该第一矩形基片向前垂直延伸进入波导内的第二矩形基片；一自第二矩形基片的最前端向后延伸设置在介质基片一面的金属导带，其包括从前至后依次连接的一探针段、一高阻线段、一微带过渡段以及一微带线段；以及一设置在介质基片另一面的接地金属层；其中，探针段的长度为0.485±0.005mm，宽度为0.322±0.005mm；高阻线段的长度为0.012±0.005mm，宽度为0.298±0.005mm；微带过渡段的长度为2.722±0.005mm，宽度为0.298±0.005mm。本实用新型的转换器低损耗、宽频带