新型壳聚糖季铵盐凝胶微球作为流感疫苗佐剂的研究

接种疫苗是预防H5N1禽流感爆发的有效手段，H5N1流感疫苗免疫原性较差，抗原用量高，需要添加佐剂以提高疫苗效果。壳聚糖微球作为颗粒型佐剂具有良好的生物相容性和免疫刺激性。然而，壳聚糖微球的制备及其作为疫苗佐剂的应用还存在以下的需求与问题：1）传统的壳聚糖微球制备方法（如机械搅拌法、凝聚法等）所制备的微球粒径不均一，产品的稳定性与重复性差；2）与包埋相比，抗原吸附过程简单，在细胞内易于释放抗原，而高抗原吸附率要求制备阳离子性、网络多孔的壳聚糖微球，以增大抗原与微球的接触面积与结合力；3）交叉提呈是细胞免疫应答的前提，有效的交叉提呈需要壳聚糖微球具备足够的质子泵作用以及pH敏感性，以促进抗原从溶酶体中释放；然而通常以戊二醛进行化学交联的壳聚糖微球中大量氨基被交联占用因而降低了微球的质子泵作用，且不具备pH敏感性。基于以上问题，本论文旨在开发一种新型壳聚糖季铵盐凝胶微球，有效提高H5N1流感疫苗的免疫效果并降低抗原用量。本文具体结论如下：1）采用快速膜乳化&mdash;热固化相结合的新型微球制备方法制备出粒径可控（807 nm，2.5 &mu;m和4.3 &mu;m）和季铵取代度可控（20% - 83%）的壳聚糖季铵盐凝胶微球，该方法不使用化学交联剂，凝胶微球呈阳离子性网状多孔结构。凝胶微球可以有效吸附H5N1裂解疫苗，吸附率高达90%。值得注意的是，其抗原释放行为具有明显的pH依赖性，而基于化学交联的壳聚糖季铵盐微球则对pH不敏感。2）研究发现壳聚糖季铵盐凝胶微球作为H5N1裂解疫苗的佐剂具有多重免疫增强机制：a：在注射部位形成&ldquo;抗原储库&rdquo;，募集炎症细胞；b：提高抗原胞吞率，基于其阳离子性和pH敏感性有效促进抗原从溶酶体途径中释放，为抗原交叉提呈提供基础；c：激活树突细胞，促进抗原提呈。而化学交联微球不能有效促抗原从溶酶体中释放，其对树突细胞的激活程度显著弱于凝胶微球。体内动物实验结果显示，凝胶微球可以显著提高小鼠体液与细胞免疫应答，诱导较为平衡的Th1与Th2混合型免疫应答。组间进行比较，结果发现凝胶微球组诱导的血凝抑制抗体滴度分别是铝佐剂组和化学交联微球组的1.9倍与2.0倍，具有杀伤功能的CD8+ T细胞增殖水平分别是铝佐剂和化学交联微球组的1.7和1.9倍，脾细胞中Th1型细胞因子IFN-&gamma;的分泌水平分别是铝佐剂和化学交联微球组的3.0和2.1倍。3）粒径与季铵取代度是壳聚糖季铵盐凝胶微球的两个重要参数，对凝胶微球的佐剂效应有重大影响。实验结果阐明了季铵取代度接近中间值（41%和60%）、粒径较小（807 &plusmn; 74 nm）的凝胶微球具备较为平衡的亲疏水性、表面电荷以及可质子化的氨基，可使凝胶微球的佐剂效应最大化，显著提高疫苗的免疫原性，并且与铝佐剂相比，凝胶微球有效节约75%的抗原用量。4）除裂解疫苗外，从溶酶体途径中逃逸同样是提高DNA疫苗免疫效果的关键所在。实验尝试以pcDNA3.1-GFP质粒为模型，进行凝胶微球作为DNA疫苗佐剂的研究。结果发现凝胶微球可以有效吸附紧缩质粒；更重要的是，在血清存在的条件下，凝胶微球的体外基因转染率是商业化转染试剂的2倍，说明壳聚糖季铵盐凝胶微球在生理条件下更稳定，具有作为DNA疫苗载体的潜力。综上所述，壳聚糖季铵盐凝胶微球具有多重免疫增强机制，可有效促进抗原提呈，并显著提高H5N1裂解疫苗的体液与细胞免疫应答，且具有作为基因疫苗载体的潜力，因此壳聚糖季铵盐凝胶微球是一种具有应用前景的疫苗佐剂。</p

Effects of Nickel Complex with Retinoic Acid on Proliferation and Differentiation of Leukemia HL-60 Cells

为了开发一种新型高效的维甲类抗癌药物,在无水、无氧、避光条件下合成了维甲酸镍的配合物,通过元素分析、摩尔电导、红外光谱、紫外光谱、差热及核磁共振氢谱测定了配合物的组成、结构和性质,其分子式为Ni(RA)2·3H2O.采用MTT比色法、克隆形成法及NBT还原试验分别研究了该配合物及全反式维甲酸(ATRA)对HL 60细胞增殖及分化的影响.结果表明,二者均能抑制HL 60细胞增殖并诱导其分化,尤其该配合物的作用明显强于全反式维甲酸(p0.05.In order to develop a type of higheffective antitumor drug of retinoic acid, a new complex of nickel with alltrans retinoic acid has been synthesized in darkness without oxygen, and characterized by elemental analysis, molar conductance, IR, UVVis absorption spectroscopies, thermal analyses and1HNMR spectrocopy. Its formula is described as Ni(RA)2·3H2O. The inhibitory effects of ATRA and it's nickel complex on HL60 cell lines have been investigated by using MTT colorimetric assay?clonic assay and NBT reductive assay . The result showed that ATRA and it's nickel complexes Ni(RA)2·3H2O both could inhibit proliferation and induce differentiation of HL60 cells. Especially, the complex Ni(RA)2·3H2O has far stronger effects on HL60 cells than the ligand ATRA (p0.05 (compared with control) .国家自然科学基金(50272027);; 福建省青年科技人才创新项目(2001J064)资

结合膜乳化及热固化技术制备壳聚糖季铵盐凝胶颗粒

目的:壳聚糖类凝胶颗粒具有较好的生物相容性及可生物降解性等多种优势,在药物领域得到了广泛的关注。但传统的制备方法不能有效地控制壳聚糖类凝胶颗粒的粒径及形貌,并需要采用戊二醛等具有毒性的化学交联剂,影响了其实际应用。方法:采用前期开发的温度敏感壳聚糖季铵盐智能水凝胶,与先进的膜乳化技术相结合,制备具有自固化性质的粒径均一可控的纳米及微米级微球,并初步考察其作为疫苗佐剂的应用。结果:所制备的壳聚糖季铵盐凝胶颗粒粒径均一、可控,制备方法简单、温和,具有较好的生物相容性。作为黏膜免疫佐剂时可以有效地提高体液及黏膜处的免疫应答,是一种具有较好前途的新型生物材料。结论:这一方法尤其适合于作为生物活性大分子..

壳聚糖微球及其与白油混合乳液对禽用新流二联疫苗佐剂的免疫效果

用不同粒径的壳聚糖季铵盐凝胶微球及其与白油的混合乳液吸附新城疫及禽流感灭活抗原,评价其对新流二联灭活疫苗的免疫增强效果.结果表明,吸附时间2 h、微球浓度2 mg/m L、微球粒径1&mu;m为吸附新流二联灭活抗原的最佳条件,抗原吸附率达90%.免疫SPF鸡后,壳聚糖季铵盐微球及混合乳液均能显著提高新城疫及禽流感病毒特异性抗体效价,且混合乳液组显著优于微球组.与白油佐剂相比,壳聚糖季铵盐微球及混合乳液均能显著增强细胞免疫,淋巴细胞增殖水平为纯抗原组的1.5倍,具有用作禽类疫苗佐剂的巨大潜力.</p

快速膜乳化与热固化法制备粒径均一的pH敏感壳聚糖季铵盐凝胶微球

以具有升温自固化特性的壳聚糖季铵盐/甘油磷酸钠混合溶液为水相,利用快速膜乳化与热固化法制备了粒径均一、pH敏感的壳聚糖季铵盐凝胶微球,考察了跨膜压力、水油相组成、水油相体积比及微孔膜孔径等对微球粒径、结构和药物包埋率的影响. 结果表明,得到粒径698±57.33, 1145±71.48, 2021±53.63及3984±191.72 nm、粒径分布窄(多分散系数<0.1)、药物包埋率高达75.49%±2.62%的凝胶微球. 所制微球生物相容性好,有明显的pH敏感性,中性和碱性环境下结构稳定,药物缓释,pH=7.4时24 h内药物累计释放率为34.6%;酸性环境下微球崩解,药物快速释放,pH=5.5时1 h内药物累计释放率高达79.6%

壳聚糖微球及其复合佐剂用作新流二联疫苗的免疫效果

接种白油佐剂灭活疫苗是目前养禽业防控新城疫及禽流感的主要措施,但白油佐剂存在潜在的安全性问题,且其细胞免疫增强效果不明显[1]。而壳聚糖微球是可降解的新型缓控释放载体,能够促进机体的体液及细胞双重免疫,作为疫苗佐剂具有广阔的应用前景。本研究的目的在于考察壳聚糖微球及其与白油的混合乳液替代商品化白油佐剂用于禽类疫苗制剂的可行性。首先利用快速膜乳化&mdash;热固化相结合的新型微球制备方法制备出粒径均</p

Progress in Reforming Purification Technology of Biomass Fuel Gas

The technologies on tar purification and component adjustment of biomass raw gases were reviewed. The influence factors such as gasification conditions and added materials of gasifier purification technology were analyzed. Some widely used gasifier downs

生物质粗燃气重整净化技术及其研究进展

对生物质粗燃气中焦油净化和组分调变技术进行了综述,分析了影响气化炉内净化技术的气化工况条件和气化炉添加料等因素,介绍了天然矿物催化剂、碳酸盐催化剂、镍基催化剂等目前应用广泛的气化炉下游净化重整催化体系,简要介绍了粗生物燃气的组分调变,对该领域目前存在的问题和发展方向进行了讨论