靶向Neuropilin-1的抗肿瘤研究进展

Neuropilin-1(NRP-1)又称神经鞭毛素蛋白,是一个大小为130～140 kD的非酪氨酸激酶跨膜蛋白,参与脊椎动物胚胎的神经和心血管系统发育。它作为一个多功能受体调节VEGF(血管内皮生长因子),PDGF(血小板衍生生长因子),bFGF(成纤维生长因子)等细胞因子的信号通路,与肿瘤血管新生和肿瘤转移密切相关。NRP-1被认为是一个新的肿瘤治疗靶点,近年来针对NRP-1为靶点的药物研究有不少新进展。本文主要介绍NRP-1的生物学特征,对肿瘤作用以及相关药物研究

靶向Neuropilin-1的抗肿瘤研究进展

Neuropilin-1(NRP-1)又称神经鞭毛素蛋白,是一个大小为130～140 kD的非酪氨酸激酶跨膜蛋白,参与脊椎动物胚胎的神经和心血管系统发育。它作为一个多功能受体调节VEGF(血管内皮生长因子),PDGF(血小板衍生生长因子),bFGF(成纤维生长因子)等细胞因子的信号通路,与肿瘤血管新生和肿瘤转移密切相关。NRP-1被认为是一个新的肿瘤治疗靶点,近年来针对NRP-1为靶点的药物研究有不少新进展。本文主要介绍NRP-1的生物学特征,对肿瘤作用以及相关药物研究

抗人NRP1单克隆抗体的活性鉴定及初步应用

目的鉴定抗人神经菌毛素1(neuropilin1,NRP1)单克隆抗体的生物活性并利用该抗体检测常见肿瘤细胞株NRP1蛋白的表达情况。方法腹水法制备4株抗NRP1单克隆抗体并用rProtein A亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测4株抗体的滴度水平,Western blot分析4株抗体结合NRP1蛋白的特异性,流式细胞术分析4株抗体结合NRP1蛋白的亲和力,共聚焦免疫荧光实验进一步验证抗体结合NRP1蛋白的能力;细胞免疫组织化学染色检测14株肿瘤细胞表达NRP1蛋白的情况。结果 4株抗体均能特异结合NRP1蛋白,其中A6结合NRP1能力最强,能结合在表达NRP1蛋白的细胞膜表面。细胞免疫组织化学染色结果显示NRP1在HepG2、C6、HEK293、BEL-7402、MDA-MB-453呈高水平表达,在U87、MGC803、MCF7、MDA-MB-231中表达水平相对较弱,而在U251、BGC823、H6、HT-29的表达介于两者之间,在SMMC-7721细胞中未检测到表达。结论 4株抗NRP1单克隆抗体均能特异结合NRP1蛋白,多种肿瘤细胞株均不同程度表达NRP1蛋白,为进一步探讨NRP1蛋白与肿瘤发生发展的关系奠定了基础

煤巷锚杆支护施工装备现状及发展趋势

锚杆支护施工装备是煤巷锚杆支护成套技术的重要组成部分，直接影响锚杆支护速度与质量。经过长期发展，我国煤矿开发出多种形式的锚杆支护施工装备，包括单体锚杆钻机、锚杆钻车、掘锚机、掘锚一体机、锚杆转载机及跨骑式锚杆钻车等。系统分析了6类锚杆支护施工装备的发展历程、技术性能、技术参数、适用条件及最新进展。单体锚杆钻机轻便、灵活、技术成熟，形成系列化产品，得到广泛应用。机载锚杆钻臂可集成于不同平台，形成各种集成化施工装备：锚杆钻车形成了从两臂到九臂的多种机型，可紧跟掘进装备、与掘进装备交替作业，多臂协同、多臂平行作业完成锚杆支护施工；将机载锚杆钻臂配置于悬臂式掘进机上，开发出多种形式的掘锚机，实现了掘进与锚杆支护施工2个功能；掘锚一体机实现了国产化，研制出支护平台前移的掘锚一体机、护盾式掘锚一体机及钻锚一体化掘锚一体机；研制出从两臂到七臂的锚杆转载机、十臂跨骑式锚杆钻车，实现了锚杆支护与掘进、运输分区作业。介绍了钻锚一体化锚杆支护技术与装备，包括钻锚一体化锚杆、泵注锚固剂、钻锚一体化钻臂、钻箱、锚杆仓、锚固剂泵注系统及智能控制系统，将传统锚杆施工6道工序简化为1道连续工序，实现了“一键打锚杆”自动化作业，显著提高了锚杆支护速度和自动化程度。指出了煤巷锚杆支护施工装备发展趋势：数智化锚杆钻臂；锚杆钻臂定位、位姿自主调节及多钻臂协同控制技术；锚杆（索）结构与材料优化、锚注材料升级及施工设备完善；环境动态感知及随掘围岩稳定性判别；锚杆支护施工装备故障诊断技术；巷道围岩变形与支护体受力在线监测；建立大数据平台，实现锚杆支护自动化、智能化

Exacerbated apoptotic effects of anti-human NRP-1 monoclonal antibody in colon cancer cell line LOVOin vitro

目的:研究抗人神经菌毛素1(nEurOPIlIn1,nrP-1)单克隆抗体对结肠癌lOVO细胞的促凋亡作用。方法:小鼠腹水法制备抗nrP-1单克隆抗体(nrP-1 MAb)并用rPrOTEIn A亲和柱纯化,间接ElISA检测抗体的滴度水平。细胞免疫荧光检测nrP-1蛋白在结肠癌细胞株lOVO上的表达,MTT法检测nrP-1 MAb对lOVO的生长抑制作用,dAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态,AnnEXIn V-fITC/PI流式细胞仪法检测nrP-1 MAb诱导lOVO细胞凋亡,WESTErn blOTTIng检测凋亡相关蛋白CASPASE-3、ClEAVEd CASPASE-3蛋白的表达。结果:SdS-PAgE和间接ElISA检测纯化的nrP-1 MAb纯度为95%、效价为2.56x10-5;细胞免疫荧光染色显示nrP-1定位于lOVO细胞膜;MTT法检测和AnnEXIn V-fITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,nrP-1 MAb对lOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;dAPI染色·荧光显微镜观察发现,nrP-1MAb可以诱导lOVO细胞核浓缩与碎裂;WESTErn blOTTIng检测到在nrP-1 MAb作用下,lOVO细胞裂解液ClEAVEd CASPASE-3条带信号增强、CASPASE-3条带信号减弱。结论:纯化的nrP1 MAb能抑制lOVO细胞的生长并诱导其凋亡。OBJECTIVE To investigate the exacerbated apoptotic effect of anti-human nerve pilifactor 1(neuropilin-1,NRP-1)monoclonal antibody(NRP-1 MAb)on colon cancer LOVO cells in vitro.METHODS NRP-1 MAb was prepared from ascites and purified by rProtein A affinity column and the titers were measured by indirect ELISA.The NRP-1 expression in colon cancer cell LOVO was detected by immunofluorescence;growth inhibition of LOVO cells treated with different concentration NRP-1 MAb was analyzed by MTT assay;DAPI staining was used to observe the morphology of apoptotic cells with Fluorescence microscopy;apoptosis rate of LOVO cells was determined by flow cytometry assay with Annexin V-FITC/PI;Western blotting was used to detect Caspase-3 protein expression.RESULTS The results of SDS-PAGE and indirect ELISA showed the purity of NRP-1 MAb was 95%and the titer was 2.56×10-5.Immunofluorescence staining indicated that the NRP-1 was localized on the membrane of LOVO cells.MTT assay and Annexin V-FITC/PI flow cytometry assay indicated that NRP-1MAb inhibited LOVO cells growth and induced LOVO cells apoptosis.Degradation and fragmentation of nuclear in LOVO cells treated with NRP-1 MAb were observed under a fluorescence microscope by DAPI staining;Western blotting detected that cleaved Caspase-3 band signal enhanced,while Caspase-3 band signal decreased after incubated LOVO cells with the NRP-1MAb.CONCLUSION NRP-1 MAb can inhibit proliferation and increase apoptosis of the LOVO cells.国家自然科学基金(编号:30973485;81172970); 福建省属公益类科研专项经费(编号:2011R1039-1