The optimized expression technology of marine animal-sourced antimicrobial peptides in Pichia pastoris and the development of antimicrobial peptide as feedstuff additive

抗生素污染问题是目前影响我国水产养殖业可持续健康发展的重大科技问题，抗生素（antibiotics）作为常用抗菌药物，被广泛应用于水产养殖业，但是抗生素超标所引起的细菌耐药性问题已成为全球公共健康问题，因此寻找抗生素的有效替代品是目前国内外本领域的研究热点之一。抗菌肽（antimicrobialpeptide）是先天性免疫的重要组分，广泛存在于生物界的各个门类，进化上相对保守，具有广谱抗菌活性、且不会产生细菌耐药性，被预言为最有希望替代抗生素的天然药物，具有广阔的应用前景。但直接从动物体内提取抗菌肽不适于未来产业化的要求，目前公认的最有效方法是基因工程表达，但考虑到在水产养殖业应用时大肠杆菌的...Antibiotic pollution is the major scientific and technological problem affecting the sustainable and healthy development of aquaculture industry in China. Antibiotics as antimicrobial drug, is widely used in aquaculture. However, the abuse of antibiotics has caused numerous problems, such as the bacterial resistance, which has become a global public health problem. Therefore, how to control the ab...学位：博士后院系专业：海洋与地球学院_海洋生物技术学号：201117005

Synthesis and Characterization of Functional Polymer Microgels

高分子凝胶是一种三维交联网络结构的高分子材料，具有多孔性、高稳定性和易功能化等特性。与宏观凝胶相比，高分子微凝胶表现出更快的传输速度和响应性能，在传感、催化、药物释放等领域有潜在的应用。因此，高分子微凝胶的合成及功能化一直是人们研究的热点。 众所周知，对一些挥发性有机小分子，尤其是生物标记分子的识别和检测，在环境监测、人体代谢及疾病诊断等领域具有非常重要的意义。其中，氨气是肾衰竭、螺旋杆菌和口腔疾病的一种生物标记物，其检测方法主要存在稳定性差，难以循环使用等缺点。丙酮与肺癌、糖尿病、充血性心力衰竭、脑疾病等有关，其检测方法主要局限于色谱法。因此，发展简单、高效的分子识别检测体系仍是非常有挑战...Polymer gels are three-dimensional crosslinked polymer networks which posses the properties of porosity, stability and easy functionalization etc. Compared with macrogels, microgels have faster transmission and responsiveness, having a wide range of prospective applications in sensing, catalysis, drug release, and other fields. Hence, synthesis and functionalization of microgels has been a hot top...学位：理学硕士院系专业：化学化工学院_高分子化学与物理学号：2052013115166

杂合抗菌肽Scy-Hep3在毕赤酵母中的分泌表达及其抗菌活性

为获得体外稳定表达的高抗菌活性新型抗菌肽,通过重叠延伸PCR技术获得了拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin (简记为Scy)和斜带石斑鱼抗菌肽Hepcidin 3 (简记为Hep3)的杂合抗菌肽基因scygonadinhepcidin3 (简记为scy-hep3),将scy-hep3与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-scy-hep3,用电转化法将其转化至毕赤酵母GS115菌中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得杂合抗菌肽Scy-Hep3,并进行抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-scy-hep3,用体积分数为0. 5%的甲醇诱导表达24 h,分泌表达上清液中获得了稳定表达的相对分子质量约24 000的表达产物,与预期杂合抗菌肽Scy-Hep3的大小相符;抗菌活性结果表明,杂合抗菌肽Scy-Hep3具有广谱抗菌活性,对被测的3种革兰氏阳性菌(溶壁微球菌Micrococcus lysodeikticus、谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus)和4种革兰氏阴性菌(施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri、荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和弗氏志贺氏菌Shigella flexneri)具有较强的抗菌活性(最小抑菌浓度MIC<12μmol/L);对比于单一的抗菌肽Scy和Hep3,杂合抗菌肽Scy-Hep3的抗菌活性显著增强。本研究结果将为杂合抗菌肽Scy-Hep3的生产和开发应用提供数据资料。国家自然科学基金资助项目(41676158);;福建省科技重大专项(2017NZ0004);;中央高校基本科研业务费专项(20720180117

海水青鳉雌激素受体基因的克隆、组织表达特性及环境雌激素EE2对其表达的影响

为了获得海水青鳉Oryzias melastigma雌激素受体的基因信息及其表达特性,采用RACE-PCR技术和实时荧光定量PCR方法,进行了雌激素受体基因的克隆、表达特性分析及其在17α-炔雌醇(EE2)暴露下的基因响应研究。结果表明:海水青鳉雌激素受体基因与其他脊椎动物雌激素受体基因同源性较高,特别是DNA结合结构域(DBD)在进化上高度保守,配体结合结构域(LBD)次之;OM-ERα/β1/β2在所检测的10种组织中均有表达,其中在青鳉肝脏、性腺、脾脏和肠中表达量较高;OM-ERα在肝脏中的表达和OM-ERβ1/β2在性腺中的表达,雌雄间存在显著性差异(P<0.05);在EE2浓度为5、50、500ng/L的水体中暴露96 h后,海水青鳉仔鱼中的分子标志物卵黄蛋白原基因(vtg1)被显著诱导(P<0.05),且呈浓度依赖关系;中浓度(50 ng/L)的EE2诱导仔鱼OM-ERβ1基因表达,OM-ERβ2对EE2暴露呈现低浓度诱导、高浓度抑制的趋势;攻毒试验结果表明,OM-ERα和vtg1之间存在一种正相关关系,暗示EE2可能主要通过ERα调控vtg1基因的表达;EE2攻毒下,β亚型存在一种倒U型的剂量-反应关系。研究表明:克隆获得的海水青鳉3个雌激素受体亚型基因OM-ERα/β1/β2,为后续开展海水模式鱼类雌激素受体相关研究提供了基础信息;OM-ERα/β1/β2的组织表达特性及EE2对仔鱼OM-ERα/β1/β2表达的不同调控,显示出海水青鳉3种ER亚型基因存在着不同的生理功能,且其对环境污染物的应答模式不同。国家自然科学基金资助项目(41276102

Recombinant production, antimicrobial and antiviral activities of both Scygonadin from Scylla paramamosain and hybrid peptide Scy-hepc

抗菌肽（antimicrobialpeptide）是先天性免疫的重要组分，广泛存在于生物界的各个门类，进化上相对保守，具有广谱的抗菌、抗病毒和抗肿瘤等作用。抗菌肽具有可见的应用前景，但直接从动物体提取抗菌肽不适于未来产业化的要求。本研究利用本实验室分离鉴定的拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin基因和大黄鱼抗菌肽Hepcidin基因，通过基因工程技术构建了Scygonadin基因及与大黄鱼抗菌肽Hepcidin基因联合的基因工程稳定表达菌株，优化其表达与纯化工艺，研究其基因表达产物的抗菌与抗病毒活性、抗菌机制以及抗菌（毒）谱，为未来抗菌肽的产业化提供技术支撑；同时利用基因表达产物制备Scygona...Antimicrobial peptides are important components of the natural defenses of living organisms. It was widespread distribution throughout the animal and plant organisms, evolutionarily ancient weapons with high activity against bacteria, fungi, virus, cancer and so on. It suggested that antimicrobial peptide could be used as a substitute for antibiotics. But the peptide extracted directly from the an...学位：理学博士院系专业：海洋与环境学院环境科学与工程系_海洋生物技术学号：2262006015335

拟穴青蟹抗菌肽SCY2在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

为深入研究拟穴青蟹Scylla paramamosain阴离子抗菌肽SCY2的抗菌活性,将抗菌肽SCY2的成熟肽序列与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-SCY2,用电击法将其转化至毕赤酵母GS115菌株中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得目的蛋白,并进行质谱鉴定和抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-SCY2,用0.5%甲醇诱导表达24 h后,分泌表达上清液中获得了相对分子质量约11 000的稳定表达产物,与预期的抗菌肽SCY2成熟肽的大小相符;纯化后的目的蛋白经质谱鉴定,有6个肽段的氨基酸序列与预期一致;抗菌活性结果表明,抗菌肽SCY2能抑制革兰氏阳性菌生长,对被测的革兰氏阴性菌无抑杀活性(>50μmol/L);抗菌肽SCY2同抗生素进行协同抗菌试验,发现SCY2与四环素协同使用对荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens的抑杀存在协同作用,SCY2与青霉素协同使用对施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri的抑杀具有增强作用。研究表明,较低浓度的抗生素与抗菌肽协同使用可有效地减少抗生素的使用,降低食品中抗生素的残留风险。国家自然科学基金资助项目(41676158);;福建省科技重大专项(2017NZ0004/2017NZ0004-1);;福建省中青年教师教育科研项目(JAT170008

Control of Shimadzu Electric Balance by Using Computer

利用岛津天平提供的接口控制指令,采用Visual Basic 6.0结合Access 2,000开发设计了岛津天平的计算机控制系统。使用该系统可将操作者从烦琐的天平按键步骤中解放出来,同时将数据直接汇集到计算机,方便日后的数据分析。本文着重从硬件、软件两个方面介绍了实现电子天平计算机控制的原理、方法并简单介绍了程序实现的功能。With the help of control eommand from Shimadzu,we developed a software for controlling electric balance under VB6.0 and Access 2.000.The software could set balance's parameters conveniently,gather experiments data to computer.The related hardware was designed by ourselves.This paper mainly introduces how to control electric balance by using computer from two aspects:hardware and software designing,introducing some fumcions of this program

拟穴青蟹抗菌肽Crustin新变体的表达特性与抗菌功能

Crustins是一类较早发现并广泛分布在甲壳动物中且富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽,能够参与抗细菌的免疫应答。从拟穴青蟹（Scylla paramamosain）中克隆获得Crustin基因,命名为SpCrus1a,其cDNA序列全长744 bp,开放阅读框编码113个氨基酸,成熟肽分子量10.03 kDa,等电点8.30。表达分析结果发现其转录本主要存在于鳃、卵巢、上皮组织中,脂多糖刺激后SpCrus1a会上调表达。体外合成SpCrus1a的第29～47位氨基酸进行抗菌活性实验发现,其对革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性,对被测的革兰氏阴性菌抗菌活性较弱或无抗菌活性。合成肽Sp Crus1a29-47能够在较短时间内杀死绝大多数的金黄色葡萄球菌,2 h内杀死全部的金黄色葡萄球菌。扫描电镜发现合成肽Sp Crus1a29-47可造成金黄色葡萄球菌表面结构崎岖不平,高浓度Sp Crus1a29-47造成细菌的大量死亡。上述结果表明,SpCrus1a是抗菌肽Crustins的新变体。国家自然科学基金(U205123,31172438);;厦门南方海洋研究中心科技项目(14PYY050SF03

低场核磁共振技术在鱼用冻干疫苗保护剂筛选中的应用

为筛选适合鱼类冻干疫苗中使用的保护剂,采用低场核磁共振技术(LF-NMR)对冻干后不同保护剂中的水分分布和迁移规律进行了分析。根据水中氢质子的弛豫时间,可将保护剂中的残留水分为结合水、不易移动水和自由水3种形态。结果显示:冷冻干燥过程中二次干燥温度对甘露醇和蔗糖中残留水的分布有较大影响,随着温度从4℃升高到37℃,大部分自由水解吸而小部分转化为结合水。当冻干后的样品暴露在相对湿度43%和温度25℃的环境中时,大部分保护剂吸收水分,并将其固定为结合水,而甘露醇中的部分结合水则转变为自由水,并解吸到环境中。不同冻干保护剂中的水分分布和迁移并不相同,代表其具有不同的水分结合能力。该研究结果有助于鱼用冻干疫苗中保护剂的筛选和冻干工艺的优化,以便获得更加稳定的疫苗产品。厦门海洋高技术产业基地创业创新共享服务平台项目(16PFW008SF15);;福建省高职院校海洋生物应用技术协同创新中心(2017);;“十三五”北海市海洋经济创新发展示范项目(Bhsfs003,Bhsfs009);;2010海洋公益行业科研专项(201005020-1

Progress of Antimicrobial Peptides as Feed Additive

抗菌肽是生物体抵抗外界病原体侵袭而产生的一类小分子活性多肽,是生物体内先天性防御系统的重要组成部分。抗生素污染问题是目前影响我国畜牧与水产养殖业可持续健康发展的重大科技问题,由此引起的养殖产品中违禁抗生素残留成为制约我国出口创汇和食品安全的瓶颈,饲料中大量添加抗生素是导致抗生素超标的主要原因之一。寻找能够替代抗生素的环保型饲料添加剂,研制出无抗生素的环境友好型饲料,是我国畜牧与水产养殖业健康发展的迫切需求。就抗菌肽的来源,不同功能以及作为饲料添加剂在养殖中的应用作一简要综述。。Antibacterial peptides or Antimicrobial peptides(AMPs), a class of small-molecule active peptides, are an important component of the innate defense system of organism to resist against invasion of foreign pathogens.Antibiotics pollution is one of the most important issues that would affect the sustainable development of stock farming and aquaculture industry in our country.Antibiotic residues in agricultural(including aquaculture)products involved in this issue is the bottleneck of our food safety and exports, and excessive antibiotics addition to feedstuff is one of the main reasons for antibiotic residues.Thus, finding and developing alternatives for antibiotics is the urgent requirement of healthy development of animal husbandry and aquaculture industry in China.In this article,the sources, function and its application as feed additives in livestock were reviewed..国家海洋公益性行业科研专项(201105027