Optimization of separation methods and culture system of chicken embryonic stem cells in vitro

背景:胚胎干细胞是从动物早期胚胎的内细胞团或原始生殖细胞分离出来的具有发育全能性的一种未分化的无限增殖细胞系。而鸡胚胎干细胞则是从X期鸡胚的胚盘分离而来。目的:优化鸡胚胎干细胞分离方法和离体培养体系。方法:采用滤纸纸环-发环的方法从X期鸡胚分离胚盘细胞,并采用STO细胞作为饲养层和大鼠肝细胞(brl)条件培养基(CM)+细胞因子作为离体培养体系对分离的胚盘细胞进行培养。结果与结论:滤纸纸环-发环法获得的完整胚盘率为75%~85%,克隆形成率约为50%。brl-CM+饲养层培养体系,鸡胚胎干细胞可传至7代,而brl-CM+饲养层+细胞因子培养体系,鸡胚胎干细胞可传至25代。分离到的鸡胚胎干细胞,经碱性磷酸酶染色、SSEA-1染色鉴定,表明鸡胚胎干细胞处于未分化状态。提示,实验不仅优化了鸡胚胎的分离方法,获得完整且杂质少的胚盘,而且进一步优化了鸡胚胎干细胞体外培养体系。BACKGROUND:Embryonic stem cells are undifferentiated permanent cell line derived from inner cell mass cells and primordial germ cells of animal's early embryos.Chicken embryonic stem cells are derived from the blastodermal of a X-stage embryo.OBJECTIVE:To optim the separation method and in vitro cultural system of chicken embryonic stem cells.METHODS:The X-stage chicken embryos were isolated by using a small square of ?lter paper with a hole punched in the center,and the blastodermal cells were isolated by using the hair loop.STO cells were used to make feeder layer;at the same time,BRL-CM and cytokine were also used for chicken embryonic stem cells in vitro cultural system.RESULTS AND CONCLUSION:The filter paper loop and the hair loop could obtain complete the blastoderm,and the successful percentage was 75%-85%.The colony formation rate was about 50%.After culture in the BRL-CM + feeder layer + cytokine culture system,the passage of CES cells is the seventh generation;BRL-CM + feeder layer + cytokines,cultured chicken embryonic stem cells could passage to the 25th generation.Isolated chicken embryonic stem cells were in an undifferentiated state detected by alkaline phosphatase staining and SSEA-1 staining.The findings indicate that this experiment not only optimized the isolation method of chicken embryonic stem cells to obtain complete and pure embryos,but also further improved the in vitro culture system of chicken embryonic stem cells.国家973项目(2009CB941600)资助;国家自然科学基金项目(31072101)资助---

两种戊型肝炎IgG抗体检测试剂的比较

目的比较2种国产戊型肝炎IgG抗体诊断试剂(E2-IgG和X-IgG)的特异性与敏感度。方法利用2种试剂对2006年江苏省某市普通人群的流行病调查血清标本460份和经过巢式逆转录聚合酶链式反应(nest-RT-PCR)鉴定为HEV核酸阳性的临床戊型肝炎患者血清标本72份进行平行检测,并以免疫印迹实验(Westernblot,WB)和中和单抗阻断试验进行验证。结果1.460份流行病调查血清标本中WB阳性188份。2.188份WB阳性标本中E2-IgG的检测敏感度为99.5,特异度为99.6,阳性预测值99.5,阴性预测值99.6,准确性99.6;X-IgG的检测敏感度为21.3,特异度为97.4,阳性预测值85.1,阴性预测值64.1,准确性66.3。3.E2-IgG阴、阳性A450/A620值的分布在临界值附近分界明显,小于临界值的A450/A620值取对数后呈正态分布,而阳性血清A450/A620值的高低与其WB的反应强度正相关。4.E2-IgG阳性、X-IgG阴性的血清共148份,中和单抗阻断阳性率为98,WB阳性率99.3。5.经PCR鉴定为HEV核酸阳性的急性戊型肝炎患者血清中E2-IgG敏感度98.6,X-IgG敏感度80.6(χ2=10.7,P<0.01)。结论E2-IgG在不同人群中均能较好的反映体内戊型肝炎抗体存在的真实情况

Rh/SiO_2催化剂上甲烷部分氧化制合成气的核磁共振研究

利用1HMASNMR技术 ,在甲烷部分氧化 (POM)制合成气反应条件下研究了Rh/SiO2 催化剂上氢与金属的相互作用及反应机理 .结果发现 ,氢气在Rh/SiO2 上解离吸附后可能有四种存在形式 :化学位移为δ =- 10 0～ - 12 0的可逆 (αM)和不可逆 (αI)吸附氢物种 ,δ =0～ - 10 0的“氢云”或“氢雾”形式的氢物种和δ =3 0的溢流氢物种 .溢流氢物种是由可逆吸附的氢物种和“氢云”或“氢雾”状态的氢物种溢流到SiO2 上并弱吸附在桥式氧 (Si-O-Si)附近而形成的 .溢流氢物种活化晶格氧 ,形成一种POM反应的活性氧物种OH-.活性氧物种OH-反溢流到Rh上 ,并与CH4解离吸附在Rh上的CHx 物种反应生成含氧中间物种CHxO .CHxO物种的化学位移为 5～ 7.O2 参与CHxO物种的进一步氧化 ,或补充溢流氢夺取桥式氧后形成的缺陷位上的晶格氧 ,在高温 (973K)反应条件下 ,O2 可能优先补充缺陷位上的晶格氧 ,使CHx 的氧化按表面反应机理进行

Rh/SiO_2催化剂上甲烷部分氧化制合成气的核磁共振研究

利用1HMASNMR技术 ,在甲烷部分氧化 (POM)制合成气反应条件下研究了Rh/SiO2 催化剂上氢与金属的相互作用及反应机理 .结果发现 ,氢气在Rh/SiO2 上解离吸附后可能有四种存在形式 :化学位移为δ =- 10 0～ - 12 0的可逆 (αM)和不可逆 (αI)吸附氢物种 ,δ =0～ - 10 0的“氢云”或“氢雾”形式的氢物种和δ =3 0的溢流氢物种 .溢流氢物种是由可逆吸附的氢物种和“氢云”或“氢雾”状态的氢物种溢流到SiO2 上并弱吸附在桥式氧 (Si-O-Si)附近而形成的 .溢流氢物种活化晶格氧 ,形成一种POM反应的活性氧物种OH-.活性氧物种OH-反溢流到Rh上 ,并与CH4解离吸附在Rh上的CHx 物种反应生成含氧中间物种CHxO .CHxO物种的化学位移为 5～ 7.O2 参与CHxO物种的进一步氧化 ,或补充溢流氢夺取桥式氧后形成的缺陷位上的晶格氧 ,在高温 (973K)反应条件下 ,O2 可能优先补充缺陷位上的晶格氧 ,使CHx 的氧化按表面反应机理进行

猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸的研制

应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记PCV-2抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原和兔抗PCV-2抗体,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸。当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色。整个试验过程只需15min。试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点