EVALUACIÓN ANALGÉSICA PERIOPERATORIA DEL ACETAMINOFÉN EN PERRAS SOMETIDAS A OVARIOHISTERECTOMÍA ELECTIVA

Tesis de doctorado que evalúa el efecto analgésico del acetaminofén en perras ovarihisterectomizadas.La administración de analgésicos antiinflamatorios no esteroidales (AINES) para el control del dolor post-quirúrgico en perros es una práctica común, debido a sus efectos analgésicos, antiinflamatorios y antipiréticos. En el presente trabajo se realizaron dos estudios. En el experimento 1, el objetivo fue evaluar la analgesia post-operatoria del acetaminofén (paracetamol) a través de la utilización de las escalas de reconocimiento clínico del dolor DIVAS (Escala Dinámica e Interactiva Analógica Visual) y UMPS (Escala de la Universidad de Melbourne), en perras sometidas a ovariohisterectomía electiva. Además de valorar la seguridad y eficacia clínica del uso del acetaminofén en perros mediante pruebas de funcionamiento hepático y renal en el post-operatorio inmediato. Para ello, se utilizaron 30 perras de diferentes razas que fueron asignadas aleatoriamente a uno de los tres grupos de tratamiento: acetaminofén [GACET; n=10, 15 mg kg-1 intravenoso (IV)], carprofeno (GCARP; n=10, 4 mg kg-1 IV) y meloxicam (GMELOX; n=10, 0.2 mg kg-1 IV). Todos los tratamientos se administraron 30 minutos antes de la cirugía y posterior a esta durante 48 horas. En este período el acetaminofén se administró por vía oral cada 8 horas (15 mg kg-1); el carprofeno (4 mg kg-1) y el meloxicam (0.1 mg kg-1) se administraron por vía IV cada 24 horas. Durante el postoperatorio, los sistemas de puntuación del dolor DIVAS y UMPS fueron medidos a las 1, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 36 y 48 horas post-cirugía. Para evaluar la seguridad clínica de los tratamientos, se recolectaron muestras de sangre de la vena yugular para realizar la medición de enzimas ALT, AST, ALP, y los metabolitos bilirrubina directa, bilirrubina indirecta, bilirrubina total, creatinina, urea, albúmina y glucosa. Esto fue realizado en T0 (pre-anestesia; TBASAL), 48 y 96 horas después de la cirugía (T48, T96). Los resultados indican que en la evaluación clínica del dolor de todos los grupos de estudio, hubo una reducción gradual en la percepción del mismo durante el postoperatorio en ambos sistemas de puntuación; no obstante, también fue observado que ninguna escala difirió significativamente entre los tres grupos de tratamiento (P>0.05) en cada momento de evaluación durante las 48 horas post-cirugía. En cuanto a los parámetros bioquímico séricos, sólo la ALT aumentó significativamente en T96 en el GACET y GCARP con respecto a los valores basales (P<0.01). El resto de los analitos séricos evaluados se mantuvo en rangos normales. En el experimento 2 bajo el mismo diseño experimental de tratamientos administrados, el objetivo fue evaluar el efecto analgésico perioperatorio del acetaminofén 2 administrado pre y post-quirúrgicamente en perras sometidas a ovariohisterectomía electiva a través de la medición del índice de la actividad del tono parasimpático (PTA). Este parámetro hemodinámico fue medido 60 minutos antes de la cirugía (TBASAL) y durante el transquirúrgico en la aplicación de estímulos nociceptivos: colocación de las pinzas de campo backhouse (TPINZ), incisión de piel y abordaje quirúrgico primario (TINC), ligadura y extracción de pedículo ovárico izquierdo (TOVI) y derecho (TOVD), ligadura y transfixión del cuello uterino (TLIGUT), sección quirúrgica del cuello uterino (TCUT), reconstrucción de peritoneo y planos anatómicos musculares (TMUSC) y sutura de piel (TSUT). Durante el postoperatorio, el índice PTA fue valorado a las 1, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 36 y 48 horas, en los mismos tiempos en que fueron evaluadas las escalas de reconocimiento de dolor DIVAS y UMPS. Los resultados obtenidos en la medición del índice PTA basal para GACET fue 65 ± 8, para GCARP 65 ± 7 y para GMELOX 62 ± 5. Durante los diferentes tiempos transquirúrgicos, los valores promedio de índice PTA indican que GACET (76 ± 14) y GMELOX (72 ± 18) muestran tendencia a manifestar mayores niveles en comparación con GCARP (62 ± 13) desde el inicio del procedimiento quirúrgico sin que esto pudiera comprobarse estadísticamente, ya que no hubo diferencias significativas entre grupos de tratamiento ni entre los tiempos quirúrgicos evaluados (P>0.05). En el postoperatorio, el índice PTA fue de 65 ± 9 en el GACET, 63 ± 8 en el GCARP y 65 ± 8 en el GMELOX. Los resultados tampoco mostraron diferencias estadísticamente significativas con los valores basales o entre los tratamientos (P>0.05). El índice PTA postoperatorio mostró una sensibilidad del 40%, especificidad del 98.46% y valor predictivo negativo del 99.07% con respecto a la escala validada de UMPS. En conclusión, el acetaminofén puede considerarse una herramienta para el tratamiento efectivo del dolor perioperatorio agudo en perros, ya que mostró la misma eficacia clínica que el meloxicam y el carprofeno para la analgesia postquirúrgica en perras sometidas a ovariohisterectomía electiva. Además, la evidencia del uso de este medicamento no condujo a reacciones adversas o cambios en los parámetros evaluados, lo que indica su seguridad clínica. Finalmente, destacar que el índice PTA representa una medición objetiva del comfort y analgesia postoperatoria, por lo que es una herramienta que podría ayudar a predecir las respuestas hemodinámicas asociadas con el dolor

Validation des modèles de pharmacologie de sécurité et évaluation de la valeur thérapeutique de l'oxytocine dans le traitement de l'infarctus du myocarde

En février, 2009 un rapport de PHRMA (Pharmaceutical Research and Manufacturers of America) confirmait que plus de 300 médicaments pour le traitement des maladies cardiaques étaient en phase d’essais cliniques ou en révision par les agences règlementaires. Malgré cette abondance de nouvelles thérapies cardiovasculaires, le nombre de nouveaux médicaments approuvés chaque année (toutes indications confondues) est en déclin avec seulement 17 et 24 nouveaux médicaments approuvés en 2007 et 2008, respectivement. Seulement 1 médicament sur 5000 sera approuvé après 10 à 15 ans de développement au coût moyen de 800 millions $. De nombreuses initiatives ont été lancées par les agences règlementaires afin d’augmenter le taux de succès lors du développement des nouveaux médicaments mais les résultats tardent. Cette stagnation est attribuée au manque d’efficacité du nouveau médicament dans bien des cas mais les évaluations d’innocuité remportent la palme des causes d’arrêt de développement. Primum non nocere, la maxime d’Hippocrate, père de la médecine, demeure d’actualité en développement préclinique et clinique des médicaments. Environ 3Évoluant parmi les contraintes et les défis des programmes de développements des médicaments, nous avons évalué l’efficacité et l’innocuité de l’oxytocine (OT), un peptide endogène à des fins thérapeutiques. L’OT, une hormone historiquement associée à la reproduction, a démontré la capacité d’induire la différentiation in vitro de lignées cellulaires (P19) mais aussi de cellules souches embryonnaires en cardiomyocytes battants. Ces observations nous ont amené à considérer l’utilisation de l’OT dans le traitement de l’infarctus du myocarde. Afin d’arriver à cet objectif ultime, nous avons d’abord évalué la pharmacocinétique de l’OT dans un modèle de rat anesthésié. Ces études ont mis en évidence des caractéristiques uniques de l’OT dont une courte demi-vie et un profil pharmacocinétique non-linéaire en relation avec la dose administrée. Ensuite, nous avons évalué les effets cardiovasculaires de l’OT sur des animaux sains de différentes espèces. En recherche préclinique, l’utilisation de plusieurs espèces ainsi que de différents états (conscients et anesthésiés) est reconnue comme étant une des meilleures approches afin d’accroître la valeur prédictive des résultats obtenus chez les animaux à la réponse chez l’humain. Des modèles de rats anesthésiés et éveillés, de chiens anesthésiés et éveillés et de singes éveillés avec suivi cardiovasculaire par télémétrie ont été utilisés. L’OT s’est avéré être un agent ayant d’importants effets hémodynamiques présentant une réponse variable selon l’état (anesthésié ou éveillé), la dose, le mode d’administration (bolus ou infusion) et l’espèce utilisée. Ces études nous ont permis d’établir les doses et régimes de traitement n’ayant pas d’effets cardiovasculaires adverses et pouvant être utilisées dans le cadre des études d’efficacité subséquentes. Un modèle porcin d’infarctus du myocarde avec reperfusion a été utilisé afin d’évaluer les effets de l’OT dans le traitement de l’infarctus du myocarde. Dans le cadre d’un projet pilote, l’infusion continue d’OT initiée immédiatement au moment de la reperfusion coronarienne a induit des effets cardiovasculaires adverses chez tous les animaux traités incluant une réduction de la fraction de raccourcissement ventriculaire gauche et une aggravation de la cardiomyopathie dilatée suite à l’infarctus. Considérant ces observations, l’approche thérapeutique fût révisée afin d’éviter le traitement pendant la période d’inflammation aigüe considérée maximale autour du 3ième jour suite à l’ischémie. Lorsqu’initié 8 jours après l’ischémie myocardique, l’infusion d’OT a engendré des effets adverses chez les animaux ayant des niveaux endogènes d’OT élevés. Par ailleurs, aucun effet adverse (amélioration non-significative) ne fût observé chez les animaux ayant un faible niveau endogène d’OT. Chez les animaux du groupe placebo, une tendance à observer une meilleure récupération chez ceux ayant des niveaux endogènes initiaux élevés fût notée. Bien que la taille de la zone ischémique à risque soit comparable à celle rencontrée chez les patients atteints d’infarctus, l’utilisation d’animaux juvéniles et l’absence de maladies coronariennes sont des limitations importantes du modèle porcin utilisé. Le potentiel de l’OT pour le traitement de l’infarctus du myocarde demeure mais nos résultats suggèrent qu’une administration systémique à titre de thérapie de remplacement de l’OT devrait être considérée en fonction du niveau endogène. De plus amples évaluations de la sécurité du traitement avec l’OT dans des modèles animaux d’infarctus du myocarde seront nécessaires avant de considérer l’utilisation d’OT dans une population de patients atteint d’un infarctus du myocarde. En contre partie, les niveaux endogènes d’OT pourraient posséder une valeur pronostique et des études cliniques à cet égard pourraient être d’intérêt.In february 2009, a report from PHRMA (Pharmaceutical Research and Manufacturers of America) confirmed that more than 300 drugs for treatment of cardiovascular diseases were in clinical trials or under review by regulatory agencies. Despite the abundance of new cardiovascular therapies, the number of new drugs approved each year (all indications combined) is declining steadily with only 17 and 24 new drugs approved in 2007 and 2008, respectively. Only 1 drug out of 5000 candidates will be approved after 10 to 15 years of development with an average cost of$800 millions. Several initiatives have been launched by regulatory agencies to increase the success rate in drug development but results are still awaited. This stagnation is attributed to the lack of efficacy of several drug candidates but safety assessments are the leading cause of drug development discontinuation. Primum non nocere, the maxim from Hippocrate, father of medicine, remains of major relevance in preclinical and clinical drug development. Over the past 20 years, approximately 3% of approved drugs were subsequently withdrawn from the market due to adverse effects. Cardiovascular adverse effects represent the most frequent cause of drug development discontinuation or withdrawal (27%) followed by effects on the nervous system. After defining the context of safety pharmacology evaluations and the use of biomarkers in drug development, we validated safety pharmacology models to investigate drug-induced cardiovascular, respiratory and neurological effects. As we progressed within constraints and challenges of drug development, we evaluated the efficacy and safety of oxytocin, an endogenous peptide with therapeutic potential. Oxytocin (OT), a hormone historically associated with reproduction, demonstrated the ability to induce in vitro differentiation of cell lines (P19) but also embryonic stem cells into beating cardiomyocytes. These observations lead us to consider the use of OT as a treatment for myocardial infarct. To achieve this ultimate goal, we first evaluated the pharmacokinetic of OT in an anesthetized rat model. These investigations highlighted the unique characteristics of OT including a very short half-life and a non-linear pharmacokinetic profile in response to the dose. Cardiovascular effects of OT in healthy animals were then evaluated in various species. In preclinical research, the use of various animal species and state of consciousness (conscious or anesthetized) is recognized as one of the best strategies to increase the predictive value of results obtained in animals to the human response. Our initial investigations of OT treatment regimens used various animal models including conscious and anesthetized rats, anesthetized pigs, conscious dogs with indirect blood pressure monitoring and diuresis and conscious monkeys with cardiovascular telemetry monitoring. These studies confirmed OT to have significant hemodynamic effects with variable responses depending on the state of consciousness (conscious or anesthetized), the dose, the administration protocol (bolus or infusion) and the species that were used. These screening studies enabled selection of a treatment regimen and dose without adverse effects that could subsequently be tested in efficacy studies. A porcine myocardial infarct (MI) model with reperfusion was used to evaluate the effects of OT following myocardial ischemia. In a pilot project, continuous infusion of OT initiated immediately at coronary reperfusion induced cardiovascular adverse effects in all treated animals including a reduction of left ventricular fraction shortening and worsening of dilated cardiomyopathy which is typical following MI. Considering these observations, the therapeutic strategy was revised to avoid OT treatment during the inflammatory phase which was considered maximal around day 3 post-ischemia. When initiated 8 days after MI, OT infusion induced adverse effects in animals with elevated endogenous levels of OT. In contrast, no significant effects (not statistically significant improvement) were observed in animals with low endogenous OT baseline. In placebo treated animals, a trend to observe a better recovery was noted in animals with high endogenous OT baseline. While the size of the ischemic zone was comparable to human patients with MI, the use of juvenile animals and the absence of coronary disease are important limitations of the porcine model. The potential of OT for treatment of MI remains but our results suggest that systemic administration of OT by continuous infusion as part of a replacement therapy should be investigated further in relation to endogenous levels. Further investigations on safety of the treatment with OT on animal MI models are warranted before the use of OT can be considered in the patient population after myocardial infarct. On the other hand, endogenous levels of OT may have a prognostic value and clinical trials to investigate this hypothesis may be of interest

Antioxidant and DPPH-Scavenging Activities of Compounds and Ethanolic Extract of the Leaf and Twigs of Caesalpinia bonduc L. Roxb.

Antioxidant effects of ethanolic extract of Caesalpinia bonduc and its isolated bioactive compounds were evaluated in vitro. The compounds included two new cassanediterpenes, 1α,7α-diacetoxy-5α,6β-dihydroxyl-cass-14(15)-epoxy-16,12-olide (1)and 12α-ethoxyl-1α,14β-diacetoxy-2α,5α-dihydroxyl cass-13(15)-en-16,12-olide(2); and others, bonducellin (3), 7,4’-dihydroxy-3,11-dehydrohomoisoflavanone (4), daucosterol (5), luteolin (6), quercetin-3-methyl ether (7) and kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1Ç2)-β-D-xylopyranoside (8). The antioxidant properties of the extract and compounds were assessed by the measurement of the total phenolic content, ascorbic acid content, total antioxidant capacity and 1-1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) and hydrogen peroxide radicals scavenging activities.Compounds 3, 6, 7 and ethanolic extract had DPPH scavenging activities with IC50 values of 186, 75, 17 and 102 μg/ml respectively when compared to vitamin C with 15 μg/ml. On the other hand, no significant results were obtained for hydrogen peroxide radical. In addition, compound 7 has the highest phenolic content of 0.81±0.01 mg/ml of gallic acid equivalent while compound 8 showed the highest total antioxidant capacity with 254.31±3.54 and 199.82±2.78 μg/ml gallic and ascorbic acid equivalent respectively. Compound 4 and ethanolic extract showed a high ascorbic acid content of 2.26±0.01 and 6.78±0.03 mg/ml respectively.The results obtained showed the antioxidant activity of the ethanolic extract of C. bonduc and deduced that this activity was mediated by its isolated bioactive compounds