Efecto de la criopreservación espermática en la fragmentación del ADN, viabilidad, y parámetros cinéticos en toros Brown Swiss

The effect of sperm cryopreservation on DNA fragmentation, viability, and sperm kinetics was evaluated using a Computer Assisted Semen Analysis (C.A.S.A). 76 ejaculates were collected from 5 bulls of the Brown Swiss breed from the National Semen Bank of UNALM. For the analysis of DNA fragmentation, the Sperm-Halomax® Kit was used and for the analysis of the sperm viability Hoeschst 333242 / PI stain. Significant change before and after the cryopreservation for each one of the seminal parameters was evaluated using the T test of related samples, previous verification of normality with the Shapiro-Wilk test. In case data were not normal, the Wilcoxon signed rank test was used. The Bonferroni adjustment was applied for the referred above comparisons. All the analyses were made considering 5 biological replicas in the statistical package SPSS v.23 with 95% reliability. Significant differences were found in 16 of the 21 parameters evaluated, an increase in DNA fragmentation of 3% was evidenced, and decrease in the sperm viability parameter was manifested. Lower values of the following parameters motility, progressive motility, rapid motility was observed, as well as the kinetic parameters VCL, VSL, VAP, DSL, DAP, ALH, BCF, HAC, STR. However higher values of local motility and immobile sperm were observed, attributed to the effect of seminal cryopreservation.Se evaluó mediante el sistema computarizado de análisis seminal (C.A.S.A), el efecto de la criopreservación espermática sobre la fragmentación del ADN, la viabilidad, y la cinética espermática. Se colectaron 76 eyaculados de 5 toros de la raza Brown Swiss del Banco Nacional de Semen de la UNALM. Para el análisis de la fragmentación del ADN se utilizó el Kit Sperm-Halomax® y para el análisis de la viabilidad espermática la tinción Hoeschst 333242/PI. Se evaluó si existió un cambio significativo entre los valores antes y después de la criopreservación para cada uno de los parámetros seminales evaluados utilizando la prueba T de muestras relacionadas, previa verificación de normalidad con la prueba de Shapiro-Wilk; en caso de presencia de no normalidad, se utilizó la prueba de rangos con signo de Wilcoxon. Se aplicó ajuste de Bonferroni para las comparaciones antes mencionadas. Todos los análisis se realizaron considerando 5 réplicas biológicas en el paquete estadístico SPSS v.23 con un 95% de confiabilidad. Se encontraron diferencias significativas en 16 de los 21 parámetros evaluados, se evidenció un aumento de la fragmentación del ADN del 3%, en el parámetro de viabilidad espermática se manifestó una disminución de los valores analizados y se observó la disminución de los valores de los siguientes parámetros motilidad, motilidad progresiva, motilidad rápida, al igual que los parámetros cinéticos VCL, VSL, VAP, DSL, DAP, ALH, BCF, HAC, STR. Sin embargo, se observó un incremento en los valores de motilidad local y espermatozoides inmóviles, atribuidos al efecto de la criopreservación seminal

Efecto de la criopreservación en fragmentación del ADN, viabilidad, motilidad y cinética espermática en toros Brown Swiss empleando sistema casa

Universidad Nacional Agraria La Molina. Escuela de Posgrado. Maestría en Producción AnimalEl objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de la criopreservación espermática en la fragmentación del ADN, la viabilidad, y cinética espermática, mediante el sistema computarizado de análisis seminal (CASA), se colectaron 5 toros de la raza Brown Swiss ubicados en el Banco Nacional de Semen de la UNALM, se procesó y congelo los 76 eyaculados obtenidos. Para el análisis de la fragmentación del ADN se utilizó el Kit Sperm-Halomax® y para el análisis de la viabilidad espermática la tinción Hoeschst 333242/PI, se evaluó si existió un cambio significativo entre los valores antes y después de la criopreservación para cada uno de los parámetros seminales evaluados utilizando la prueba T de muestras relacionadas, previa verificación de normalidad con la prueba de Shapiro-Wilk en caso que los datos fueran no normales, se utilizó la prueba de rangos con signo de Wilcoxon. Se aplicó ajuste de Bonferroni para las comparaciones antes mencionadas. Todos los análisis se realizaron considerando 5 réplicas biológicas en el paquete estadístico SPSS v.23 con un 95% de confiabilidad. Se encontraron diferencias significativas en 16 de los 21 parámetros evaluados, se evidencio un aumento de la fragmentación del ADN del 3%, en el parámetro de viabilidad espermática se manifestó una disminución de los valores analizados. Se observó la disminución de los valores de los siguientes parámetros motilidad, motilidad progresiva, motilidad rápida, al igual que los parámetros cinéticos VCL, VSL, VAP, DSL, DAP, ALH, BCF, HAC, STR, y un incremento en los valores de motilidad local y espermatozoides inmóviles, atribuidos al efecto de la criopreservación seminal.The objective of this research was to evaluate the effect of sperm cryopreservation on DNA fragmentation, viability and sperm kinetics using the computer-assisted semen analysis (CASA), 5 bulls of the Brown Swiss breed located in the National Semen Bank of the UNALM were collected, we proceeded to collect, process and freeze the 76 ejaculates obtained. For the analysis of DNA fragmentation the Sperm-Halomax® Kit was used and for the analysis of the sperm viability Hoeschst 333242 / PI stain, it was evaluated if there was a significant change between the values before and after the cryopreservation for each one of the seminal parameters evaluated using the T test of related samples, after verification of normality with the Shapiro-Wilk test in case the data were not normal, the Wilcoxon signed rank test was used. The Bonferroni adjustment was applied for the referred above comparisons. All the analyzes were made considering 5 biological replicas in the statistical package SPSS v.23 with a 95% reliability. Significant differences were found in 16 of the 21 parameters evaluated, an increase in DNA fragmentation of 3% was evidenced, in the sperm viability parameter a decrease in the analyzed values was manifested. The decrease in the values of the following parameters motility, progressive motility, rapid motility was observed, as were the kinetic parameters VCL, VSL, VAP, DSL, DAP, ALH, BCF, HAC, STR, and an increase in the values of local motility and immobile sperm, attributed to the effect of seminal cryopreservation

Evaluación de dilutores a base de lecitina de soya y liposomas sobre la criopreservación de espermatozoides de toros

Universidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Zootecnia. Departamento Académico de Producción AnimalEl objetivo del estudio fue comparar el efecto de dos dilutores comerciales (basados en lecitina de soya Andromed® y basados en liposomas Optixcell®) sobre las variables de calidad y funcionalidad de los espermatozoides después de la descongelación evaluados mediante análisis de esperma asistido por computadora. Se analizaron un total de 40 eyaculados de cuatro toros de la raza Brown Swiss de 3 a 6 años de edad; los tratamientos fueron: T1, eyaculados diluidos en lecitina de soya; T2, eyaculados diluidos en liposomas. El análisis de la motilidad espermática se obtuvo con ayuda de un sistema computarizado de análisis seminal (CASA); para el estudio de viabilidad espermática se empleó la tinción de fluorescencia Hoeschst 33342/PI, y la evaluación de la funcionalidad de la membrana espermática se realizó a través del test de endosmosis. En la parte estadística, se verificó los supuestos de normalidad (Shapiro-Wilk) y la homogeneidad de varianzas (Test de Levene), posteriormente se realizó el análisis de varianzas (ANVA), y los datos se analizaron con el programa estadístico Statgraphics Centurion. Se determinó que no hubo diferencias estadísticas significativas (P 0.05) in the parameters of percentage of total motility (75.20% and 75.51%), viability (60.65% and 60.80%) and functionality of the sperm membrane (49.05% and 51.48 %) for Andromed and Optixcell, respectively. It is concluded that the dilutors Andromed and Optixcell presented acceptable values of post-thaw semen quality, and can be used for the cryopreservation of bull seme

Efecto del Resveratrol sobre la capacidad fecundante in vitro de espermatozoides bovinos congelados y vitrificados

Esta investigación evaluó el efecto del Resveratrol (RES) sobre la cinemática y capacidad fecundante in vitro de espermatozoides bovinos congelados y vitrificados. Cuatro tratamientos fueron evaluados según la suplementación con RES (0 [control] y 50 µM) y el tipo de criopreservación (congelación convencional [CC] y vitrificación [VIT]): CC-RES (n=80 pajuelas); CC-Co (n=80 pajuelas); VIT-RES (n=20 criotubos), y VIT-Co (n=20 criotubos). Cada tratamiento fue evaluado objetivamente su cinemática y la capacidad fecundante mediante un sistema CASA(SCA®) y fecundación in vitro (200 ovocitos/tratamiento), respectivamente. Los resultados demostraron una mejor crio-respuesta cinemática con los tratamientos de congelación (CC-RES y CC-Co) que con los de vitrificación (VIT-RES y VITCo). El tratamiento de CC-RES produjo una mayor (P<0,05) motilidad total (MT) y progresiva (MP) que el tratamiento CC-Co; mientras que el tratamiento VIT-RES produjo una mayor (P<0,05) frecuencia de batida de flagelo (BCF) que el tratamiento VIT-Co. El tratamiento CCRES produjo una mayor (P<0,05) tasa de clivaje que los tratamientos CC-Co y VIT-RES (64,0±3,40 % vs. 34,7±3,44 % y 42,0±4,96 %, respectivamente). Asimismo, el tratamiento CC-RES produjo un porcentaje de blastocistos más alto (P<0,05) que todos los tratamientos (CC-RES= 22,5±3,11 % vs. CC-Co= 10,2±2,29 %; VIT-RES= 8,0±3,88 %; y VIT-Co= 4,0±2,8 %). Además, una correlación (P<0,05) fue evidenciada en el tratamiento CC-RES entre las motilidades y amplitud del desplazamiento lateral de la cabeza, y las tasas de clivaje y blastocistos. En conclusión, el RES mejoró las motilidades y la fertilidad in vitro de espermatozoides después de la congelación, sin embargo; en la vitrificación solo mejoró un parámetro cinético.This research evaluated the effect of Resveratrol (RES) on the kinematics and in vitro fertilizing capacity of frozen and vitrified bovine spermatozoa. Four treatments were evaluated according to RES supplementation (0 [control] and 50 µM) and cryopreservation method (conventional freezing [CF] and vitrification [VIT]): CF-RES (n=80 straws); CF-Co (n=80 straws); VIT-RES (n=20 cryotubes), and VIT-Co (n=20 cryotubes). Each treatment was objectively evaluated for its kinematics and fertilizing capacity using a Computer Assisted Sperm Analysis system (CASA®) and in vitro fertilization (200 oocytes/treatment), respectively. Results showed better cryoresponse kinematics with freezing treatments (CFRES and CF-Co) than with vitrification treatments (VIT-RES and VIT-Co). The CF-RES treatment produced a higher (P<0.05) total motility (TM) and progressive motility (PM) than the CF-Co treatment, while the VIT-RES treatment produced a higher (P<0.05) beat cross frequency (BCF) than the VIT-Co treatment. The CC-RES treatment produced a higher (P<0.05) cleavage rate than the CF-Co and VIT- RES treatments (64.0±3.40% vs. 34.7±3.44% and 42.0±4.96%, respectively). Likewise, the CF-RES treatment produced a higher percentage of blastocysts (P<0.05) than all treatments (CF-RES=22.5±3.11% vs. CCCo=10.2±2.29%; VIT-RES=8.0±3.88%; and VIT-Co=4.0±2.8%). Furthermore, a correlation (P<0.05) was evidenced in the CC-RES treatment between motilities and lateral head displacement amplitude, and cleavage and blastocyst rates. In conclusion, RES improved the motility and in vitro fertility of spermatozoa after freezing, however, in vitrification it only improved one kinetic parameter.0000-0002-0266-543