CASARIN, T.

DODE, L. B.

MASIERO, D.

SILVA, S. D. dos A. e

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ALONGAMENTO E ENRAIZAMENTO DE ÁPICES DE PINHÃO-MANSO CULTIVADOS IN VITROTatiane Casarin1, Daniele Masiero 2, Sérgio Delmar dos Anjos e Silva3 , Luciana Bicca Dode4.INTRODUÇÃOA crescente preocupação com as questões ambientais e a necessidade de novas  alternativas para a produção de energia de forma renovável, estimulou a busca por  espécies vegetais capazes de fornecer com matéria prima de qualidade para produção de biocombustíveis, sem interferir na oferta de alimentos.O pinhão-manso (Jatropha curcas L.) vem demonstrando ser uma ótima opção para suprir essa demanda. Além de apresentar elevado teor de óleo nas sementes (25 a 40%) superior à maioria das oleaginosas utilizadas para este fim (ARRUDA et al., 2004), o pinhão-manso é uma cultura de fácil cultivo (TAPANES et al.,  2007;  SATO et al.,  2009). O óleo proveniente das sementes do pinhão-manso  apresentaa  estabilidade  à  oxidação e   boa  viscosidade  (TAPANES et  al.,  2007). Entretando, ainda há grande desuniformidade dentro da espécie e não existem cultivares definidos para  a  região,  o  que  destaca  a  importância  da  propagação  assexuada  para  multiplicação   de genótipos de interesse. Tradicionalmente utilizada, a estaquia apresenta algunas limitações quanto ao desenvolvimento das plantas (DEORE, et al, 2008). Dessa forma, a cultura de tecidos vegetais e a  micropropagção  surgem como  importantes  ferramentas  para a  produção em grande escala  de plantas geneticamente uniformes e com qualidade sanitária superior. Nesse sentido o Laboratório de Biotecnologia  Vegetal,  do Centro de Desenvolvimento Tecnológico da Universidade Federal de Pelotas, tem desenvolvido diversos estudos e uma das maiores dificuldades encontradas tem sido promover  o  alongamento  e  enraizamento  de  ápices  e  brotos  obtidos  nos  diferentes  processos organogênicos.  Assim  sendo,  este  estudo  teve  por  objetivo  avaliar  a  eficiência  de  novas combinações e concentrações de hormônios nas diferentes etapas dos processos  propagação in vitro de pinhão-manso.1 Graduação em Biotecnologia / Universidade Federal de Pelotas. casarintatiane@gmail.com2 Graduação em Biotecnologia / Universidade Federal de Pelotas. daniii.masiero.gmail.com3 Pesquisador EMBRAPA/CPACT. sergio.anjos@cpact.embrapa.br4  Professora  doutora  do  Centro  de  Biotecnologia  /  Universidade  Federal  de  Pelotas. lucianabicca@gmail.comMATERIAL E MÉTODOSO  estudo  foi  conduzido  no  Laboratório  de  Biotecnologia  Vegetal,  do  Centro  de Desenvolvimento  Tecnológico  da Universidade  Federal  de Pelotas.  Sementes  de  uma linhagem promissora,  cedidas  pela  Embrapa  Clima  Temperado,  de  Pelotas,  Rio  Grande  do  Sul,  foram descascadas com o auxilio de um quebra-nozes, desinfestadas superficialmente com álcool 70% por 2 minutos, lavadas com água destilada autoclavada, imersas em solução de hipoclorito de cálcio 2% durante  6 minutos  e  novamente  lavadas  com água destilada  autoclavada.  Foram inoculadas  50 sementes em frascos contendo aproximadamente 30 mL-1 de meio Murashige & Skoog (MS)  com a metade da concentração de sais (½ MS) acrescido de  1% (p/v) de sacarose, e  7g.L-1 de ágar, o pH do meio foi ajustado para 5,8 antes da autoclavagem e adicionado  como regulador de crescimento benzilaminopuria  (BAP) na concentração de 3,4  mg.L-1  .  Foram inoculadas  duas sementes  por frasco, mantidas na sala de cultivo com fotoperíodo de 16 horas e temperatura de 25+-2°C. Após dez dias de germinação os ápices foram excisados com auxílio de pinça e bisturi e transferidos para meio  MS  acrescido de  3% (p/v) de sacarose, e  7g.L-1 de ágar e os reguladores de crescimento BAP na concentração de 10 mg.L-1  e ácido indol butírico (AIB) a 0,5 mg.L-1  , além de 2 g.L-1 de carvão ativado,  para estímulo da multiplicação celular. Os explantes  foram mantidos no escuro durante onze dias a temperatura de 25+-2°C. Posteriormente, os ápices foram transferidos para meio MS contendo 0,5  mg.L-1  de BAP e 1,7  mg.L-1  de ácido indol acético (AIA).  Explantes foram alongados após 14 dias,  transferidos para vasos contendo vermiculita. Foi avaliada a eficiência dos meios de estímulo e alongamento,  número de raízes e alongamento dos explantes, tanto após o tratamento de estímulo como aos 7 e 14 do tratamento de estímulo.RESULTADOS E DISCUSSÃOApós o período de estímulo, 84% dos explantes inoculados alongaram  e  60% dos explantes apresentavam raízes (Figura 1). Após 7 dias em  meio de alongamento, 68%  possuíam raízes todos os explantes estavam alongados e com folhas expandidas (Figura 2).O balanço auxina-citocinina disponível  no meio de cultura foi favorável ao alongamento e enraizamento dos explantes ainda que Purkayastha e colaboradores (2010) tenham destacado como essencial a adição de giberelinas para alongamento.Figura  1-  Número  médio  de  explantes  de  pinhão  manso   com  raízes  e  apresentando alongamento  por placa. Avaliações aos 0,7 e 14 dias de incubação em meio contendo 0,5mg.L -1 BAP e 1,7mg.L-1 AIAFigura 2- Ápices de pinhão-manso aos 7 dias em meio de alongamento.Após  14 dias  de incubação  em meio de alongamento o comprimento médio da parte aérea dos explantes foi de 1,72 cm e das raízes 1,03 cm. Foram observados calos na base de 50% dos  explantes.CONCLUSÕESOs meios de cultura avaliados foram eficientes para indução, alongamento e enraizamento dos explantes de pinhão manso.REFERÊNCIAS ARRUDA, F.P. de; BELTRÃO, N.E. de M.; ANDRADE, A.P. de; PEREIRA, W.E.; SEVERINO, L.S. Cultivo do pinhão-manso (Jatropha curcas L.) como alternativa para o Semi-Árido nordestino. Revista Brasileira de Oleaginosas e Fibrosas, v.8, p.789-799, 2004.TAPANES,  N.O.;  ARANDA,  D.A.G.;  CARNEIRO,  J.W.  de  M.  Transesterificação  dos glicerídeos  do  óleo  de  Jatropha  curcas L.:  estudo  teórico.  Disponível  em: http://www.biodiesel.gov.br/docs/congressso2006/producao/Glice27.pdf. SATO, M., BUENO, O. de C., ESPERANCINI, M. S. T., FRIGO, E. P.  A cultura do pinhão-manso (Jatropha curcas L.): uso para fins combustíveis e descrição agronômica.  Revista Varia Scientia v. 07, n. 13, p. 47-62, 2009.DEORE, Ajay C.; JOHNSON,T. Sudhakar.  High-frequency plant regeneration from leaf-disc cultures of Jatropha curcas L.: an important biodiesel plant.  Plant Biotechnol Rep 2008 2:7–11, 2008.PURKAYASTHA, J.,  SUGLA, T., PAUL, A., SOLLETI, S. K., MAZUMDAR, P., BASU, A., MOHOMMAD, A., AHMED, Z., SAHOO, L.  Efficient in vitro plant regeneration from shoot apices and gene transfer by particle bombardment in Jatropha curcas.  Biologia Plantarum, Volume 54, Number 1, 13-20, 2010.

Alongamento e enraizamento de ápices de pinhão-manso cultivados in vitro.

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