高效液相色谱-质谱法测定牛Ⅰ型胶原含量

Abstract

建立了一种基于高效液相色谱-质谱联用技术并通过特征多肽进行牛Ⅰ型胶原含量检测的方法。胶原海绵样品经酶解处理后进行色谱分离,在电喷雾离子源正离子扫描及保留时间依赖的单离子监测模式(SIM)下测定,外标法定量。采用胰蛋白酶特异性酶解得到牛Ⅰ型胶原的1个特征多肽为GFSGLDGAK。该多肽在0.645~21.5μg/mL质量浓度范围内线性关系良好(r^2=0.9994);方法的定量下限为6.45×10^-4μg/mL;在3.10、2.48、1.55μg/mL 3个加标水平下,平均回收率为98.2%~102%;峰面积的相对标准偏差(n=6)为0.80%。胶原海绵样品经均匀性、稳定性和定值检测,确保了方法有效性,验证了该产品质量,且测得牛Ⅰ型胶原含量为(0.926±0.014)mg/mg。该方法简便快速,重现性好、稳定性高,可有效地对牛Ⅰ型胶原进行定量