胶原蛋白降解物高效液相色谱/质谱联用分析

利用高效液相色谱／质谱联用技术分析了胶原蛋白Ⅱ和Ⅰ经变性和酶解处理得到的多肽混合物，比较研究了两种类型胶原蛋白降解物之间的区别，利用液相色谱质谱连用技术识别出了不同类型胶原蛋白中的特征肽段。胶原蛋白在50℃处理3h可溶解于盐溶液，凝胶过滤分析结果表明，热变性的胶原蛋白分子量在10万以上，因此在热变性过程中胶原蛋白的三螺旋结构被破坏但没有明显的随机降解。利用胰蛋白酶对胶原蛋白进行了酶切处理，在酶用量为2％，pH8．1～8．2，温度37℃条件下，处理20h后胶原蛋白降解较完全，多肽混合物的平均分子量在1万以下。利用液质联用技术研究Ⅱ型和Ⅰ型胶原蛋白降解物中的多肽，通过多级质谱分析了胶原蛋白降解物多肽的序列。结果表明，不同类型的胶原蛋白酶解后的多肽混合物中存在特定序列的特征肽段，利用特征肽段进行胶原蛋白类型识别是可行的

高效液相色谱-质谱法测定牛Ⅰ型胶原含量

建立了一种基于高效液相色谱-质谱联用技术并通过特征多肽进行牛Ⅰ型胶原含量检测的方法。胶原海绵样品经酶解处理后进行色谱分离,在电喷雾离子源正离子扫描及保留时间依赖的单离子监测模式(SIM)下测定,外标法定量。采用胰蛋白酶特异性酶解得到牛Ⅰ型胶原的1个特征多肽为GFSGLDGAK。该多肽在0.645~21.5μg/mL质量浓度范围内线性关系良好(r^2=0.9994);方法的定量下限为6.45×10^-4μg/mL;在3.10、2.48、1.55μg/mL 3个加标水平下,平均回收率为98.2%~102%;峰面积的相对标准偏差(n=6)为0.80%。胶原海绵样品经均匀性、稳定性和定值检测,确保了方法有效性,验证了该产品质量,且测得牛Ⅰ型胶原含量为(0.926±0.014)mg/mg。该方法简便快速,重现性好、稳定性高,可有效地对牛Ⅰ型胶原进行定量