Con el estudio realizado se pretende determinar las causas de la baja fecundación
en algunos clones de granado. Los clones estudiados han sido el MA1, MA2, ME18 y MES
cultivados en condiciones homogéneas en la colección existente en la Escuela Politécnica
Superior de Orihuela (Alicante). El estudio se realizó durante los años 1996 y 1997,
Se ha estudiado la viabilidad del polen mediante la técnica de tinción con carmín
acético y se ha observado su evolución semanal a lo largo de la floración. Asimismo se ha
estudiado este mismo parámetro para el polen conservado a las temperaturas de 5 y 28%C.
También se realizó el estudio del potencial germinativo del polen procedente de flores
“masculinas” y hermafroditas, en un medio de cultivo a las temperaturas de 15 y 28%C,
realizando observaciones a las 48 horas desde la siembra

Forner-Giner, María A.

Hernández, Francisca

Legua, Pilar

Martínez-Crespillo, M.

Melgarejo, Pablo

ReDivia - Repositorio Digital de l'Instit Valencià d'Investigacions Agràries

BIOLOGÍA FLORAL DE 4 CLONES DE GRANADO CULTIVADOSEN CONDICIONES HOMOGÉNEAS: VIABILIDAD,GERMINACIÓN Y CONSERVACIÓN DEL POLENLegua, P.'; Melgarejo, P.'; Martínez-Crespillo, M.'; Hernández, F.'; Forner, M. A.?1Dpto Producción Vegetal y Microbiología. E.P.S.O. (UMH) Ctra Beniel, Km 3.2 03312 Orihuela (Alicante)España.21.V.LA. Ctra Náquera Moncada, Km 3.5 Moncada, Valencia. España.ResumenCon el estudio realizado se pretende determinar las causas de la baja fecundaciónen algunos clones de granado. Los clones estudiados han sido el MA1, MA2, ME18 y MEScultivados en condiciones homogéneas en la colección existente en la Escuela PolitécnicaSuperior de Orihuela (Alicante). El estudio se realizó durante los años 1996 y 1997.Se ha estudiado la viabilidad del polen mediante la técnica de tinción con carmínacético y se ha observado su evolución semanal a lo largo de la floración. Asimismo se haestudiado este mismo parámetro para el polen conservado a las temperaturas de 5 y 28%C.También se realizó el estudio del potencial germinativo del polen procedentede flo-res “masculinas” y hermafroditas, en un medio de cultivo a las temperaturas de 15 y 28%C,realizando observacionesa las 48 horas desde la siembra.Palabras clave: Punica granatum L., potencial germinativo, polinización, floración, mediode cultivo.AbstractThe aim ofthe present work has been to determine low fertilization reasons in somepomegranate cultivars. The studied cultivars have been MA1, MA2, ME18 and MESculti-vated in homogeneous conditions in the collection grown at E.P.S. of Orihuela. The investi-gation was carried out during 1996 and 1997,Pollen viability has been studied with acetic carmine dye weekly during all flowe-ring. This parameter was also worked with pollen that has been conserved at 5*C and 28*C.Germination ability was researched with pollen of male and hermaphrodite flowersgrown in a culture medium with 15%C and 28*C which were observed 48 hours after sowing.Keywords: Punica granatum L., germination potential, pollination, flowering, culture medium.1. IntroducciónLos estudios de biología floral, intensificados en los últimos años, han mostradocon frecuencia la estrecha relación con los problemasdela fructificación.La cantidad y la calidad del polen disponible, la receptividad del estigma, la com-patibilidad polen-pistilo y su relación con los factores medioambientales, etc., son hoy obje-to de estudio en los cuatro clones MA 1, MA2, MES y ME18,y está sirviendo para averiguaren que medida sus deficiencias en la fructificación tienen relación con uno o varios de estosfactores.IV Congreso Ibérico de Ciencias Hortícolas. Cáceres, Mayo 2001. 1507Hacíafalta, en nuestra opinión, ampliar los estudios relativosa la biología floral delgranado (Punica granatum L.) ya que hasta el momento toda la bibliografía existente sereduce a unos cuantos artículos que no profundizaban en el tema y con variedades cultiva-das en su mayoría fuera de España. Y sobre todo en nuestro caso, ya que en los cuatro clo-nes estudiados en este artículo no se han realizado investigaciones sobre su biología floral.Tan solo existe una clasificación varietal realizada por Melgarejo (1993) en la cual describíaestos cuatro clones, entre otros.Durante la fase de prospección del material vegetal de granado y preselección delmismo, pudo comprobarse la gran variabilidad existente en nuestras plantaciones, como con-secuencia de un crecimiento rápido del cultivo, sin la existencia de suficientes conocimien-tos sobre el mismo ni del material seleccionado. Esta diversidad varietal ha conducido a unestado general de las plantaciones con problemas de diversa índole, como la falta de pro-ductividad, inadecuada época de maduración, deficiente color del fruto, etc. En este momen-to surge la necesidad de realizar una caracterización pomológica del material de la especie ya continuación, dentro de ésta, la del estudio de su biología floral.Con la investigación propuesta se ha intentado contribuir a determinar las causas dela baja fecundación delos clones seleccionados, lo que facilitará el desarrollo del cultivo delgranado, que tiene una gran importancia económicaen la provincia de Alicante ya que el 95% de la producción española se obtiene deella.2. Materiales todo2.1. Material vegetalEl material vegetal utilizado está constituido por los clones de granado MA 1, MAZ,MES y ME18 descritos por Melgerjo (1993).El colorante utilizado para estudiar la viabilidad de los granos de polen fue el car-mín acético ya que al ser un colorante protoplasmático no colorea los granos anormales,mientras que los normalmente constituidos aparecen rojos. Este colorante se obtiene hir-viendo una mezcla de 45 % de ácido acético y 55 % de agua destilada en presencia de hie-rro metálico durante 3-4 minutos. En este proceso se libera acetato férrico, que es funda-mental para la consecución de una tinción adecuada. Se añade un 1 % de carmín mante-niendo la ebullición durante otro minuto y se procede finalmente al filtrado.Finalmente se depositan los granos de polen sobre un portaobjetos, depositandosobre ellos una gota de carmín acético y un cubreobjetos para su observación en el micros-copio óptico de 10 x 10.2.3. Estudio del potencial germinativo: medios de cultivo.El medio de cultivo utilizado consiste fundamentalmente en una disolución de saca-rosa, agar y micronutrientes en aguadestilada, que se esteriliza en autoclave (a 120%C duran-te 15 minutos) y que es depositada formando una fina película en una placa Petri, tambiénestéril. Una vez que se ha dejado enfriar y solidifica, se procede a la siembra del polen. Todoeste proceso tiene lugar en una campanade flujo laminar para evitar posibles contaminacio-nes y en presencia de un mechero de alcohol.La composición del medio de cultivo para una solución del100 g es de 81.5 g deagua destilada, 17.5 g de sacarosa, 1 g de agar, 22 mg de cloruro de calcio dihidratado y 2mg de ácido bórico.1508 IV Congreso Ibérico de Ciencias Hortícolas. Cáceres, Mayo 2001,Esta prueba ha sido realizada con polen procedente de flores masculinas y floreshermafroditas a dos temperaturas distintas 15%C y 28”C en presencia de luz. Las placas semantuvieron en cámaras a estas temperaturas y fueron observadas a las 48 horas después desu siembra.2.4. Conservación del polenPara medir el tiempo de conservación del polen, se tomó una amplia muestra depolen al principio de la floración y se mantuvo una parte de la muestra en una cámara frigo-rífica a 5”C y la otra en una cámara a 28%C. Durante todo este eE se tomaron muestrassemanales en las que se midió la viabilidad.3. Resultados3.1. Viabilidad del polenLa evolución de la viabilidad a lo largo de la floración se muestra en la Figura 1.Comose puede observar, casi todas las variedades alcanzan un máximode viabilidad a prin-cipios de junio, coincidiendo con el periodo de máxima floración; sin embargo, no sucedeesto con la variedad MES, la cual presenta su máxima viabilidad a principios de julio, cercadel final de su floración.La viabilidad media de los granos de polen a lo largo de todas las semanas que duróel ensayo fue, en la variedad MA 1 del 78.9%, en la MÁ 2 del 71.85 %, en la ME 5 del60.65% y, por último, en la ME 18 del 49.8%.3.2. Potencial germinativo del polen.El potencial germinativo de los granos de polen se calcula sólo con los granos via-bles, considerándose el porcentaje de estos últimos el 100% del polen. Los granos de polense incuban durante 48h a 15%C y a 28%C. Los resultados se muestran en la Tabla 1.El clon MAI esel que presenta un mayor porcentaje de germinación a ambas tem-peraturas. Así a 15%C alcanza un 19,22% de potencial germinativo seguido de los clonesMA2 y MEI8 con un 14.76% y 14.37% respectivamente. A 28%C llega a tener un 36.54%mientras que los clones MA2 y MES tienen un 25.62% y 25.24%.3.3. Conservación del polen.La conservación del polen se comenzó a medir la última semana de mayo con unaviabilidad del 92% en el MA1, del 77.6% en el MA 2,del 78.2% en el ME $ y del 59.8% enel ME18. Al final de la prueba, la primera semana de agosto, los resultados de viabilidad fue-ron los que refleja la Tabla 2.Deestos datos se deduce que después de 10 semanas a 5%C la viabilidad disminu-yó un 17% para el clon MAI, un 12% para el MAZ,un 48 % para el MES y un 34 % paraelME18.Para el mismo periodo de tiempo, pero manteniéndose los granos de polen a 28%C,el descenso dela viabilidad fue de un 38 % para el MAI, un 34% para el MAZ,un 56% parael MES y un 52% para el ME18.IV Congreso Ibérico de Ciencias Hortícolas. Cáceres, Mayo 2001. 15094. Discusión4.1. Viabilidad del polenSegún Josan et al. (1979) la viabilidad del polen osciló entre el 64.44% en el culti-var Afganistán seedling hasta el 98.99% en el cultivar Bedana,Por otro lado Sharma y Gaur(1984) obtuvieron los valores másaltos de viabilidad con la variedad Dholka con un 97.51%,correspondiendo el valor más bajo a la variedad Country Large Red con un 58.24%.En nuestro estudio estos valores oscilaron entre el 90.2% en la MA1y el 49.8% dela ME18, valores ligeramente más bajos de los antes citados. Todos los clones, excepto elMES, presentan un máximo en su viabilidad que coincide con el máximo momento de flo-ración.4.2. Potencial germinativo del polenEl poder germinativo es mayor a 28*C de temperatura de incubación que para 15%C,aunque no existen diferencias significativas entre los cuatro clones lo que pone de manifies-to la capacidad de adaptación de estas variedades.Sharma y Gaur (1984) utilizando una solución con un 20% de sacarosa y tras 48 hde incubación, obtuvieron que la variedad Anar Shrine E. Mohd. Ali fue la que alcanzó elmayor porcentaje de germinación con el 87.9% y Wild Punica el menor con un 31.9%.En cuanto a la germinabilidad, Josan et al.(1979) obtuvieron entre un 65.06% en elcultivar Bashi Kalinski hasta un 96.55% en el Kazkai, valores éstos muy superiores a losnuestros que oscilaron entre un 36.54% en la MA 1 y un 21% en la ME 18. También obser-vamos que estos autores obtienen los mejores porcentajes de germinación en un medio conel 20% de sacarosa, mientras que nosotros los obtenemos en un medio de cultivo al 17.5%de sacarosa.4.3. Conservación del polenLa conservación del polen es mucho máseficaz a 5*C que a 28%C. También seobserva queel polen delas flores de los clones Mollar de Albatera (MA) sufre un menordes-censo de su viabilidad sea cual sea su temperatura de conservación.El descenso dela viabilidad fue progresivo a lo largo de las 10 semanas de ensayo,distinguiéndose los clones MA, por un descenso semanal menor que los clones ME paraambas temperaturas.Según Fernández (1995), la viabilidad de los clones de Piñón Tierno de Ojos alma-cenados a 5*%C fue de 40 días, mientras que a 28%C duraron sólo 30 días, lo que contrasta conlos resultados expuestos.Como conclusiones podemos destacar:1. Todas los clones excepto el MES presentan un máximo de viabilidad de polenque coincide con el momento de máxima floración.2. La conservación del polen es mucho máseficaz a 5%C que a 28"%C.3. El poder germinativo es mayor a los 28%C de incubación que a los 15%C.1510 IV Congreso Ibérico de Ciencias Hortícolas. Cáceres, Mayo 2001.eferenciasFernández Martínez, V.M. 1995. Biología floral de cultivares de granado ( Punicagranatum L.) autóctonos del sudeste. Trabajo Fin de Carrera. E.P.S.O. (Orihuela).Josan, J.S.; Jawanda, J.S. y Uppal, D.K. 1979. Studies on the floral biology ofpomegranate. 1. Sprouting of vegetative buds, flower bud development, flowering habit,time and duration of flowering ¿€ floral morphology. Punjab Horticultural Journal.Departament of Horticulture, Punjab Agricultural University, Ludhiana -141004. India V.19N. 112, pag 59-65.Melgarejo, P. 1993. Selección y tipificación varietal de granado (Punica granatum,L.). Tesis Doctoral, E.T.S.I.A. (U.P.V.) (Valencia).Melgarejo, P.; Martinez-Valero, R., Guillamón, J.M.; Miró, M. y Amorós, A. 1997.Phenological stages of the pomegranate tree (Punica granatum L.) Ann. appl. Biol, 130:135-140.Nalawadi, U.G.; Farooqui, A,; Dasappa A.; Narayana Reddy, M.; Gubbaiah A.;Sulikeri, G.S. and Nalini, A.S. 1973. Studies en the floral biology of pomegranate (Punicagranatum, L.). Mysore Journal of Agricultural Science. 1973, V. 7 N 2, pag. 213-225.College of Agriculture, Dharwar, Mysore State.Sharma, C.M. and Gaur, R.D. 1984. Studies on morphology, germination and via-bility of pomegranate (Punica granatum L.) pollen. Jounal of palynology: 20 (2): 87-92.Singh, R.P.; Kar, P.L. y Dhuria, H.S., 1980. Floral biology studies in some pomegranate cultivars, Horticultural Abstracts (1981), 51 (9),7.420.IV Congreso Ibérico de Ciencias Hortícolas. Cáceres, Mayo 2001. 1511Figura 1. Evolución dela viabilidad a lo largo del tiempo delosclones estudiados.100 -90| !4/7 o60 -504— a EVIABILIDAD%—e— MA |—0—MA2—A— MES—sm—ME 18Tabla 1. Potencial germinativo del polen a 15%C y 28*%C a las 48 h de su incubación% MA1 MA2 MES ME1815...C 19.22 14.76 10.59 14.3728...C 36.54 25.62 25.24 21Tabla 2. Viabilidad del polen conservado a 5*C y 28*%C% MAI MA2 MES ME1828...C 57.0 51.0 34.4 28.9-e 76.6 68.2 40.8 39.41512 IV Congreso Ibérico de Ciencias Hortícolas. Cáceres, Mayo 2001.

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