Estandarización de la medición de TBARS y GSH como marcadores de estrés oxidativo y potasio y pH como marcadores de lesión de almacenamiento en unidades de glóbulos rojos conservados

59 p.Los glóbulos rojos, una vez recolectados desde la flebotomía realizada al donante, comienzan a sufrir una serie de cambios que alteran sus propiedades fisiológicas. Entre estas alteraciones, se cuentan cambios biológicos que tienen efectos sobre la membrana, la hemoglobina y el metabolismo y que se han denominado como “lesión de almacenamiento”. El estrés oxidativo ha sido indicado como una de las causas más importantes, por su rol activo en procesos que desencadenan apoptosis y que afectan por tanto la conservación de eritrocitos. En el presente estudio, se reporta la estandarización de la medición de biomarcadores de lesión de almacenamiento y de estrés oxidativo en unidades de glóbulos rojos leucorreducidos en función de semanas de almacenamiento, simulando las condiciones utilizadas por los bancos de sangre del país, mediante el uso de métodos espectrofotométricos y potenciométricos. El objetivo es demostrar la alteración en los niveles de estas determinaciones a través del tiempo. Las unidades fueron obtenidas a partir de sangre fresca de tres donantes adultos saludables. Se determinaron niveles de glutatión reducido (GSH, defensa antioxidante) y pH del concentrado de glóbulos rojos, con la salvedad que en el caso de GSH, los eritrocitos se debieron precipitar y luego centrifugar para realizar la medición a partir del sobrenadante. Niveles de sustancias reactivas del ácido tiobarbitúrico (TBARS, marcador de medida de lipoperoxidación) y potasio, fueron medidos en el sobrenadante, posterior a la centrifugación de los eritrocitos. Dicho almacenamiento se extendió por un período de siete semanas, midiéndose de forma semanal los parámetros de lesión en cada una de las bolsas. Los niveles de GSH y pH medidos en eritrocitos disminuyeron claramente en ambos casos, siendo el descenso del pH estadísticamente significativo durante gran parte del almacenamiento. Los niveles de TBARS y potasio, también se alteraron elevándose durante el almacenamiento. En el caso del potasio, la elevación alcanza cifras significativas durante todas las semanas de almacenamiento, en contraste con TBARS, donde esta situación se da en la última semana, pero se mantiene una tendencia, que en este caso es al alza durante los 49 días que se extiende el estudio. De esta forma, demostramos que efectivamente podemos evaluar la lesión de almacenamiento en los concentrados de glóbulos rojos

Evaluación del estrés oxidativo en plaquetas obtenidas por aféresis en comparación con plaquetas obtenidas a partir de sangre total y su impacto sobre la funcionalidad

113 p.RESUMEN: Las plaquetas con fines de transfusión se obtienen de forma manual a partir de sangre total, o mediante el proceso automatizado de aféresis. Por ambos métodos las plaquetas durante la conservación presentan "lesión por almacenamiento”.Una de las causas más importantes que conducen al daño es el estrés oxidativo que lleva a cambios relacionados con procesos de activación y apoptosis afectando su funcionalidad post transfusional. El objetivo de este trabajo fue evaluar si la aféresis se asocia a una menor presencia de estrés oxidativo, lo que podría garantizar una mayor cantidad de plaquetas funcionales durante los 5 días de almacenamiento, en comparación con los concentrados obtenidos a partir de sangre total.MÉTODOS: Participaron en el estudio 9 donantes altruistas de sangre total y plaquetas;3 para plaquetas obtenidas a partir de sangre total (PST), 3 para aféresis resuspendidas en plasma (PAP), y 3 para aféresis resuspendidas en solución aditiva (PAS). A todos los concentrados plaquetarios se les realizó las mediciones de sustancias reactivas del ácido tiobarbitúrico (TBARS), Glutatión reducido (GSH), Óxido nítrico (NO), P-Selectina (CD62-P) y Anexina V cada dia de almacenamiento, desde el día 1 de extracción hasta el día 9 de conservación.RESULTADOS: Las plaquetas por aféresis presentaron menos estrés oxidativo en comparación con los concentrados obtenidos a partir de sangre total. Se observó menor nivel de TBARS y NO y mayor concentración de GSH. Por otra parte, se presentó menor activación plaquetaria en relación a la expresión de P-selectina (CD62-P), mayor nivel de plaquetas funcionales en respuesta a trombina y menor expresión de PS. Adicionalmente, entre PAP y PAS, el uso de solución aditiva redujo la lesión por almacenamiento hasta el día 5 de conservación. CONCLUSIÓN: Con los resultados obtenidos podemos inferir que debido a que la aféresis es un método automatizado para la preparación de concentrados, sin pasos de procesamiento manual y con un alto grado de control del proceso, se reduce la lesión por almacenamiento en los concentrados de plaquetas, lo que sugiere que este procedimiento podría aumentar la sobrevida de las plaquetas después de la transfusió

Rol protector de propóleos frente a estrés oxidativo en fibroblastos

28 p.El desbalance entre los procesos de oxidación y reducción en el organismo provocan el denominado estrés oxidativo, fenómeno que se ha asociado a múltiples patologías, razón por la que cada día existe mayor interés en encontrar compuestos antioxidantes, que ayuden a mantener este equilibrio, ya sea para prevenir o atenuar este proceso. En esta búsqueda ha destacado el propóleos, una resina elaborada por la abeja productora de miel Apis mellifera; el que asociado a su alta concentración de compuestos fenólicos ha mostrado tener una alta capacidad antioxidante; acción que se ha asociado a su capacidad de neutralizar radicales libres, donar hidrógeno, quelar iones metálicos e inhibir sistemas enzimáticos.Además, el propóleos también actúa como un antioxidante indirecto, regulando la expresión génica de mecanismos protectores contra el estrés oxidativo, a través de la activación de mecanismos antioxidantes, vía Nrf2/HO-1; actuando como un antioxidante bifuncional; por lo que en este estudio se evaluó el efecto citoprotector directo e indirecto, de extractos metanólicos de propóleos de la VI (E1) y VII región (E2); para lo cual se determinó la viabilidad celular en células fibroblasto de ratón NIH-3T3 incubadas con estos extractos a diferentes tiempos. De esta manera, se observó una disminución de la citotoxicidad generada por el H2O2 y t-BOOH en el ensayo directo, con ambos extractos; respecto del efecto citoprotector indirecto, este sólo se evidenció ante el daño generado por el t-BOOH, y la protección fue independiente de las concentraciones en el E1 y sólo se logró a concentración de 10 μg/ml del E2. En conclusión, demostramos la existencia de un rol protector antioxidante directo y al menos, parcialmente, un rol indirecto, lo que viene a aportar algo más de conocimiento acerca de los efectos con potencial terapéutico del propóleos

Controversia en el uso terapéutico de antioxidantes en el cáncer. Revisión bibliográfica

32 p.El uso de antioxidantes en el tratamiento del cáncer ha sido ampliamente investigado como una prometedora alternativa terapéutica. Sin embargo, no todos han sido probados en modelos vivos y a pesar de que estudios in vitro comprueban su utilidad en el tratamiento del cáncer, muchos de los que sí han sido probados in vivo han entregado resultados contradictorios en donde algunos no sólo no tienen un efecto realmente significativo contra las células cancerígenas, sino que además juegan un rol procancerígeno, aumentando la proliferación celular e inclusive la capacidad metastásica de estas células. Esta revisión bibliográfica reúne algunos ejemplos de estudios in vivo en los que se evidencia que no todos los antioxidantes son realmente útiles en la terapia anticancerígena y enfatiza la importancia de realizar estudios in vivo antes y después de proponer su uso como herramienta terapéutica en el cáncer

Nuevas estrategias terapéuticas en el tratamiento de la enfermedad de Wilson

74 p.La enfermedad de Wilson es de carácter genética autosómica recesiva, que resulta de la mutación del gen ATP7B, que codifica para el transportador de cobre en el hepatocito, provocando la acumulación de este metal en el organismo, afectando principalmente al hígado y el sistema nervioso central. Es importante que el diagnóstico sea oportuno para proveer de un buen pronóstico al paciente. El tratamiento consta principalmente de quelantes de cobre, los cuales tienen la desventaja de causar daños neurológicos. Además, existen una serie de nuevas terapias en estudio. Actualmente, la búsqueda del mejor enfoque terapéutico, para cada presentación específica de la enfermedad, sigue siendo polémico y no hay indicaciones claras sobre cómo tratar a los pacientes, considerando el riesgo de deterioro neurológico progresivo después de la iniciación de la terapia de quelación. En el presente trabajo, se abordan generalidades de la patología, las actuales y futuras estrategias terapéuticas para esta enfermedad, con énfasis en las más novedosas y prometedoras, tales como el tetramolibdato de amonio,la terapia celular, terapia génica, estimulación cerebral profunda y la microscopia de fluorescencia de rayos X esta última técnica está actualmente en desarrollo y es utilizada tanto para el diagnóstico como para el monitoreo del tratamiento de la enfermedad de Wilso

Evaluación del efecto antitumoral de dos extractos de propóleos de la región centro sur en líneas celulares de cáncer

48 p.El propóleos es un producto sintetizado por la abeja productora de miel, Apis mellifera, el cual posee diversas actividades biológicas, las que varían según su procedencia geográfica. Si bien sus propiedades dependen de los compuestos presentes en los diversos propóleos, así como la concentración de dichos compuestos, es posible correlacionar los efectos biológicos con la concentración de compuestos fenólicos y flavonoides presentes en los propóleos, pues gran parte de sus principios activos pertenecen a este tipo de compuestos químicos. Entre las propiedades biológicas más destacadas de algunos propóleos se ha establecido un efecto anticancerígeno. En este sentido, la actividad anticancerígena de los propóleos chilenos ha sido escasamente descrita, por lo que más investigaciones que se centren en determinar estos efectos, son necesarias. El objetivo de este trabajo es estudiar la actividad antitumoral in vitro del propóleos de la zona centro sur del país, observando cómo influye en la viabilidad y proliferación de líneas celulares de cáncer. Para esto, en primera instancia realizamos una caracterización química de los extractos metanólicos de los propóleos utilizados, determinando tanto fenoles como flavonoides totales, además de la actividad antioxidante utilizando métodos colorimétricos empleados frecuentemente en la literatura. Posteriormente utilizando una sal de tetrazolio sobre las líneas celulares HT-29 y MCF-7 (células de cáncer de colon y mama humano, respectivamente) se establecieron los efectos citotóxicos de distintas concentraciones de los extractos, como también la actividad antiproliferativa, observando la dinámica de su proliferación a distintos tiempos de incubación con una concentración constante de extracto. Los extractos de propóleos de la zona centro sur evaluados mostraron poseer una adecuada concentración de compuestos fenólicos y flavonoides, así como de actividad antioxidante, además de mostrar una actividad citotóxica concentración dependiente y efectos antiproliferativos sobre ambas líneas celulares evaluadas. La evidencia presentada en este estudio sugiere que el propóleos de la zona centro sur posee actividad anticancerígena, sin embargo, más investigaciones son necesarias para establecer su real utilidad como terapia complementaria para este tipo de patologías

Estandarización de líneas celulares beta pancreáticas para ensayos de viabilidad frente a estrés oxidativo

61 p.El estrés oxidativo se define como la exposición de la materia viva a fuentes que ocasionan un quiebre en el balance entre los factores pro-oxidantes y los mecanismos antioxidantes, esta desregulación altera la relación estructura-función de los órganos afectados causando enfermedades. Esta memoria va dirigida a estandarizar las condiciones de cultivo de dos modelos celulares beta pancreáticos (MIN-6 y BTC-6) en cuanto a confluencia celular, para estudios de viabilidad celular evaluando tiempos y concentraciones de oxidantes, peróxido de hidrogeno (H2O2) y terc butil (t-BOOH) y finalmente evaluar la protección ante estrés oxidativo y futuros ensayos de citotoxicidad de extractos antioxidantes. Los ensayos se realizaron usando un kit de ensayo de proliferación celular por MTT. Se estandarizó exitosamente la cantidad de células apropiadas para los ensayos de viabilidad y de protección anti oxidantes, usando placas de 96 pocillos optimizando recursos y tiempo, al poder realizar más de un ensayo en la misma placa. Se determinó que las concentraciones mínimas de los oxidantes y el tiempo mínimo de exposición a éstos debe ser de 18 horas para lograr obtener un resultado estadísticamente significativo, siendo 50 μM para H2O2 y 150 μM para t-BOOH. La estandarización del estudio y del cultivo de ambas líneas celulares permitirá a futuro realizar en forma más eficiente ensayos con otros extractos a concentraciones mayores buscando el efecto citoprotector ante estrés oxidativo

Revisión bibliográfica: mecanismos moleculares reportados asociados a la acción antitumoral del propóleos

85 p.El propóleos es una resina natural fabricada por abejas Apis mellifera, las que le dan usos en la colmena como protección física y defensa contra agentes externos a esta. La composición química del propóleos varía dependiendo de la zona geográfica desde donde se obtenga, y de la flora que habite en esta región. Esta composición química ocupa la base de una variedad de propiedades biológicas que presenta el propóleos, algunas de las cuales han sido demostradas al menos in vitro: entre ellas se encuentran la actividad antibacteriana, antifúngica, antiviral, antioxidante, inmunomoduladora y anticancerígena. La actividad antitumoral demostrada por extractos de propóleos o algunos de sus principales constituyentes, provenientes de distintas zonas geográficas del mundo, han demostrado tener efectos citotóxicos, antiproliferativos y apoptóticos en diferentes líneas celulares de cáncer. Los mecanismos celulares que se relacionan con este tipo de actividad reportada del propóleos involucran procesos de detención del ciclo celular a través de la inhibición de la expresión de las ciclinas, activación de la apoptosis mediante la vía intrínseca y extrínseca, como también actuando sobre targets moleculares específicos como son NF-kB y p53, e inhibición de la supervivencia tumoral mediante mecanismos antiangiogénicos e inhibidores del crecimiento neoplásico. Existe evidencia sólida sobre los efectos anticancerígenos en modelos de experimentación que presenta el propóleos al analizar los resultados de los estudios reportados a la fecha. El paso siguiente para continuar en este mismo camino podría ser la realización de estudios clínicos utilizando extractos de propóleos con características estandarizadas o sus principales constituyentes, con el fin de obtener evidencia que se pueda extrapolar a la población para un futuro uso como un complemento de la terapia anticancerígena tradicional

Estudios de propiedades antioxidantes de Schinus latifolius in vitro en fibroblastos NIH 3T3

66 p.Schinus latifolius es un árbol endémico de Chile, ubicado desde la cuarta a la séptima región, se ha usado con fines medicinales para ayudar a mejorar patologías nerviosas, oculares, gástricas, musculares, de las vías urinarias y respiratorias, además de usarse para tratar heridas. A partir de él pueden extraerse diversos compuestos, entre los cuales destacan compuestos de tipo flavonoides, fenoles, entre otros. Estos compuestos presentan propiedades anticancerígenas, antimicrobianas y antiinflamatorias ya comprobadas. Se ha demostrado que dichos compuestos fenólicos presentan propiedad antioxidante, sin embargo, en extractos de S. latifolius esta propiedad aún no ha sido probada. El exceso de estrés oxidativo en las células, además de la falta de producción y/o consumo de elementos antioxidantes lleva a consecuencias acumulativas, que pueden llegar a ser graves para el ser humano, es por ello que la importancia de estudios in vitro y el descubrir de nuevos compuestos antioxidantes en extractos de S. latifolius contribuiría a la clínica contra el estrés oxidativo celular. El objetivo del estudio es evaluar la capacidad antioxidante y citotoxicidad de los extractos de Schinus latifolius in vitro en fibroblastos NIH3T3 de ratón Mus musculus, esto se realizará agregando distintas concentraciones de inductores del estrés oxidativo, en conjunto con distintas concentraciones de extracto a los fibroblastos, y luego se cuantificará la viabilidad celular por un método colorimétrico (MTT). Además, se cuantificarán fenoles y flavonoides del extracto y se evaluará su potencial antioxidante por medio de reducción del radical libre DPPH. De esta manera este estudio sirve como un primer paso para la investigación de Schinus latifolius como un potencial antioxidante, como base para que el extracto siga siendo investigado in vivo, e incluso pueda ser generado para el consumo animal y/o humano

Actividad anti tumoral in vitro de compuestos derivados de la curcumina sobre células de cáncer de mama humano

46 p.La incidencia del cáncer ha ido en aumento a nivel mundial en los últimos años, y entre ellos, el cáncer de mama es el más común en la mujer. Los estudios referentes al tema se han enfocado en buscar nuevas terapias quimiopreventivas, y entre ellas se ha visto a la curcumina como un prometedor compuesto terapéutico, de propiedades antioxidantes, antisépticas, analgésicas, antimicrobianas, antiinflamatorias y anticancerígenas, y se considera farmacológicamente seguro, pero su principal desventaja es la baja biodisponibilidad a nivel fisiológico. Esto limita una posible aplicación exitosa y controlada en la clínica y no permite comprender completamente qué mecanismos son activados por la molécula y cuáles por sus metabolitos. Por lo tanto, es crucial identificar derivados estables y caracterizar sus bases moleculares de acción contra la proliferación y metástasis de células cancerígenas. Este estudio estuvo dirigido a evaluar la actividad antitumoral in vitro de compuestos químicos sintetizados a partir de la curcumina en una línea celular humana de cáncer de mama. Para ello se utilizaron líneas celulares MCF-7 de cáncer de mama humano y NIH/3T3 no tumorales de fibroblastos de ratón, y se evaluó el poder citotóxico de los compuestos expresados en función del porcentaje de viabilidad celular en distintas concentraciones de los compuestos. Los resultados evidenciaron una tendencia a afectar la viabilidad celular de las células tumorales y en menor grado, a las células NIH/3T3. En base a estos resultados, se concluye que los compuestos derivados de la curcumina ejercen efecto citotóxico, siendo menos tóxico en células no tumorales