Genotyping and characterization of two polymorphic microsatellite markers located within introns 29 and 30 of the human thyroglobulin gene

The purpose of the present work was to characterize two new polymorphic microsatellite markers in the thyroglobulin gene. TGrI29 and TGrI30 repeats are located within introns 29 and 30, respectively. Genetic studies were carried out by using polymerase chain reaction (PCR) followed by denaturing polyacrilamide gel electrophoresis. TGrI29 exhibited clearly 4 distinguishable alleles ranging from 197 to 203 base pair (bp) in length and TGrI30 showed 8 alleles ranging from 502 to 542 bp. We characterized the two markers by determinating allele frequencies and measures of variation. The heterozygosities (HET) observed of TGrI29 and TGrI30 were 0.859 and 0.522, respectively. The polymorphism information contents (PIC) were 0.471 and 0.434, respectively. No significant differences from Hardy-Weinberg values were found for these two systems. The PCR products of each allele were cloned using the pGEM-T Easy vector and directly sequenced by Taq polymerase-based chain terminator method. Sequencing analysis indicated that both loci are complex repeats, TGrI29 containing two types of variable motifs (tC)n and (tg)n, and TGrI30 a tetra-nucleotide tandem units (atcc)n. In two TGrI29 alleles and one TGrI30 allele were found two different subtypes in each one, with the same molecular weights but different distribution of the tandem repeats. In conclusion, both microsatellites analyzed are highly informative polymorphic markers and can be used in linkage studies in families with congenital hypothyroidism or autoimmunity thyroid diseases.Fil: Rivolta, Carina Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Moya, Christian M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Mendive, Fernando M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Targovnik, Hector Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentin

Identification and characterization of a novel large insertion/deletion polymorphism of 1464 base pair in the human thyroglobulin gene

We identified a novel large insertion/deletion (Indel) polymorphism of 1464 bp localized in intron 18 of the human thyroglobulin gene. Data from sequence showed a high A+T content (62%), two 17-bp long motif repeats, and three different types of 10-bp long palindromic sequences. The comparison between these 1464 bp and sequences deposited in National Center for Biotechnology Information (NCBI)/GenBank database exhibit a nonsignificant degree of homology with any previously described sequences. The long polymerase chain reaction (PCR) method was used to amplify the genomic DNA region containing intron 17/exon 18/intron 18/exon 19/intron 19 by primers situated in the introns 17 and 19. The amplification generates two fragments of 3.5 and 5.0 kb that correspond to the exclusion or inclusion of a 1464-bp segment, respectively. Both variants are thus widely represented in the human population; giving allele frequencies of 0.56 (insertion) and 0.44 (deletion). Finally, the polymorphism was confirmed by sequence analysis of the 5.0- and 3.5-kb amplified fragments.Fil: Moya, Christian M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Varela, Viviana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Rivolta, Carina Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Mendive, Fernando M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Targovnik, Hector Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentin

Genomic organization of the human thyroglobulin gene: The complete intron-exon structure

Objective: In order to complete the knowledge of the genomic organization of the human thyroglobulin gene, the present work was designed to establish the intron-exon organization from exon 24 to exon 35 and to construct a more complete physical map of the gene. Design: Screening of two genomic libraries, and subsequent restriction mapping, hybridization and sequencing were used to characterize the recombinant phages. Methods: Two human genomic DNA libraries were screened by in situ hybridization. Southern blotting experiments were performed to characterize the phage inserts. The Long PCR method was used to amplify the genomic DNA region containing exon 24. Intron-exon junction sequences were determined by using the Taq polymerase-based chain termination method. Results: We isolated and characterized five λ phage clones that include nucleotides 4933 to 6262 of the thyroglobulin mRNA, encompassing exons 25-35 of the gene. The remaining exon 24 (nucleotides 4817-4932) was sequenced from the amplified fragment. In total, 8010 intronic bases were analyzed. Conclusions: The present study shows that the five phages isolated and the amplified fragment include 59.4 kb genomic DNA, covering 1446 nucleotides of exonic sequence distributed over 12 exons, from exon 24 to exon 35. Using previous studies and our current data, 220 kb of the human thyroglobulin gene was analyzed, a physical map was constructed, and all exon-intron junctions were sequenced and correlated with the different domains of the protein. In summary, the thyroglobulin gene contains 48 exons ranging in size from 63 nucleotides to 1101 nucleotides.Fil: Chaparro Mendivelso, Jeffer Angel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Rivolta, Carina Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Moya, Christian M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Vassart, Gilbert. Université Libre de Bruxelles; BélgicaFil: Targovnik, Hector Manuel. Université Libre de Bruxelles; Bélgica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentin

A novel mutation in intron 11 donor splice site, responsible of a rare genotype in thyroglobulin gene by altering the pre-mRNA splincing process: Cell expression and bioinformatic analysis

Thyroglobulin (TG) is a homodimeric glycoprotein synthesized by the thyroid gland. To date, two hundred twenty-seven variations of the TG gene have been identified in humans. Thyroid dyshormonogenesis due to TG gene mutations have an estimated incidence of approximately 1 in 100,000 newborns. The clinical spectrum ranges from euthyroid to mild or severe hypothyroidism. The purpose of the present study was to identify and characterize new variants in the TG gene. We report an Argentine patient with congenital hypothyroidism, enlarged thyroid gland and low levels of serum TG. Sequencing of DNA, expression of chimeric minigenes as well as bioinformatics analysis were performed. DNA sequencing identified the presence of compound heterozygous mutations in the TG gene: the maternal mutation consists of a c.3001+5G > A, whereas the paternal mutation consists of p.Arg296*. Minigen analysis of the variant c.3001+5A performed in HeLa, CV1 and Hek293T cell lines, showed a total lack of transcript expression. So, in order to validate that the loss of expression was caused by such variation, site-directed mutagenesis was performed on the mutated clone, which previously had a pSPL3 vector change, to give rise to a wild-type clone c.3001+5G, endorsing that the mutation c.3001+5G > A is the cause of the total lack of expression. In conclusion, we demonstrate that the c.3001+5G > A mutation causes a rare genotype, altering the splicing of the pre-mRNA. This work contributes to elucidating the molecular bases of TG defects associated with congenital hypothyroidism and expands our knowledge in relation to the pathologic roles of the position 5 in the donor splice site.Fil: Gomes Pio, Mauricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Molina, Maricel Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Siffo, Sofía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Chiesa, Ana Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Rivolta, Carina Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Targovnik, Hector Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentin

Congenital goiter with hypothyroidism caused by a 5′ splice site mutation in the thyroglobulin gene

In this work we have extended our initial molecular studies of a consanguineous family with two affected goitrous siblings (H.S.N. and Ac.S.N.) with defective thyroglobulin (Tg) synthesis and secretion because of a homozygotic deletion of a fragment of 138 nucleotides (nt) in the central region of the Tg mRNA, identified previously in H.S.N. In order to identify the intron/exon boundaries and to analyze the regions responsible for pre-mRNA processing corresponding to a 138 nt deletion, we performed a screening of a human genomic library. The intron/exon junction sequences were determined from one positive clone by sequencing both strands of the DNA template. The results showed that the deletion mapped between positions 5549 and 5686 of the Tg mRNA and corresponded to exon 30. The positions of the exon limits differed by three nucleotides from the previously reported data obtained from direct sequencing of the deleted reverse transcriptase-polymerase chain reaction fragment from H.S.N. These variations are because the intron/exon junctions in this region were not available at the time when the deletion was first described. The deletion does not affect the reading frame of the resulting mRNA and is potentially fully translatable into a Tg polypeptide chain that is shortened by 46 residues. The same 138 nt deletion was observed in reverse transcriptase-polymerase chain reaction studies performed in the thyroid tissues from Ac.S.N. Genomic DNA analysis showed that a G to T transversion was observed at position +1 in the donor site of intron 30. Both affected patients (H.S.N. and Ac.S.N.) are homozygous for the mutation whereas the normal sister (At.S.N.) had a normal allele pattern. The functional consequences of the deletion are related to structural changes in the protein molecule that either could modify the normal routing of the translation product through the membrane system of the cell or could impair the coupling reaction. Probably the mutant Tg polypeptide might be functionally active in the production of thyroid hormone, because in the presence of a normal iodine ingestion (∼150 μg/day), Ac.S.N. was able to maintain normal serum levels of total triiodothyronine (T3) associated with relatively low serum total thyroxine (T4) with normal somatic development without signs of brain damage.Fil: Targovnik, Hector Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Rivolta, Carina Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Mendive, Fernando M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Moya, Christian M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Vono, Jussara. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Medeiros Neto, Geraldo. Universidade de Sao Paulo; Brasi

A Novel Mutation in the Thyroid Hormone Receptor Beta-Gene in a Patient Who Developed Thyroid Nodules

Background: Thyroid hormone Resistance (THR) is a genetic disorder characterized by decreased tissue sensitivity to thyroid hormones (THs). The key finding is the presence of high concentrations of THs in the presence of non-suppressed TSH. Clinical phenotype is highly variable since signs of hormone deficiency, sufficiency and excess could coexist. High TSH produces goiter, being the most common feature. It has been associated with increased risk of developing thyroid nodules, with malignancy risk. Management of nodules associated with THR is as other nodules, with fine-needle aspiration guided by ultrasound (US) as first approach and ATA recommendation of surgery in children when Bethesda category is III or higher.Fil: Hidalgo Coronado, Lorena. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños Pedro Elizalde (ex Casa Cuna); ArgentinaFil: Chamoux, Alfredo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños Pedro Elizalde (ex Casa Cuna); ArgentinaFil: Brunetto, Oscar. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños Pedro Elizalde (ex Casa Cuna); ArgentinaFil: Bre, Monica. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños Pedro Elizalde (ex Casa Cuna); ArgentinaFil: Lahan, Marcelo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños Pedro Elizalde (ex Casa Cuna); ArgentinaFil: Adrover, Ezequiela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Molina, Maricel Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Rivolta, Carina Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaXXVIII Congreso Latinoamericano de Endocrinología PediátricaFlorianópolisBrasilSociedad Latinoamericana de Endocrinología Pediátric

The thyroid as a model for molecular mechanisms in genetic diseases

Las enfermedades tiroideas constituyen una heterogénea colección de anormalidades asociadas a mutaciones en los genes responsables en el desarrollo de la tiroides: factor de transcripción tiroideo 1 (TTF-1), factor de transcripción tiroideo 2 (TTF-2) y PAX8, o en uno de los genes que codifican para las proteínas involucradas en la biosíntesis de hormonas tiroideas como tiroglobulina (TG), tiroperoxidasa (TPO),sistema de generación de peróxido de hidrógeno (DUOX2), cotransportdor de Na/I– (NIS), pendrina (PDS), TSH y receptor de TSH. El hipotiroidismo congénito ocurre con una prevalencia de 1 en 4.000 nacidos. Los pacientes coneste síndrome pueden ser divididos en dos grupos: con hipotiroidismo congénito sin bocio (disembriogénesis) o con bocio (dishormonogénesis). El grupo de disembriogénesis, que corresponde al 85% de los casos, resulta de ectopía,agenesia o hipoplasia. En una minoría de estos pacientes, el hipotiroidismo congénito está asociado con mutaciones en los genes TTF-1, TTF-2, PAX-8, TSH o TSHr. La resencia de bocio congénito (15% de los casos) se ha asociado a mutaciones en los genes NIS, TG, TPO, DUOX2 o PDS. El hipotiroidismo congénito por dishormonogénesis es trasmitido en forma autonómica recesiva. Mutaciones somáticas en el TSHr han sido identificadas en adenomas tiroideos hiperfuncionantes. Otra enfermedad tiroidea bien establecida es la resistencia a hormonas tiroideas(RTH). Es un síndrome de reducida respuesta tisular a la acción hormonal causado por mutaciones localizadas en el gen del receptor de hormonas tiroideas (TR). Mutantes de TRinterfieren con la función del receptor normal por un mecanismo de dominancia negativa. En conclusión, la identificación de mutaciones en los genes de expresión tiroidea ha permitido un mayor entendimiento sobre la relación estructura-función de los mismos. La tiroides constituye un excelente modelo para el estudio molecular de las enfermedades genéticas.The thyroid as a model for molecular mechanisms in genetic diseasesThyroid diseases constitute a heterogeneous collection of abnormalities associated with mutations in genes responsible for the development of thyroid: thyroid transcription factor-1 (TTF-1), thyroid transcriptions factor-2 (TTF-2) and PAX8, or in one of the genes coding for the proteins involved in thyroid hormone biosynthesis such as thyroglobulin (TG), thyroperoxidase (TPO), hydrogen peroxide-generating system (DUOX2), sodium/iodide symporter (NIS), pendrin (PDS), TSH and TSH receptor (TSHr). Congenital hypothyroidism occurs with a prevalence of 1 in 4000 newborns. Patients with this syndrome can be divided into two groups: nongoitrous (dysem/bryogenesis) or goitrous (dyshormonogenesis) congenital hypothyroidism. The dysembryogenesis group, which accounts for 85% of the cases, results from ectopy, agenesis and hypoplasia. In a minority of these patients, the congenital hypothyroidism is associated with mutations in TTF-1, TTF-2, PAX-8, TSH or TSHr genes. The presence of congenital goiter (15% of the cases) has been linked to mutations in the NIS, TG, TPO, DUOX2 or PDS genes. The congenital hypothyroidism with dyshormonogenesis is transmitted as an autosomal recessive trait. Somatic mutations of the TSHr have been identified in hyperfunctioning thyroid adenomas. Another established thyroid disease is the resistance to thyroid hormone (RTH). It is a syndrome of reduced tissue responsiveness to hormonal action caused by mutations located in the thyroid hormone receptor b (TRb) gene. Mutant TRbs interfere with the function of the wild-type receptor by a dominant negative mechanism. In conclusion, the identification of mutations in the thyroid expression genes has provided important insights into structure-function relationships. The thyroid constitutes an excellent model for the molecular study of genetic diseases.Fil: Rivolta, Carina Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Moya, Christian M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Esperante, Sebastian. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gutnisky, Viviana J. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Varela, Viviana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Targovnik, Hector Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentin

Resistance to Thyroid Hormones (RTH). Description of a new mutation

Introducción: La resistencia a hormonas tiroideas (RHT) es un desorden genético de transmisión dominante poco frecuente, caracterizado por una respuesta reducida de los tejidos blanco a las hormonas tiroideas. RHT está ligada al gen del receptor beta de hormona tiroidea (TRβ). El síndrome se identifica por niveles persistentemente elevados de T4 y T3 totales y libres en presencia de TSH no suprimida. Materiales y Métodos: Paciente femenina de 62 años de edad con antecedente de hemitiroidectomía a los 22 años por bocio. Clínicamente, la mujer se encontraba eutiroidea y hemodinámicamente estable. En los exámenes complementarios se constató la presencia de nódulo tiroideo, con estudio citológico benigno y en el laboratorio hormonas tiroideas totales y libres elevadas con TSH no suprimida. La impresión diagnóstica fue RHT, siendo el principal diagnóstico diferencial el tirotropinoma. Se realizó perfil tiroideo completo en el caso índice y en dos familiares de primer grado. Se dosaron gonadotropinas y prolactina, y se realizó RMN de hipófisis en el caso índice. Se estudiaron mutaciones del gen TRβ en ADN genómico en la paciente y en uno de sus familiares. Resultados: Avalando la impresión diagnóstica, tanto el caso índice como los dos familiares mostraron un perfil tiroideo compatible con RHT. El estudio genético identificó una nueva mutación en el exón 10: c.1339C>A que resulta en una sustitución p.P447T. La misma fue observada tanto en el caso índice como en el familiar estudiado. Conclusión: La historia de esta paciente con RHT, al igual que otros casos descriptos en la bibliografía, remarcan la importancia de un diagnóstico adecuado y temprano de esta patología poco frecuente para evitar conductas terapéuticas iatrogénicas y con consecuencias relevantes en la vida de estos pacientes. Paralelamente, se describe una nueva mutación genética en esta familiaIntroduction: Resistance to thyroid hormones (RTH) is an unusual autosomal dominant inherited disorder characterized by a reduced target organ responsiveness to thyroid hormones. RTH is linked to the gene encoding the thyroid receptor β (TR β). This syndrome is characterized by persistent high levels of total and free T4 and T3 while TSH is not inhibited. Materials and Methods: 62 years old female who underwent a partial thyroidectomy because of goiter forty years ago. Clinically, she seemed to be an euthyroid patient and her hemodynamic status was normal. The exams revealed the existence of a benign thyroid nodule, high levels of total and free thyroid hormones and normal values of TSH. Our diagnostic impression was RTH, though differential diagnosis with thyrotropin secreting pituitary adenoma was mandatory. Complete assays of thyroid hormones were performed in the patient and in two first degree relatives. Basal LH, FSH and prolactin were assayed in the patient; and a magnetic resonance imaging of her pituitary gland was obtained. Finally we performed genetic testing in patient’s DNA and a relative’s DNA to demonstrate gene defect. Results: According to our diagnostic impression, not only the patient’s laboratory was compatible with RTH, but so was the laboratory of the two relatives. DNA mutation analisys demonstrated a new mutation in exon 10: c.1339C>A responsible for the substitution p.P447T. This mutation was found in DNA of the patient and DNA of her relative. Conclusion: This patient with RTH, as well as other reported cases, reminds us about the importance of a certain and early diagnosis of this rare disorder in order to avoid iatrogenic treatments. A new mutation is described in this family.Fil: Rojkind, Inés Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Saavedra 15. Instituto de Historia Argentina y Americana "Dr. Emilio Ravignani". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Filosofía y Letras. Instituto de Historia Argentina y Americana "Dr. Emilio Ravignani"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; ArgentinaFil: Pezzuti, D.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; ArgentinaFil: Viale, F.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; ArgentinaFil: Rivolta, Carina Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Olcese, María Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Targovnik, Hector Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Gauna, Alicia Teresa. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; Argentin

Mutations in Thyroid Hormone Beta Receptor Gene Identified in Children with Clinical Resistance to Thyroid Hormones

Introduction: Patients with resistance to thyroid hormones(RTH) show different clinical features. Several mutations have been identified in them.Objective:To describe patients followed up since 2006 with RTH suspicion evaluated for mutations in thyroid hormone beta receptor(THRß)gene.Methods:Children were followed up in our Endocrinology Department.Patient 1:10-yr-old boy with elevated T3, T4 and free T4, normal TSH in routine thyroid testing requested for overweight. Patient 2:0.7-yr- old boy with Down syndrome and elevated T3, T4 and free T4, normal TSH.Patient 3:Boy with abnormal results on neonatal screening, with elevated T3, T4, free T4 and TSH.Patient 4:4.7?yr-old girl with elevated T3, T4 and free T4, normal TSH in routine thyroid testing requested for low weight.Patient 5: 1-yr- old boy with elevated T3, T4 and free T4, normal TSH in routine thyroid testing requested for low weight.Patient 6:Boy with congenital hypothyroidism diagnosed by screening with elevated T3, T4, free T4 and TSH.Clinical manifestations:Patients 1, 4 and 5 showed palpitations, tachycardia.Familial antecedents: Patient 3 has two brothers with similar RTH profile. Patient 4 had a sister who died at 3 months of age and mother with confirmed RTH. Patient 6 had an aunt with RTH profile.Thyroid ultrasound. All patients had normal gland size except patient 6 who had an hypoplastic gland. Patient 4 showed goiter at follow up.Treatment:Patient 1 received metimazol; patients 1,4 and 5 beta blockers and patient 6 levothyroxine.Molecular biology analysis: genomic DNA was isolated from blood cells and the exons 7-10 of the THRß gene, including the flanking intronic regions were amplified by PCR. DNA sequences from each amplified fragment were performed with the Taq polymerase-based chain terminator method and using the specific forward and reverse THRß primers. Results.Direct sequence analysis revealed a novel missense mutation in exon 10 in patient 3, c.1329G>T transvertion that results in a p.K443N substitution and two known missense mutations: c.1357C>A, p.P453T (Patient 1)in exon 10 and c.949G>A, p.A317T (Patient 4) in exon 9.Conclusion:THRß gene mutations were found in half of the patients with RTH, including a new mutation.Although goiter is a common feature in RTH, only one patient presented it.These findings support the importance of searching THRßgene mutations in suspected individuals to achieve an adequate follow-up and treatment in patients with RHT.Fil: Gonzáles, Viviana. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Balbi, Viviana A.. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Morin, Analía. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Reinoso, Andrea. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Vitale, Laura. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Ricci, Jaime. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Espósito, Mariela. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Martín, Rodrigo. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Tournier, Andrea L.. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata; ArgentinaFil: Adrover, Ezequiela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología; ArgentinaFil: Molina, Maricel Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología; ArgentinaFil: Targovnik, Hector Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología; ArgentinaFil: Rivolta, Carina Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología; ArgentinaXXVIII Congreso Latinoamericano de Endocrinología PediátricaFlorianópolisBrasilSociedad Latinoamericana de Endocrinología Pediátric

Biología Molecular e Hipertiroidismo

En la presente década un nuevo concepto emergió en la endocrinología: mutaciones en distintos factores involucrados en la transmisión del mensaje hormonal desde la superficie celular a la cascada regulatoria intracelular pueden activar la respuesta celular en forma autónoma, originando cuadros clínicos desacoplados de los mecanismos regulatorios habituales y sentando la base fisiopatológica de diversas enfermedades endócrinas como ser el hipoparatiroidismo familiar, la testotoxicosis, el Síndrome de McCune-Albright, el 50% de los enfermos con adenomas hipofisarios secretores de hormona de crecimiento y los casos de hipertiroidismo no autoinmune. El hipertiroidismo es un desorden tiroideo muy frecuente. La mayor parte de los casos se deben a mecanismos autoinmunes representados por la enfermedad de Graves, en la cual autoanticuerpos activan la cascada adenilciclasa- AMPc desarrollando un bocio difuso con signos y síntomas de hipertiroidismo. Un segundo grupo de hipertiroidismos está constituído por aquellos casos en los cuales distintas mutaciones activan dicha cascada en foma autónoma por virtual desacople de la proteína G. Dichas mutaciones se observan en las dos primeras etapas de la traducción de señales relacionadas a la proteína G: en los receptores de membrana y en la propia proteína G. El objetivo general de la presente unidad temática es estudiar los mecanismos moleculares relacionados al hipertiroidismo no autoinmune por activación del receptor de tirotrofina y de la proteína G. Comenzaremos estudiando la estructura de ambas proteínas para luego conocer los mecanismos moleculares relacionados a la traducción de señales vía receptor-proteína G-adenilciclasa, la estructura del gen que codifica para el receptor de TSH (TSHR) y las mutaciones que originan las diferentes formas clínicas del hipertiroidismo no autoinmune. Nos abocaremos al análisis de cada uno de los enfoques mencionados.n la presente década un nuevo concepto emergió en la endocrinología: mutaciones en distintos factores involucrados en la transmisión del mensaje hormonal desde la superficie celular a la cascada regulatoria intracelular pueden activar la respuesta celular en forma autónoma, originando cuadros clínicos desacoplados de los mecanismos regulatorios habituales y sentando la base fisiopatológica de diversas enfermedades endócrinas como ser el hipoparatiroidismo familiar, la testotoxicosis, el Síndrome de McCune-Albright, el 50% de los enfermos con adenomas hipofisarios secretores de hormona de crecimiento y los casos de hipertiroidismo no autoinmune. El hipertiroidismo es un desorden tiroideo muy frecuente. La mayor parte de los casos se deben a mecanismos autoinmunes representados por la enfermedad de Graves, en la cual autoanticuerpos activan la cascada adenilciclasa- AMPc desarrollando un bocio difuso con signos y síntomas de hipertiroidismo. Un segundo grupo de hipertiroidismos está constituído por aquellos casos en los cuales distintas mutaciones activan dicha cascada en foma autónoma por virtual desacople de la proteína G. Dichas mutaciones se observan en las dos primeras etapas de la traducción de señales relacionadas a la proteína G: en los receptores de membrana y en la propia proteína G. El objetivo general de la presente unidad temática es estudiar los mecanismos moleculares relacionados al hipertiroidismo no autoinmune por activación del receptor de tirotrofina y de la proteína G. Comenzaremos estudiando la estructura de ambas proteínas para luego conocer los mecanismos moleculares relacionados a la traducción de señales vía receptor-proteína G-adenilciclasa, la estructura del gen que codifica para el receptor de TSH (TSHR) y las mutaciones que originan las diferentes formas clínicas del hipertiroidismo no autoinmune. Nos abocaremos al análisis de cada uno de los enfoques mencionados.Fil: Rivolta, Carina Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentin