HIV-2 Protease resistance defined in yeast cells

BACKGROUND: Inhibitors of the HIV-1 Protease currently used in therapeutic protocols, have been found to inhibit, although at higher concentrations, the HIV-2 encoded enzyme homologue. Similar to observations in HIV-1 infected individuals, therapeutic failure has also been observed for some patients infected with HIV-2 as a consequence of the emergence of viral strains resistant to the anti-retroviral molecules. In order to be able to define the specific mutations in the Protease that confer loss of susceptibility to Protease Inhibitors, we set up an experimental model system based in the expression of the viral protein in yeast. RESULTS: Our results show that the HIV-2 Protease activity kills the yeast cell, and this process can be abolished by inhibiting the viral enzyme activity. Since this inhibition is dose dependent, IC(50 )values can be assessed for each anti-retroviral molecule tested. We then defined the susceptibility of HIV-2 Proteases to Protease Inhibitors by comparing the IC(50 )values of Proteases from 7 infected individuals to those of a sensitive wild type laboratory adapted strain. CONCLUSION: This functional assay allowed us to show for the first time that the L90M substitution, present in a primary HIV-2 isolate, modifies the HIV-2 Protease susceptibility to Saquinavir but not Lopinavir. Developing a strategy based on the proposed yeast expressing system will contribute to define amino acid substitutions conferring HIV-2 Protease resistance

La résistance de la protéase du VIH-2 (une approche phénotypique à l'aide de la levure)

La protéase virale constitue une cible majeure de la thérapie anti-VIH. L émergence, au cours du traitement, de virus résistants est liée à l apparition de mutations dans la protéase virale. Mon but a été d élaborer une stratégie originale pour définir les mutations conférant la résistance aux traitements. Cette stratégie repose sur l effet létal de l expression de la protéase dans la levure et sa réversion par l ajout d inhibiteurs dans le milieu de culture. Ceci a permis de définir (i) le phénotype de résistance des protéases de VIH-2 issus de patients en échec thérapeutique, (ii) le spectre des mutations dans la protéase du VIH-2 conférant une résistance à deux inhibiteurs majeures de la protéase virale , et (iii) les bases moléculaires de l action de l expression de la Protéase virale dans la levure.AIX-MARSEILLE2-BU Méd/Odontol. (130552103) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Yeast-based assay for measuring the functional activity of an HIV-1 protease in response to an antiviral agent

US Patent 9,493,769no abstrac