Endocrinological evaluation of ovarian cycle in howler monkeys (Alouatta caraya - HUMBOLDT, 1812) by extraction and measurement of fecal steroids

A endocrinologia ovariana de cinco fêmeas de bugio da espécie Alouatta caraya foi estudada por meio de extração e dosagem de metabólitos fecais de estrógenos e progestinas durante um período de cinco meses. Adicionalmente observou-se a presença de eritrócitos por meio de citologia vaginal em três das fêmeas estudadas. Duas fêmeas, uma em condição nutricional desfavorável e outra pré-púbere, apresentaram concentrações basais de estrógenos com mediana menor que 3,7 ng/g e de progestinas menor que 29,7 ng/g de fezes úmidas. Nas outras três fêmeas a mediana dos valores de pico de estrógenos fecais foi 711,55 ng/g e dos valores basais 130,51 ng/g de fezes úmidas. Para as progestinas fecais a mediana dos valores de pico foi 2653,54 ng/g e dos valores basais foi 149,88 ng/g de fezes úmidas. Nestes três animais as concentrações de ambos os metabólitos apresentaram uma variação cíclica e o intervalo entre picos de estrógenos fecais foi 19,6±1,9 dias (média±EPM). Estes metabólitos permaneceram elevados durante 9,1±0,9 dias. Elevações sustentadas de metabólitos fecais de progestinas acompanhadas de pico e elevações de metabólitos fecais de estrógenos foram observadas em apenas quatro períodos. Nestes casos ambos os metabólitos elevaram-se aproximadamente ao mesmo tempo e estimou-se que a ovulação tivesse ocorrido antes do início destas elevações. Os períodos de sangramento coincidiram com a queda nas concentrações de estrógenos e progestinas fecais.The ovarian endocrinology was assessed in five female howler monkeys (Alouatta caraya) by means of estrogen and progestogen metabolites extracted from fecal samples. Measurements were conducted for a period of five months, and erythrocytes were observed by vaginal cytology, in three females. In one subadult and in one undernourished female, estrogen concentrations remained at median basal levels <3.7ng/g, and the progestogen concentrations were <29.7ng/g of wet feces for almost the entire period of the experiment. For the other three females, median fecal estrogen peak concentration was 711.55ng/g and basal concentration was 130.51ng/g of wet feces. Median fecal progestogen concentration was 2653.54ng/g and for basal concentration was 149.88 ng/g of wet feces. The three females were found with a cyclical pattern for both metabolites concentrations, with fecal estrogen peak intervals of 19.6±1.9 (mean±SEM) days and the estrogen metabolites remained elevated for 9.1±0.9 days. Fecal progestogen showed sustained elevations concurrently with fecal estrogen increase only in four periods and it was presumed that ovulation had occurred before the onset of those elevations. Bleeding periods occurred with the falling of both steroid metabolites

Collection and evaluation of semen from the squirrel monkey (Saimiri sciureus) using vibroestimulation: from conditioning to seminal coagulum

Os macacos de cheiro (S. sciureus) são primatas neotropicais bastante ativos e que se estressam facilmente em cativeiro. Os métodos de colheita e avaliação do sêmen na espécie não foram padronizados de forma a reproduzi-los em diferentes centros de criação. O sêmen forma um firme coágulo imediatamente após a ejaculação e até o momento, nenhum método foi capaz de dissolvê-lo totalmente. Assim, a proposta deste estudo foi avaliar o condicionamento de S. sciureus ao método de colheita de sêmen por vibroestimulação peniana com o auxílio de observações comportamentais e dosagem de cortisol sérico. Objetivou-se ainda analisar o sêmen dos animais por meio de testes físicos e morfofuncionais, com e sem a utilização de enzima proteolítica para a dissolução do coágulo seminal. Foram estudados 12 machos adultos, alojados em dupla, em ambiente controlado. O condicionamento a vibroestimulação peniana foi desempenhado pela técnica de reforço positivo por meio de recompensa alimentar. Para a dissolução do coágulo seminal empregou-se a tripsina em três doses e dois tempos de incubação. O cortisol foi dosado pelo método de radioimunoensaio em amostras de soro. No presente estudo os animais foram condicionados às estimulações, porém a taxa de obtenção de ejaculados foi baixa. Contudo, a análise dos parâmetros físicos e morfofuncionais dos ejaculados obtidos mostrou altas porcentagens de espermatozóides móveis e com movimentos progressivos retilíneos com progressão boa à rápida. Somente os parâmetros concentração e espermatozóides com membrana plasmática íntegra foram menores do que o descrito para o gênero. A integridade do acrossomo e grau de atividade mitocondrial foram descritos pela primeira vez para a espécie e apresentaram alta porcentagem de integridade. O tratamento com a tripsina não foi eficaz na dissolução do coágulo nas concentrações de 0,5, 1 ou 5%, mas também não causou danos significativos aos espermatozóides. A dosagem de cortisol sérico demonstrou haver uma resposta aguda e não duradoura ao estresse logo após o procedimento de colheita de sêmen. O maior sucesso no emprego da vibroestimulação peniana para colheita de sêmen de macacos de cheiro parece depender de ajustes nas técnicas de contenção e estimulação, sazonalidade reprodutiva e contato olfativo com as fêmeas.The squirrel monkeys (S. scireus) are very active neotropical primates, who get easily stressed in captivity. The semen collection and evaluation methods in this species have not been standardized to make possible their reproduction in different breeding centers. The semen turns into a firm coagulum immediately after the ejaculation, and, so far, any method was able to dissolve it completely. Therefore, the aim of this study was to evaluate the conditionment of S. sciureus to the semen collection method through the penile vibrostimulation with the assistance of behavioural observation and serum cortisol. Another objective was to analyze the semen of these animals through physical and morphofunctional tests, with and without the use of proteolytic enzymes to dissolve the semen coagulum. The study was performed in twelve male adults, hosted in couples, in a controlled environment. The training for the penile vibrostimulation was made through the positive reinforcement technique, with food reward. To dissolve the semen coagulum, it was made use of trypsin, at three doses and two incubation periods. Cortisol was measured through radioimmunoassay in serum samples. For this study, the animals were conditioned to the stimulations, though the semen attainment rate was low. Therefore, the analysis of the physical and morphofunctional semen parameters resulted in high percentages of mobile spermatozoa, with a straight-line progressive movement (good to fast progression). Only the parameters concentration and integrity of sperm plasma membrane were lower than the pattern for this genus. The achrossome integrity and the mitochondrial activity were described for the first time for this species and presented high integrity percentage. The treatment with trypsin was effective in dissolving the coagulum in concentrations of 0.5, 1 or 5%, but did not bring significant hazard to the spermatozoa. Measurement of serum cortisol showed an acute and not durable response to stress immediately after semen collection proceedings. The biggest success in the employment of the penile vibrostimulation in the collection of the squirrel monkey semen seems to depend on the handling and stimulation techniques, reproductive seasonality and contact with the female´s smell

Collection and evaluation of semen from the squirrel monkey (Saimiri sciureus) using vibroestimulation: from conditioning to seminal coagulum

Os macacos de cheiro (S. sciureus) são primatas neotropicais bastante ativos e que se estressam facilmente em cativeiro. Os métodos de colheita e avaliação do sêmen na espécie não foram padronizados de forma a reproduzi-los em diferentes centros de criação. O sêmen forma um firme coágulo imediatamente após a ejaculação e até o momento, nenhum método foi capaz de dissolvê-lo totalmente. Assim, a proposta deste estudo foi avaliar o condicionamento de S. sciureus ao método de colheita de sêmen por vibroestimulação peniana com o auxílio de observações comportamentais e dosagem de cortisol sérico. Objetivou-se ainda analisar o sêmen dos animais por meio de testes físicos e morfofuncionais, com e sem a utilização de enzima proteolítica para a dissolução do coágulo seminal. Foram estudados 12 machos adultos, alojados em dupla, em ambiente controlado. O condicionamento a vibroestimulação peniana foi desempenhado pela técnica de reforço positivo por meio de recompensa alimentar. Para a dissolução do coágulo seminal empregou-se a tripsina em três doses e dois tempos de incubação. O cortisol foi dosado pelo método de radioimunoensaio em amostras de soro. No presente estudo os animais foram condicionados às estimulações, porém a taxa de obtenção de ejaculados foi baixa. Contudo, a análise dos parâmetros físicos e morfofuncionais dos ejaculados obtidos mostrou altas porcentagens de espermatozóides móveis e com movimentos progressivos retilíneos com progressão boa à rápida. Somente os parâmetros concentração e espermatozóides com membrana plasmática íntegra foram menores do que o descrito para o gênero. A integridade do acrossomo e grau de atividade mitocondrial foram descritos pela primeira vez para a espécie e apresentaram alta porcentagem de integridade. O tratamento com a tripsina não foi eficaz na dissolução do coágulo nas concentrações de 0,5, 1 ou 5%, mas também não causou danos significativos aos espermatozóides. A dosagem de cortisol sérico demonstrou haver uma resposta aguda e não duradoura ao estresse logo após o procedimento de colheita de sêmen. O maior sucesso no emprego da vibroestimulação peniana para colheita de sêmen de macacos de cheiro parece depender de ajustes nas técnicas de contenção e estimulação, sazonalidade reprodutiva e contato olfativo com as fêmeas.The squirrel monkeys (S. scireus) are very active neotropical primates, who get easily stressed in captivity. The semen collection and evaluation methods in this species have not been standardized to make possible their reproduction in different breeding centers. The semen turns into a firm coagulum immediately after the ejaculation, and, so far, any method was able to dissolve it completely. Therefore, the aim of this study was to evaluate the conditionment of S. sciureus to the semen collection method through the penile vibrostimulation with the assistance of behavioural observation and serum cortisol. Another objective was to analyze the semen of these animals through physical and morphofunctional tests, with and without the use of proteolytic enzymes to dissolve the semen coagulum. The study was performed in twelve male adults, hosted in couples, in a controlled environment. The training for the penile vibrostimulation was made through the positive reinforcement technique, with food reward. To dissolve the semen coagulum, it was made use of trypsin, at three doses and two incubation periods. Cortisol was measured through radioimmunoassay in serum samples. For this study, the animals were conditioned to the stimulations, though the semen attainment rate was low. Therefore, the analysis of the physical and morphofunctional semen parameters resulted in high percentages of mobile spermatozoa, with a straight-line progressive movement (good to fast progression). Only the parameters concentration and integrity of sperm plasma membrane were lower than the pattern for this genus. The achrossome integrity and the mitochondrial activity were described for the first time for this species and presented high integrity percentage. The treatment with trypsin was effective in dissolving the coagulum in concentrations of 0.5, 1 or 5%, but did not bring significant hazard to the spermatozoa. Measurement of serum cortisol showed an acute and not durable response to stress immediately after semen collection proceedings. The biggest success in the employment of the penile vibrostimulation in the collection of the squirrel monkey semen seems to depend on the handling and stimulation techniques, reproductive seasonality and contact with the female´s smell

Endocrinological evaluation of ovarian cycle in howler monkeys (Alouatta caraya - HUMBOLDT, 1812) by extraction and measurement of fecal steroids

A endocrinologia ovariana de cinco fêmeas de bugio da espécie Alouatta caraya foi estudada por meio de extração e dosagem de metabólitos fecais de estrógenos e progestinas durante um período de cinco meses. Adicionalmente observou-se a presença de eritrócitos por meio de citologia vaginal em três das fêmeas estudadas. Duas fêmeas, uma em condição nutricional desfavorável e outra pré-púbere, apresentaram concentrações basais de estrógenos com mediana menor que 3,7 ng/g e de progestinas menor que 29,7 ng/g de fezes úmidas. Nas outras três fêmeas a mediana dos valores de pico de estrógenos fecais foi 711,55 ng/g e dos valores basais 130,51 ng/g de fezes úmidas. Para as progestinas fecais a mediana dos valores de pico foi 2653,54 ng/g e dos valores basais foi 149,88 ng/g de fezes úmidas. Nestes três animais as concentrações de ambos os metabólitos apresentaram uma variação cíclica e o intervalo entre picos de estrógenos fecais foi 19,6±1,9 dias (média±EPM). Estes metabólitos permaneceram elevados durante 9,1±0,9 dias. Elevações sustentadas de metabólitos fecais de progestinas acompanhadas de pico e elevações de metabólitos fecais de estrógenos foram observadas em apenas quatro períodos. Nestes casos ambos os metabólitos elevaram-se aproximadamente ao mesmo tempo e estimou-se que a ovulação tivesse ocorrido antes do início destas elevações. Os períodos de sangramento coincidiram com a queda nas concentrações de estrógenos e progestinas fecais.The ovarian endocrinology was assessed in five female howler monkeys (Alouatta caraya) by means of estrogen and progestogen metabolites extracted from fecal samples. Measurements were conducted for a period of five months, and erythrocytes were observed by vaginal cytology, in three females. In one subadult and in one undernourished female, estrogen concentrations remained at median basal levels <3.7ng/g, and the progestogen concentrations were <29.7ng/g of wet feces for almost the entire period of the experiment. For the other three females, median fecal estrogen peak concentration was 711.55ng/g and basal concentration was 130.51ng/g of wet feces. Median fecal progestogen concentration was 2653.54ng/g and for basal concentration was 149.88 ng/g of wet feces. The three females were found with a cyclical pattern for both metabolites concentrations, with fecal estrogen peak intervals of 19.6±1.9 (mean±SEM) days and the estrogen metabolites remained elevated for 9.1±0.9 days. Fecal progestogen showed sustained elevations concurrently with fecal estrogen increase only in four periods and it was presumed that ovulation had occurred before the onset of those elevations. Bleeding periods occurred with the falling of both steroid metabolites

Variation in Clitoral Length in Rhesus Macaques (Macaca mulatta)

Clitoromegaly in the neonatal period is an important morphologic sign that can be useful for sexual determination in aberrant cases. In rhesus monkeys, differentiation of the external genitalia occurs early during gestation (at 55 to 60 d) and is complete by approximately 80 d. Most of the critical steps in genital differentiation in primates occur prenatally. We sought to determine clitoral size in normal rhesus monkeys (Macaca mulatta) and possible effects of age and inheritance. Clitoral length was highly variable and had no relationship to fertility. Statistical evaluation revealed no association in the distribution of daughters with and without clitoris between mothers with and without clitoris. However, even when mated with several female monkeys, some male macaques produced primarily daughters without clitoris

Tracking the Ovarian Cycle in Black-and-Gold Howlers (Alouatta caraya) by Measuring Fecal Steroids and Observing Vaginal Bleeding

A better understanding of a species` reproductive physiology can help conservation programs to manage primates in the wild and develop assisted reproductive technologies in captivity. We investigated whether measurements of fecal progestin and estrogen metabolites obtained by a radioimmunoassay could be used to monitor the ovarian cycle of Alouatta caraya. We also compared the occurrence of vaginal bleeding with the hormone profiles. We collected fecal samples from 3 adult and 1 subadult captive female over 5 mo and performed vaginal cytology for the adults. The interval between fecal progestin surges in the adult females was 19.11 +/- 2.14 d (n = 18 cycles). Fecal progestin concentrations remained at basal values for 9.83 +/- 2.21 d (n = 18) and rose to elevated values for 9.47 +/- 0.72 d (n = 19). The subadult female showed basal levels of fecal estrogen and progestin concentrations throughout the study, suggesting that our hormone measurements are valid to monitor the ovarian cycle. Bleeding periods coincided with basal levels of fecal estrogens and progestin at intervals of 19.8 +/- 0.9 d and lasted for 4.1 +/- 1.0 d. Although we obtained these data from only 3 individuals, the results indicate that this species likely has a menstrual-type ovarian cycle. These data provide the first endocrine profile for the Alouatta caraya ovarian cycle and are similar to results obtained for other howler species. This similarity is important for comparative studies of howlers, allowing for a better understanding of their reproductive physiology and contributing to a critical information base for managing Alouatta species.Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Sao Paulo (FAPESP)[02/10920-5

Ultrassonografia, hematologia e bioquímica hepática e renal de macacos-da-noite,Aotus azarai infulatus(Kuhl, 1820) criados em cativeiro.

Os primatas do gênero Aotus representam excelentes modelos experimentais, sendo recomendados para estudos da fisiologia da visão e pesquisas de malária. O trabalho objetivou realizar a avaliação ultrassonográfica, hematológica e bioquímica de Aotus azarai infulatus do Centro Nacional de Primatas (CENP/Ananindeua/PA). Foram avaliados 69 animais (44 machos e 25 fêmeas), em três faixas etárias (FE1 = 3 meses a 1 ano; FE2 = 2 a 6 anos e FE3 = >7 anos). Os exames ultrassonográficos foram realizados utilizando-se o aparelho de ultrassom SonoAce 9900®. As análises coproparasitológicas foram realizadas mediante exame direto, flutuação e sedimentação. Dos animais que não demonstraram alterações clínicas, ultrassonográficas e coproparasitológicas (n = 41, 26 machos e 15 fêmeas), foram coletadas amostras de sangue para realização de hemograma e bioquímica, avaliando-se as enzimas Aspartato Aminotransferase (AST), Alanina Aminotransferase (ALT), Fosfatase Alcalina (FA), Gama Glutamiltransferase (GGT), Proteínas Totais, Bilirrubina, Nitrogênio Uréico Sanguíneo (BUN) e Creatinina (CREAT). Os resultados obtidos foram submetidos à ANOVA e teste de Tukey. Ao exame ultrassonográfico, o fígado apresentou parênquima homogêneo, ecogenicidade uniforme e contornos regulares. Os rins apresentaram contornos regulares, formato elíptico, e textura ecogênica homogênea. Observaram-se diferenças significativas (p < 0,05) no hematócrito (46,41 ± 3,47 e 42,15 ± 4,06%), hemácias (6,09 ± 0.47 e 5,51 ± 0,48 x 106 mm-3), hemoglobina (16,03 ± 1,24 e 14,13 ± 1,32 g dL-1) e MCHC (34,48 ± 1,55 e 33,47 ± 1,03%) de machos e fêmeas, respectivamente. Nos exames de função hepática a FA foi significativamente influenciada pela faixa etária (FE1 = 592,8 ± 372,7; FE2 = 151,0 ± 56,87 e FE3 = 96,27 ± 31,11 UL-1). A bioquímica renal demonstrou que houve influência do sexo com relação ao BUN (machos = 30,23 ± 16,91 e fêmeas = 20,46 ± 9,43 mg dL-1) e creatinina (machos = 0,68 ± 0,12 e fêmeas = 0,59 ± 0,11 mg dL-1). Além disso, a concentração de creatinina foi significativamente influenciada pela faixa etária (FE1 = 0,51 ± 0,10; FE2 = 0,65 ± 0,05 e FE3 = 30,71 ± 0,12 mg dL-1). Os resultados demonstram que alguns parâmetros hematológicos e bioquímicos de macacos-da-noite podem ser influenciados pelo sexo e faixa etária.Primates of the genus Aotus are excellent experimental models. Aotus spp. have been recommended as models for studies on vision and malaria. This research had the objective to perform a ultrasonographic, hematological and biochemical evaluation of owl monkeys from the National Primate Center (CENP/Ananindeua/PA). Sixty nine animals were evaluated (44 males and 25 females), at three different age groups (FE1 = 3 months to 1 year old; FE2=2 to 6 years old and FE3=more than seven years old). The Ultrasonographic exams were performed using the ultrasound SonoAce 9900®. The coproparasitological were performed utilizing the direct exam, fluctuation and sedimentation. From the animals that did not show clinical, ultrasonographic and coproparasitological alterations (n= 41, 26 males and 15 females), blood samples were collected for complete hemogram and biochemical determination, evaluating the enzymes aspartate aminotransferase (AST), aspartate aminotransferase (ALT), alkaline fosfatase (FA), gamma glutamiltransferase (GGT), total protein, bilirrubin, blood urea nitrogen (BUN) and creatinine (CREAT). The results obtained were submitted to ANOVA and the Tukey test. Significant difference (p < 0.05) was observed in the hematocrit (46.41 ± 3.47 e 42.15 ± 4.06%), red blood cells (6.09 ± 0.47 e 5.1 ± 0.48 x 106 mm-3), hemoglobin (16.03 ± 1.24 e 14.13 ± 1.32 g dL-1) and MCHC (34.48 ± 1.55 e 33.47 ± 1.03%) of males and females, respectively. In the exams for hepatic function, the FA was significantly influenced by the age group (FE1=592.8 ± 372.7; FE2 = 151.0 ± 56.87 e FE3 = 96.27 ± 31.11 UL-1). The renal biochemistry showed that there was influence of sex in relation to BUN (males = 30.23 ± 16.91 and females = 20.46 ± 9.43 mg dL-1) and creatinine (males = 0.68 ± 0.12 and females = 0.59 ± 0.11 mg dL-1). The results show that some hematological and biochemical results in healthy owl monkeys may be influenced by sex and age group

Renal Evaluation of Aotus azarai infulatus by Ultrasonography and Serum Chemistry Profile

This study aimed to characterize anatomical and biochemical properties of owl monkey kidneys in order to provide normal reference values. Sixty-nine Aotus azarai infulatus (45 males and 24 females) were divided into four different age groups (AG1: 3 months1 year; AG2: 23 years; AG3: 46 years; and AG4: over 7 years old). The monkeys were evaluated with a serum chemistry profile, focusing on serum creatinine (SCr) and blood urea nitrogen (BUN) and with ultrasound. Mean body mass differed among the age groups. This significance was attributed to AG1 body mass being significantly lower than in AG2 and that in both AG2 and AG3 being significantly lower than in the two older age groups (AG3 and AG4). SCr and BUNconcentrations differed significantly between the sexes and SCr level correlated positively with age. In contrast, renal measurements did not differ between males and females. Left and right renal volumes did not differ significantly within age groups, or among AG2, AG3, and AG4. Renal volumes in AG1, however, while not differing from those in AG2, did differ significantly from those in AG3 and AG4. In conclusion, this study provides ultrasonographic reference values for the morphology the kidneys in A. a. infulatus. Evidence is also provided that SCr and BUNlevels in owl monkeys are influenced by the sex and age of the individual, factors that should be considered when interpreting test results. Am. J. Primatol. 74:482-490, 2012. (c) 2012 Wiley Periodicals, Inc.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq