Mecanismo de acción antiplaquetario de guanosina

49 p.Guanosina es un nucleósido de origen natural, que se puede encontrar en frutas y verduras. Sin embargo, su efecto sobre la agregación de plaquetas, que es un factor crítico en la trombosis arterial. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue examinar sistemáticamente los mecanismos detallados de guanosina en la prevención de la activación plaquetaria. Se evaluó el efecto de guanosina en agregación plaquetaria utilizando ADP 4 uM, colágeno 1ug/mL y ácido araquidónico 1 mM. Los niveles intraplaquetarios de AMPc y la expresión de PKA fueron determinados mediante Elisa kit y Western blot, respectivamente. Guanosina inhibió la agregación plaquetaria inducida por ADP, colágeno y ácido araquidónico. A distintas concentraciones guanosina aumento los niveles de AMPc intraplaquetario y se observó la fosforilación de PKA. Por lo tanto guanosina es un agente antiplaquetario eficaz

Efecto de la guanosina sobre la activación de proteína quinasa C (PKC) en plaquetas : Estudio por citometría de flujo

47 p.Guanosina es un nucleósido de origen natural, que se puede encontrar en diversas frutas y hortalizas. Sin embargo, su efecto sobre la agregación de plaquetas, que es un factor crítico en la trombosis arterial, todavía no está dilucidado. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue examinar sistemáticamente los mecanismos detallados de guanosina en la prevención de la activación plaquetaria. Se evaluó el efecto de guanosina en la activación plaquetaria utilizando TRAP-6. Los niveles intraplaquetarios de proteína quinasa C (PKC) fueron determinados mediante citometría de flujo. Guanosina inhibió la activación plaquetaria inducida por TRAP-6. De esta forma a distintas concentraciones guanosina disminuyo la activación plaquetaria a través de una disminución en la activación de PKC. Por lo tanto guanosina es un agente antiplaquetario eficaz

Estandarización de metodología para el estudio de la función mitocondrial plaquetaria frente al daño oxidativo y el efecto protector por derivados de hidroquinonas

43 p.Las enfermedades cardiovasculares (ECV) son la principal causa de muerte a nivel mundial, representando aproximadamente el 35% de ellas. La aterotrombosis (la aterosclerosis y las complicaciones trombóticas relacionadas) es una enfermedad inflamatoria crónica sistémica caracterizada por la presencia de placas ricas en lípidos en la pared de las arterias que suele expresarse clínicamente en forma de ECV. En dicho proceso aterotrombótico, las plaquetas participan tanto en la etapa inicial como en la final. El aumento en los niveles del estrés oxidativo puede conducir a alteraciones en la funcionalidad y regulación plaquetaria. Dentro de los elementos que aumentan los niveles del estrés oxidativo, está la disfunción mitocondrial. En esta memoria la función mitocondrial plaquetaria fue estudiada a través del potencial de la membrana mitocondrial (ΔΨm), empleando el kit JC-1 (JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit) y el citómetro de flujo (Accuri C6, BD, USA). Luego utilizando esta metodología se estudió la disfunción mitocondrial plaquetaria inducida por el péptido activador del receptor de trombina (TRAP-6), peróxido de hidrógeno (H2O2) y rotenona (inhibidor entre el complejo I mitocondrial), todos estos capases de producir daño oxidativo por si solo. Los resultados demostraron que la preincubación de las plaquetas con TRAP-6, H2O2 o rotenona induce una alteración significativa del potencial de membrana mitocondrial. Luego de la estandarización de esta metodología de disfunción mitocondrial, se evaluó la actividad protectora mitocondrial de compuestos bioactivos (derivados de hidroquinona). Los compuestos JP-H y mito-C6 mostraron una significativa actividad protectora de la función mitocondrial. La disfunción mitocondrial tiene una directa relación con la activación plaquetaria. Por lo tanto, la generación de metodologías y actividad protectora mitocondrial de compuestos bioactivos son la clave para la búsqueda de nuevos enfoques antiplaquetarios

Estudio del cambio conformacional de las plaquetas inducido por daño mitocondrial y capacidad protectora del compuesto MitoQ

86 p.Las enfermedades cardiovasculares son la primera causa de muerte en el mundo, donde el desarrollo de aterosclerosis arterial tiene suma relevancia. Las plaquetas juegan un rol principal en los eventos cardiovasculares, debido a que cuando se activan, se adhieren y agregan en el sitio de lesión endotelial, estimulando la formación de trombos que impiden el correcto flujo sanguíneo. Esto hace necesario dilucidar los mecanismos implicados en los eventos trombóticos, a través del estudio de la función plaquetaria. En esta investigación se estudió el cambio forma, aumento de tamaño y emisión de filopodios en suspensiones de plaquetas humanas sometidas a daño mitocondrial in vitro por acción de Rotenona. Además se estudió el efecto protector de MitoQ, el cual fue capaz de inhibir el daño mitocondrial en las plaquetas. El estudio se realizó mediante marcaje con anticuerpos específicos fluorescentes, visualizadas por microscopia de fluorescencia y fotografiadas con el software ZEISS ZEN imaging

Actividad antiagregante plaquetaria de derivados de hidroquinona

42 p.Las enfermedades cardiovasculares (ECV) son la principal causa de muerte en el mundo. Uno de los problemas asociados a éstas son los llamados eventos trombóticos, para los cuales en la actualidad existe tratamiento farmacológico, pero debido a la gran progresión de nuevos casos que ocurre año a año, se hace necesaria la investigación y generación de avances de nuevos agentes o fármacos que en lo posible posean una alta efectividad y con las menores reacciones adversas al actuar como antitrombótico. Una estrategia del último tiempo ha sido la investigación de compuestos bioactivos a partir de frutas y hortalizas; ejemplo de ello ha sido la investigación a partir de compuestos derivados del tomate. Hasta la fecha también se ha investigado la actividad biológica presentada por compuestos bioactivos de origen natural y sintético como lo son las quinonas y sus derivados; entre las principales actividades descritas por este tipo de compuestos se encuentran las de actuar como agente de actividad anticancerígena, antiproliferativa y antimicrobiana; asimismo también se ha demostrado actividad antiplaquetaria por parte de compuestos sintéticos basados en quinonas. En base a esto, el objetivo de este trabajo es el de evaluar la actividad antiagregante plaquetaria de derivados de hidroquinonas

Inhibición de la activación de caspasas por derivados de hidroquinonas para la prevención de la disfunción mitocondrial plaquetaria

54 p.Las enfermedades cardiovasculares se han convertido en un problema de salud pública a nivel mundial y su origen se encuentra relacionado a trastornos en la funcionalidad plaquetaria. Se ha reportado que la alteración mitocondrial plaquetaria, producida por la acumulación de especies reactivas de oxigeno (ROS), se asocia activamente al desarrollo de enfermedades degenerativas. En base a esto, se ha planteado el uso de los denominados “nutrientes mitocondriales” como una alternativa terapéutica, capaz de restablecer los niveles bioenergéticos. Esta memoria busca estandarizar la determinación de caspasas 3/7 activadas en plaquetas, mediante fluorescencia; para posteriormente, evaluar in vitro el efecto de compuestos derivados de hidroquinonas, sobre la activación de la vía de las caspasas en células expuestas ante estrés oxidativo. Conjuntamente, se pretende valorar las alteraciones ocasionadas sobre la integridad celular plaquetaria, por parte de los compuestos en estudio. Los resultados muestran disminución en la activación de la vía pro-apoptótica mediada por caspasas, sin embargo, a altas concentraciones se reporta la liberación de cantidades importantes de lactato deshidrogenasa (LDH) por parte de algunas de las sustancias evaluadas. La actividad antioxidante de compuestos de similares características ha sido descrita previamente, lo que refuerza los resultados obtenidos, pero las alteraciones ocasionadas a la integridad celular, han sido escasamente reportadas. En base a lo visto en esta memoria, se propone evaluar en futuros estudios el mecanismo de acción y las interacciones moleculares, presentadas por los compuestos que entregaron resultados satisfactorios durante esta investigación

Estudio de la actividad antiplaquetaria de MitoQ vía Western Blot

59 p.Las enfermedades cardiovasculares como la aterosclerosis y sus complicaciones trombóticas son causa de un significativo número de muertes cada año. Las plaquetas tienen una importante participación en los eventos cardiovasculares, ya que, al activarse, se adhieren y agregan en el lugar donde existe la lesión del endotelio, provocando de esta forma que se produzcan trombos que van a impedir el correcto flujo sanguíneo. De aquí radica que sea importante y necesario analizar de mejor forma los mecanismos involucrados en los eventos trombóticos, estudiando la función plaquetaria. En dicho proceso, el aumento en los niveles de estrés oxidativo puede conducir a alteraciones en la funcionalidad y regulación plaquetaria. Dentro de los elementos que aumentan los niveles de estrés oxidativo, está la disfunción mitocondrial. En esta memoria se evaluó la actividad anti plaquetaria de MitoQ (compuesto protector mitocondrial) vía inhibición de la expresión de proteína quinasa C. El estudio se realizó mediante la técnica de Western Blot. MitoQ en concentración dependiente fue capaz de inhibir la expresión fosforilada de la proteína quinasa C, proceso clave en la activación plaquetaria y el desarrollo de trombosis. Por ende, es importante considerar a MitoQ como una nueva dirección en lo que respecta al estudio y desarrollo de fármacos antiplaquetario