Oncology research and clinical decisions based on immunohistochemistry: the importance of the technical aspects that support a complex method

Immunohistochemistry (IHC) is the group of techniques that use antibodies as specific reagents to identify and demonstrate several cell and tissue components that are antigens. This linking allows locating and identifying the in situ presence of various substances by means of color that is associated with the formed antigen-antibody complexes. The practical value of this biotechnology area, widely used in Pathology and Oncology, in diagnostic, prognostic, theranostic and research context, results from the possibility of combining a colour marker with an antibody without causing any damage to specific binding established between antibody and antigen. This provides the microscopic observation of the target locations where the antibody and hence the antigen are present. IHC is presented as a powerful means for identification of several cellular and tissue structures that can be associated with pathologies, and of the consequences, at functional and morphological level, of these same elements action

eLearning in the context of a one-year postgraduate course in macroscopy in pathology: benefits of a multifaceted and pluripotent concept

Performing Macroscopy in Pathology implies to plan and implement methods of selection, description and collection of biological material from human organs and tissues, actively contributing to the clinical pathology analysis by preparing macroscopic report and the collection and identification of fragments, according to the standardized protocols and recognizing the criteria internationally established for determining the prognosis. The Macroscopy in Pathology course is a full year program with theoretical and pratical components taught by Pathologists. It is divided by organ/system surgical pathology into weekly modules and includes a practical "hands-on" component in Pathology Departments. The students are 50 biomedical scientists aged from 22 to 50 years old from all across the country that want to acquire competences in macroscopy. A blended learning strategy was used in order to: give students the opportunity to attend from distance; support the contents, lessons and the interaction with colleagues and teachers; facilitate the formative/summative assessment

Imunocitoquímica: o que há de novo?

A imunocitoquímica é uma técnica de uso generalizado em citopatologia, podendo ser utilizada em amostras de citologia aspirativa e esfoliativa. As amostras citológicas muitas vezes são as únicas disponíveis e a ICQ pode ser utilizada para confirmar o diagnóstico e sugerir o prognóstico

Transforming education through transformational leadership: (in)fluence in change and innovation

Ao longo da História vimos descobrindo que existem diversas formas de liderar, tendo surgido variados modelos explicativos de liderança. Este tema assume particular relevância pois o poder das equipas educacionais baseia-se na liderança, uma vez que esta pode influenciá-las positivamente. O modelo de liderança transformacional, debatido desde 1985 por Bass e outros investigadores, inclui três elementos: transacional, passivo e transformacional. O líder transacional usa recompensas/punições para obter resultados, sendo motivador extrínseco que propõe um envolvimento emocional mínimo da equipa. É orientado para a ação, podendo trabalhar e negociar para atingir os objetivos da organização. Sendo conservador e passivo tende a pensar “dentro da caixa” na resolução de problemas. O líder que atua no formato Passivo/Fuga dá liberdade total na realização dos trabalhos e definição de prazos, fazendo breves comentários sobre as atividades e participando pouco nos debates. Na liderança transformacional criam-se expetativas positivas na equipa educacional, inspirando-se o desenvolvimento pessoal e capacitando-se os professores para exceder os níveis normais de desempenho. Este tipo de liderança pode trabalhar com tarefas complexas, habilitando a equipa numa vertente mais humanista e centrada nas pessoas. A realidade educacional de cada líder abarcará possivelmente vários estilos, sendo moldada por contexto/equipa, o que implica uma adaptação constante baseada em formação robusta e na aplicação de eficientes estratégias de liderança. Desta forma, a instituição universitária estará mais bem apetrechada para encarar com empatia e proatividade a mudança e inovação educacional que enfrenta constantemente.ABSTRACT - Throughout history, we have discovered that there are several ways to lead, and there have been various explanatory models of leadership forms. This issue is relevant because educational teams power is based on leadership since it can influence them positively. The transformational leadership model, debated since 1985 by Bass and other researchers, includes three elements: transactional, passive, and transformational. The transactional leader uses rewards/punishments for results, being an extrinsic motivator that proposes minimal emotional team involvement. It is action-oriented, able to work and negotiate to achieve the organization’s goals. Being conservative and passive tends to think “inside the box” in problem-solving situations. The passive leader gives full freedom in work performing and deadlines set, making brief comments on the activities and barely participating in the debates. In transformational leadership positive expectations are created in the educational team, inspiring personal development and empowering teachers to exceed normal levels of achievement. This type of leadership can work with complex tasks, empowering the team in a more humanistic and people-centered way. The educational involvement of each leader will possibly span multiple styles, being shaped by context/team, which implies a constant adaptation based on robust formation and the application of effective leadership strategies. In this way, the university institution will be better equipped to face with empathy and proactivity the change and educational innovation that it constantly faces.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Imunohistoquímica

Desde o seu surgimento que as técnicas que utilizam a reação anticorpo-antigénio para a deteção e caracterização de moléculas no seu local de origem têm sido denominadas de Imunohistoquímica e/ou Imunocitoquímica. Ao longo do tempo esta terminologia tem sido utilizada de forma frequente para identificar as mesmas metodologias de forma, por vezes, indiscriminada. Numa tentativa de evitar as incorreções e diminuir as associações erróneas de palavras-chave em livros e artigos, que podem provocar uma pulverização ou a omissão da bibliografia relevante existente, alguns autores têm tentado clarificar a nomenclatura utilizada, principalmente com base na natureza da amostra biológica que é analisada. O termo Imunohistoquímica é associado a metodologias que usam imuno-ensaios para co-localizar um epítopo de interesse em cortes de tecido. Também se englobam os métodos que recorrem a blocos de células ou de coágulos preparados a partir de materiais citológicos e hematológicos. Na maioria dos casos, o tecido é removido do ser vivo e conservado/fixado por congelação ou por métodos químicos (e.g. formaldeído) e embebido em parafina. Posteriormente são obtidas secções muito finas, de cerca de 4μm, a partir do material congelado ou incluído em parafina e colocadas em lâminas de vidro. Desta forma, é possível co-localizar os antigénios nos componentes histológicos e celulares, mantendo a arquitetura original do tecido circundante. Dependendo do método de fixação, as amostras de tecidos e/ou células podem ser sujeitas a estratégias de recuperação antigénica

Amplificação em imunohistoquímica: estudo comparativo de sistemas de polímeros

Desde o início da utilização da imunohistoquímica em anatomia patológica, um dos objetivos tem sido detetar as quantidades mais ínfimas de antigénio, tornando-o visível ao microscópio ótico. Vários sistemas de amplificação têm sido aplicados de forma a concretizar este objetivo, tendo surgido um grupo genérico de métodos simples e que apresentam uma amplificação superior: são os denominados métodos do polímero indireto. Tendo em conta a variedade de métodos disponíveis, o autor propõe-se a comparar a qualidade de quatro sistemas de amplificação, que recorrem ao método do polímero indireto com horseradish peroxidase (HRP). Foram utilizadas lâminas de diferentes tecidos, fixados em formol e incluídos em parafina, nos quais se procedeu à identificação de 15 antigénios distintos. Na amplificação recorreu-se a quatro sistemas de polímero indireto (Dako EnVision+ System – K4006; LabVision UltraVision LP Detection System – TL-004-HD; Leica NovoLink – RE7140-k; Vector ImmPRESS Reagent Kit – MP-7402). A observação microscópica e classificação da imunomarcação obtida foram feitas com base num algoritmo que enquadra intensidade, marcação específica, marcação inespecífica e contraste, num score global que pode tomar valores entre 0 e 25. No tratamento dos dados, para além da estatística descritiva, foi utilizado o teste one-way ANOVA com posthoc de tukey (alfa=0.05). O melhor resultado obtido, em termos de par média/desvio-padrão, dos scores globais foi o do NovoLink (22,4/2,37) e o pior foi o do EnVision+ (17,43/3,86). Verificou-se ainda que existe diferença estatística entre os resultados obtidos pelo sistema NovoLink e os sistemas UltraVision (p=.004), ImmPRESS (p=.000) e EnVision+ (p=.000). Concluiu-se que o sistema que permitiu a obtenção de melhores resultados, neste estudo, foi o Leica NovoLink.ABSTRACT - Since the beginning of the use of immunohistochemistry in pathology, one of the aims has been to detect the smallest amounts of antigen, making it visible to the optical microscope. Several amplification systems have been applied in order to achieve this goal and a generic group of simple methods with higher amplification came up, known as indirect polymer methods. Given the diversity of available methods, the author proposes to compare the quality of four amplification systems, which use the indirect polymer method with horseradish peroxidase (HRP). Several slides were used with different formalin fixed, paraffin embedded tissues, allowing the identification of 15 different antigens. Four indirect polymer systems were used for amplification (Dako EnVision+ System - K4006; LabVision UltraVision LP Detection System - TL-004-HD; Leica NovoLink - RE7140-k; Vector ImmPRESS Reagent Kit - MP-7402). The microscopic observation and classification was based on an algorithm that fits intensity, specific staining, nonspecific staining and contrast, on an overall score which can take values between 0 and 25. For the statistical analysis it was used mainly the one-way ANOVA with post-hoc Tukey test (alpha = 0.05). The best result in terms of mean/standard deviation of the scores was the NovoLink (22.4/2.37) and the worst was the EnVision+ (17.43/3.86). It was also found that there is statistical difference between the results obtained by the system NovoLink and the systems UltraVision (p=.004), ImmPRESS (p=.000) and EnVision+ (p=.000). It was concluded that the system allowing the best results in this study was the Leica NovoLink

Amostras secas ao ar para coloração de Papanicolaou: comparação de três métodos de reidratação

O processamento de líquidos das cavidades serosas por citocentrifugação e a coloração de Papanicolaou são utilizados rotineiramente em citopatologia. A realização desta coloração em amostras secas ao ar pode constituir uma mais-valia quando o local de colheita é distante do laboratório e o processo de fixação não é totalmente padronizado/controlado. Assim, decidiu-se estudar protocolos que implicam a secagem ao ar e posterior reidratação, para realização de coloração de Papanicolaou

Immunohistochemistry in formalin-gel fixed tissues

There are several hazards in histopathology laboratories and its staff must ensure that their professional activity is set to the highest standards while complying with the best safety procedures. Formalin is one of the chemical hazards to which such professionals are routinely exposed. To decrease this contact, it is suggested that 10% neutral buffered liquid formalin (FL) is replaced by 10% formalin-gel (FG), given the later reduces the likelihood of spills and splashes, and decreased fume levels are released during its handling, proving itself less harmful. However, it is mandatory to assess the effectiveness of FG as a fixative and ensure that the subsequent complementary techniques, such as immunohistochemistry (IHC), are not compromised. Two groups of 30 samples from human placenta have been fixed with FG and FL fixatives during different periods of time (12, 24, and 48 hours) and, thereafter, processed, embedded, and sectioned. IHC for six different antibodies was performed and the results were scored (0–100) using an algorithm that took into account immunostaining intensity, percentage of staining structures, non-specific immunostaining, contrast, and morphological preservation. Parametric and non-parametric statistical tests were used (alpha = 0•05). All results were similar for both fixatives, with global score means of 95•36±6•65 for FL and 96•06±5•80 for FG, and without any statistical difference (P>0•05). The duration of the fixation had no statistical relevance also (P>0•05). So it is proved here FG could be an effective alternative to FL

Imunocitoquímica de secreções brônquicas processadas em ThinPrep™: comparação de três métodos de pós-fixação

A imunocitoquímica possui diversas aplicações em citopatologia, nomeadamente no diagnóstico diferencial e identificação de neoplasias. No entanto apresenta, por vezes, uma reduzida precisão e reprodutibilidade, principalmente ao nível dos falsos-negativos e da uniformidade da marcação. Sabendo que a preservação estrutural e a qualidade da imunomarcação são fulcrais em citopatologia, definiu-se como objetivo deste trabalho avaliar o impacto da etapa de pós-fixação das lâminas de secreções brônquicas processadas em ThinPrep na técnica de imunocitoquímica, no sentido de selecionar a melhor metodologia para aplicação prática

Immunohistochemistry in the diagnosis of membranous glomerulonephritis: a comparative study of chromogen + counterstaining combination

A glomerulonefrite membranosa faz parte das doenças glomerulares que provocam glomerulonefrite crônica, apresentando-se como uma das causas da doença renal terminal. As técnicas de imunofluorescência são o gold standard no estudo imunológico desta patologia em biópsia renal, através da deteção de imunocomplexos (e.g. IgG e C3) e do seu padrão de distribuição granular característico. No entanto, a imunofluorescência não permite uma contextualização histológica e os fluorocromos utilizados possuem um reduzido tempo de atividade, ao contrário das técnicas imunoenzimáticas que utilizam cromogénios coloridos precipitados que permitem a obtenção de uma marcação permanente e a sua contextualização histológica por via da utilização de eficientes colorações de contraste. Com a finalidade de contribuir para a qualidade do diagnóstico da glomerulonefrite membranosa, em biópsias renais, procurou-se, com esta pesquisa, identificar uma técnica imunoenzimática, através da conjugação entre diferentes cromogênios e colorações de contraste, que permita a deteção de depósitos de IgG e C3, com padrão granular. Foram constituídos diferentes binômios cromogênio + coloração, com os cromogênios 3,3›- Diaminobenzidine Tetrahydrochloride e 3-Amino-9-ethylcarbazole e as colorações Periodic Acid Schiff, Periodic Acid Methenamine Silver e Hematoxilina. Foram utilizadas 72 secções de tecido provenientes de seis de casos de biópsias renais com diagnóstico de glomerulonefrite membranosa, fixados em formalina a 10% e incluídos em parafina. A recolha de dados foi realizada por observação microscópica com preenchimento de uma grelha de classificação dos parâmetros: preservação da morfologia, intensidade da marcação específica, quantidade relativa de estruturas marcadas, marcação inespecífica/fundo, contraste e padrão da marcação, que permitiu a classificação dos binómios estudados num score quantitativo de 0-100 pontos. O binômio que apresentou melhores resultados foi 3-Amino-9-ethylcarbazole + Hematoxilina (score 71,81) e o binômio 3,3›- Diaminobenzidine Tetrahydrochloride+Periodic Acid Methenamine Silver (score 7,81), apresentou os piores resultados. O resultado do teste Kruskal-Wallis indica-nos a presença de diferenças estatísticas entre os binómios em estudo (p=0,000). A Hematoxilina pode ser considerada a coloração mais eficaz, pois cumpriu a sua função de auxiliar e facilitar a observação do tipo de padrão com os dois cromogênios utilizados. O cromogênio 3-Amino-9-ethylcarbazole apresentou resultados semelhantes aos produzidos pelo 3,3›-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride, no entanto, permitiu identificar em todos os casos o padrão granular de imunomarcação, ao contrário do que aconteceu com este último.ABSTRACT - Membranous glomerulonephritis is one of the glomerular diseases that induce chronic glomerulonephritis and one of the causes of terminal renal disease. Immunofluorescence techniques are the gold standard in the immunologic study of this disease in renal biopsy by the detection of the immunocomplexs and their granular specific pattern. However, immunofluorescence does not allow a histological contextualization and the fluorochromes that are used have a reduced timeline, contrary to immunoenzimatic techniques that use colorful chromogens which permit to obtain a permanent stain and a histological contextualization, with the help of efficient counterstaining. In order to contribute to the quality of diagnosis of membranous glomeurlonephritis in renal biopsies, we tried with this research to identify a combination of different chromogens and counterstainings that allows the detection of IgG and C3 deposits with granular pattern. So we establish different chromogen + counterstaing combination, with 3,3’- Diaminobenzidine Tetrahydrochloride and 3-Amino-9-ethylcarbazole as chromogens and Periodic Acid Schiff, Periodic Acid Methenamine Silver and Hematoxilin as counterstainings. We used 72 sections of 6 renal biopsies with membranous glomerulonephritis, formalin-fixed and paraffin-embedded. Data collection was performed by completing an assessment grid with parameters: preservation of morphology, intensity of specific staining, relative amount of labeled structures, nonspecific staining / background contrast and pattern of staining, which allowed the assignment of a 0-100 points quantitative score. 3-Amino-9-ethylcarbazole+Hematoxilin was the combination that accomplish the higher score (71.81) and 3,3’- Diaminobenzidine Tetrahydrochloride+ Periodic Acid Methenamine Silver the worst (7.81). Kruskal-Wallis test show us that exist statistical difference between the combinations in study (p=0.000). Hematoxilin was the most versatile counterstaining, because it help and facilitate the observation of the pattern produced by the two chromogen used. The chromogen 3-Amino-9-ethylcarbazole presented similar results to 3,3’-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride, but, with the first one, all cases were evaluated as granular pattern unlike what happen with the last one