Isolement et caracterisation physiologique et biochimique de lignees cellulaires de Daucus carota L. a potentialites embryogenes differentes

SIGLEINIST TD 20172 / INIST-CNRS - Institut de l'Information Scientifique et TechniqueFRFranc

Etude de la régulation et du rôle physiologique du gène Ub-LTP1 (Ugni blanc Lipid Transfer Protein 1) (analyse fonctionnelle du promoteur et mise en évidence de facteurs inducteurs)

POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF

Caractérisation des réactions de défense de la vigne et identification d'éliciteurs (l'endopolygalacturonase 1 de Botrytis cinerea, une fonction d'avirulence pour un facteur de virulence)

DIJON-BU Sciences Economie (212312102) / SudocSudocFranceF

Purification, identification et analyse fonctionnelle de protéines de transfert de lipides (LTP) secrétées par des cellules embryogènes de Vigne (Vitis vinifera) de la lignée 41B

Les LTP non spécifiques des végétaux sont capables in vitro de transférer des lipides entre deux membranes. Elles seraient impliquées dans des processus physiologiques tels que l'embryogenèse ou la réponse aux stress. Cinq LTP ont été purifiées à partir du milieu de culture de cellules de Vigne. Les masses moléculaires, les séquences peptidiques des 5 VvLTP et les ADNc correspondant à VvLTP3 et 4 ont été obtenus. Le maximum de production de VvLTP par les cellules 41 B peut être corrélé avec le passage des embryons du stade globulaire au stade cœur. Une surproduction de l'ensemble des VvLTP étudiées est observée dans les cellules 41B surexprimant VvLTP1. Les embryons issus de ces cellules ne présentent pas de cotylédons et un épiderme désorganisé : les LTP auraient donc une fonction in vivo durant l'embryogenèse. La capacité de VvLTP à fixer l'acide jasmonique a été mise en évidence et le complexe, infiltré dans des plantules de Vigne induit une protection vis-à-vis de Botrytis cinerea.Non-specific lipid transfer proteins are characterized by their ability to transfer lipids between membranes, in vitro. They are believed to be involved in physiological processes such as embryogenesis or plant defense responses to stresses but their in vivo function is still controversial. Five LTP isoforms produced by 41B embryogenic cells have been purified. Amino-acid sequences and two cDNA corresponding to VvLTP3 and 4 were obtained. The maximum of production of VvLTP can be correlated with the embryo transition from globular to heart stage. Overexpression of VvLTP1 in 41B cells leads to an overproduction of all VvLTP. Somatic embryos induced from thess transgenic cells have no cotyledons and display an unorganised epidermic layer : VvLTP could play an in vivo function during embryogenesis. Another part of this work study the interaction of VvLTP with jasmonic acid. Infiltration of VvLTP4/JA complex in grapevine leaves induces protection of plantlets against Botrytis cinerea.POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF

Régulation et rôle physiologique du gène VvHT1 (Vitis vinifera hexose transporter 1) exprimé durant la maturation de la baie de raisin

La qualité des vins dépend du rapport acides/glucides des baies de raisin à la vendange. Les glucides s'accumulent fortement dans la baie sous forme d'hexoses à partir du stade de la maturation appelé véraison. Un clone codant un transporteur potentiel d'hexoses (VvHT1: Vitis vinifera Hexose Transporter 1) a été obtenu au laboratoire. Son expression augmente à la véraison. Le travail présent concerne la régulation de l'expression de VvHT1, (en utilisant le géne rapporteur GUS) et son rôle physiologique dans la plante. Ces résultats donnent le premier exemple d'un transporteur d'hexose induit par des glucides non transports, ce qui implique une signalisation glucidique extracellulaire. Le rôle physiologique de VvHT1 a été étudié par la stratégie "sens/anti-sens" grâce à des plants de Tabac transformés. Certaines des plantes transformées présentent un phénotype particulier et sont affectées au niveau du rapport source/puits, de l'absorption des glucides et du métabolisme glucidique.Wine quality strongly depends on the ratio acid/sugar of the grape berries at harvest. Grapevine berries (Vitis vinifera) mainly store hexoses. This accumulation which starts suddenly at the ripening stage named vraison, involves hexoses transporters. A complete clone (VvHT1: Vitis vinifera hexose transporter 1) was previously isolated in the laboratory. Its expression increases around vraison, suggesting that VvHT1 could be involved in hexose accumulation during berry ripening. The work presented here deals with the regulation of VvHT1promoter, using the GUS reporter gene, and with its physiological role, using a sense/antisense strategy in tobacco plants. The data provide the first example of a putative hexose transporter induced by sugars in higher plants and demonstrate an original sugar sensing phenomenon. Some of the plants transformed with VvHT1 cDNA show a marked phenotype and are clearly affected in source/sink partitioning, glucose uptake and sugar metabolism in leaves.POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF

Etude physiologique, biochimique, moléculaire et agronomique du stress salin chez le melon (Cucumis melo L.)

Chaque année sur son site de Malaga (Espagne), certaines parcelles de la société Rouge-Gorge, qui produit des melons, subissent une perte de rendement de 5 tonnes/ha. Des analyses indiquent que ces parcelles ont une teneur élevée en ion Na+ dans le sol et dans l eau d irrigation. Les problèmes de stress salin sont très étudiés sur de nombreuses espèces d intérêt agronomique, mais aucune étude n a encore été menée sur le melon. Un long travail préliminaire a permis de mettre en place les différents outils indispensables pour la suite (notamment la mise au point du système de culture reproduisant ce stress). Les résultats obtenus montrent que lors d un stress salin, chez cette variété de melon, il y a activation des systèmes de production des AOS (NADPH oxydases), mais pas des mécanismes de détoxication (peroxydases). Il y a aussi activation de la galactinol synthase et accumulation de sucres (stachyose en particulier) dans les feuilles. Un traitement à l acide ascorbique permet de restaurer, en grande partie, le rendement. Ce traitement influe négativement sur l état d activation des NADPH oxydases, positivement sur les peroxydases et négativement sur le niveau d expression de la galactinol synthase. L accumulation des sucres dans les feuilles est aussi diminuée. La présence d éléments de réponse (NFkb et AP-1 like) au potentiel redox sur le promoteur de la galactinol synthase permet de lier le stress salin (qui favorise la production d AOS) à la perte de rendement (due à l accumulation de sucre dans les feuilles). La vitamine C en limitant la production d AOS permet aussi d atténuer l effet du stress salin sur la plante.The company which funded this work cultivates melon in 3 different places: in the Center West and South East in France, as well as in South of Spain. In this third location, the proximity of the sea, and the irrigation technique make the water salty (approximatively 30 mM NaCl in water and soil extract). This NaCl concentration decreases the growth of melon plants and the yield from 13 tons/ha to 8 tons/ha. The present work begun with the preparation of the tools needed for further experiments, especially the culture systems. A publication of Shalata and Neumann (Shalata and Neumann, 2001) shows that an exogenous application of ascorbic acid could increase salt tolerance in tomato. Exogenous application of ascorbic acid during hydroponic culture of melon improved salt tolerance in melon, and allowed a partial recovery of yield (near 20% more than in salt stress plant without ascorbic acid). Biochemical evidences shows that NADPH oxidases , but not peroxidases, are activated during salt stress. Addition of ascorbic acid (0,5 mM) in the medium prevented the activation of NADPH oxidases and increased the activity of peroxidases. RNA blot experiments revealed activation of galactinol synthase gene, which encodes a key enzyme of stachyose synthesis. Stachyose is the major transported sugar in melon. The activation of this gene probably creates a metabolic deviation and contributes to the loss of yield. The promoter of galactinol synthase contains a NFkB response box, which senses redox status of the cell. The relationship between ascorbic acid and galactinol synthase is not fully understood, but it is still under investigation in the lab. Field experiments confirmed that AA increases salt tolerance.POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF