1 research outputs found
Nanotecnolog铆a : diagn贸stico para la brucelosis porcina
Porcine brucellosis is an important zoonosis to public health and to agricultural economy since it causes significant losses in production, and the establishment of sanitary restrictions on local and international trade. Therefore, it is important to have a rapid and reliable diagnosis. To date, confirmatory diagnosis of brucellosis mainly relies on the isolation of the bacterium, but it is difficult to implement. Currently, most of the diagnostic tests are based on serological assays useful for diagnosing herds; however there is still not an accurate diagnosis to test individual animals. Thus, in the present work we developed and evaluated a novel indirect immunoassay (iELISA) using a recombinant glycoprotein antigen formed by the LPS O: 9-O polysaccharide of Yersinia enterocolitica (identical to the O polysaccharide of B. suis) covalently coupled to the carrier protein AcrA, derived from Campylobacter jejuni. This antigen was previously characterized and validated for the diagnosis of brucellosis in humans and cattle. From the above mentioned antigen we have developed and validated the glyco-iELISA using a panel of positive and negative sera previously characterized by agglutination buffered plate antigen techniques (BPA), and by fluorescent polarization assay (FPA). The results indicate that the glyco-iELISA differentiates positive animals from clearly negative ones. A cut-off value of 0.56 resulted in a diagnostic test sensitivity and specificity of 100 %, respectively. In addition, as a proof of concept we set to develop, with a small panel of sera, an indirect fluorescence immunoassay with OAg-AcrA coupled to magnetic beads. Due to the advantage of using magnetic racks instead of centrifugation, reduced incubation time and more efficient washes, this platform has shown to be a valuable practical diagnostic tool. Both developed assays discriminate positive from negative animals, even in infected herds specifically identifying the infected animal and differentiating it from negative animals exposed.\nFil: Balzano Parodi, Rodrigo E. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaLa brucelosis porcina es una zoonosis de importancia para la salud p煤blica y la econom铆a agropecuaria, ya que provoca importantes p茅rdidas en la producci贸n y restricciones sanitarias en el comercio interno y en las exportaciones. Por ello, es importante tener un diagn贸stico r谩pido y confiable. Hasta la fecha, la prueba confirmatoria de brucelosis es el aislamiento de la bacteria, lo cual es dif铆cil de implementar. Los test diagn贸sticos vigentes se basan en pruebas serol贸gicas que son 煤tiles para el diagn贸stico de piaras pero no permiten obtener un diagn贸stico fiable de los animales a nivel individual. Por esta raz贸n, en este trabajo se desarroll贸 y evalu贸 un nuevo test diagn贸stico. El mismo consiste en un inmunoensayo (iELISA) utilizando como ant铆geno una glicoprote铆na recombinante, la cual est谩 formada por el polisac谩rido O del LPS de Yersinia enterocolitica O:9 (id茅ntico al polisac谩rido O de B. suis) unido covalentemente a la prote铆na transportadora AcrA derivada de Campylobacter jejuni. Este ant铆geno fue previamente caracterizado y validado para el diagn贸stico de brucelosis en humanos y bovinos. A partir del mismo, se desarroll贸 y valid贸 el glico-iELISA utilizando un panel de sueros positivos y negativos previamente caracterizados por las t茅cnicas de aglutinaci贸n con ant铆geno bufferado en placa (BPA) y Ensayo de Polarizaci贸n Fluorescente (FPA). Los resultados indican que el glico-iELISA permite discriminar claramente animales positivos de negativos, con un valor de cut-off de 0,56, resultando en una sensibilidad y especificidad diagn贸stica de 100%. Adem谩s, se desarroll贸 como prueba de concepto, un inmunoensayo de fluorescencia basado en la uni贸n covalente del mencionado ant铆geno a micropart铆culas magn茅ticas con un panel reducido de sueros. Esta plataforma presenta las ventajas de reducir los tiempos de incubaci贸n y los lavados son m谩s eficientes utilizando racks magn茅ticos sin necesidad de centrifugar, entre otras. Ambos ensayos desarrollados permitieron discriminar animales positivos de negativos, incluso en piaras infectadas identificando puntualmente al animal infectado y diferenci谩ndolo de los animales negativos expuestos