Résistance aux tétracyclines liée à la cible chez deux mycoplasmes humains (mycoplasma hominis et mycoplasma pneumoniae)

Chez les mycoplasmes humains, la résistance clinique acquise aux tétracyclines concerne uniquement les espèces du tractus urogénital, Ureaplasma spp. et Mycoplasma hominis. Cette résistance est associée à la présence du gène tet (M). Nous avons étudié l'autre mécanisme de résistance aux tétraclyclines, liée à la cible, les mutations de l' ARNr 16S chez M.hominis et M. pneumoniae. Les souches de mycoplasmes résistantes aux tétracyclines ont été obtenues par sélection en milieu liquide et en milieu solide en présence de concentrations subinhibitrices ou inhibitrices croissantes de doxycycline. Les gènes ARNr16S de ces souches ont été amplifiés et séquencés, puis comparés aux séquences des souches de référence M.hominis PG21 et M. pneumoniae FH. Pour M. hominis, 4 substitutions ont été identifiées dans le site primaire de fixation des tétracyclines au niveau des hélices H31 et H34 sur l'opéron rrnB. Les substituons A965T, G966T, et A967T (numérotation Escherichia coli)au niveau de l'hélice H31 et la substitution C1054T au niveau de l'hélice H31 et la substitution C1054T au niveau de l'hélice H34 sont associées à une augmentation significative des CMI des tétracyclines. Pour M. pneumoniae, les mutations de l'ARNr 16S de l'unique opéron concernent les nucléotides T968 et G1193 au niveau des hélices H31 et H34 respectivement. En résumé, nous avons décrit pour la première fois des souches de mycoplasmes humains résistantes aux tétracyclines par mutations de l'ARNr 16S au niveau du site de fixation des tétracyclines.BORDEAUX2-BU Santé (330632101) / SudocSudocFranceF

Rôle immunomodulateur de Mycoplasma hominis sur les cellules dendritiques humaines

INTRODUCTION. Mycoplasma hominis peut être présent à l'état commensal mais aussi entraîner des infections génitales ou plus rarement extragénitales, et notamment articulaires. Le mécanisme par lequel M. hominis interagit avec le système immunitaire inné humain reste mal connu. L'objectif de cette étude était de préciser l'effet immunomodulateur de M. hominis pour déterminer l'orientation de la réponse immunitaire induite et la fraction bioactive de la bactérie en étudiant la souche de référence PG21 et plusieurs souches cliniques isolées de différentes pathologies. MATERIELS ET METHODES. Génération de cellules dendritiques à partir de monocytes humains, incubation avec M. hominis entier ou ses différentes fractions et identification des cytokines produites par ELISA. Identification du Toll-like récepteur (TLR) mis en jeu à l'aide d'anticorps anti-TLR. Extraction des différentes fractions de M. hominis par centrifugations différentielles et Triton X-114. Co-incubation des cellules dendritiques activées avec des lymphocytes T allogéniques. RESULTATS. M. hominis PG21 induit la production d'IL-23 par les cellules dendritiques humaines via TLR2. La fraction bioactive correspond aux lipoprotéines de membrane. La production de cytokines et le profil lipoprotéique varient suivant les souches cliniques. L'orientation de la réponse adaptative vers Th17 est en cours d'exploration. CONCLUSION. Crs données indiquent que l'IL-23 joue un rôle important dans la défense contre M. hominis. Ces résultats apportent un argument supplémentaire à l'étiologie infectieuse des poussées de maladies inflammatoires.BACKGROUND. The interactions of mycoplasmas with the human immune system have been studied for several species. However, little is known about the innate immune response to infections by Mycoplasma hominis. This human species is involved by gynæcological and neonate infections, but also in extragenital infections, like arthritis, more frequently in immunocompromised patients. The aim of this study was to identify te cytokine secretion profile of monocytes and dendritic cells (DCs) induced by M. hominis, the bioactive fraction of M. hominis and the pattern recognition receptor which interacts with it. Furthermore we would like to precise the T cell response skewing induced by the reference strain M. hominis PG21 and by the clinical strains isolated from different clinical pictures. METHODS. Microbiological methods culture of genital and extragenital mycoplasmal strains, cell fractionation of M. hominis (cytosol, membranes, and lipoproteins), and infection of human cells with the different mycoplasmal fractions. Immunological methods : Ficoll extraction of blood peripheral monocuclear cells, DC generation from monocytes isolated by magnetic separation, flow cytometry to phenotype the dendriic cells before and after mycoplasmal infection, ELISA measurement of cytokine production by infected cells, analysis of cytokine mRNA by RT-PCR, Toll-like receptor pathway identification by using anti-TLR antibodies, co-culture of T lymphocytes and M. hominis-infected CDs. RESULTS. The bioactive fraction of M. hominis was contained by membrane lipoproteins. It activated the human CDs and efficiently induced the exclusive produciohn of IL-23. This activation was the result of the TLR2 pathway signalling. The DCs activated by M. hominis were capable of involving a Th17 response from human T-lymphocytes. M. hominis sttrains isolated from different clinical situations induced different patterns of DCs activation and presented different lipoproteic profiles. CONCLUSION. These data indicate that IL-23 may participate in the protection against M. hominis. It might be a new argument in favour of the infectious hypothesis of inflammatory diseases.BORDEAUX2-BU Santé (330632101) / SudocSudocFranceF

Cloning, stability and modification of <em>Mycoplasma hominis</em> genome in yeast

International audienc

Changing Pattern of Chlamydia trachomatis Strains in Lymphogranuloma Venereum Outbreak, France, 2010-2015

We describe a change in the molecular epidemiology of Chlamydia trachomatis strains involved in an outbreak of rectal lymphogranuloma venereum in France during January 2010 April 2015. Until 2012, the C. trachomatis L2b strain predominated; however, starting in 2013, most cases involved the L2 strain. We also identified 4 genetic L2b ompA variants

Multilocus Variable-Number Tandem-Repeat Analysis-Confirmed Emergence of a Macrolide Resistance-Associated Mutation in Mycoplasma pneumoniae during Macrolide Therapy for Interstitial Pneumonia in an Immunocompromised Child

International audienceA child with Job's syndrome was treated for pneumonia due to Mycoplasma pneumoniae. A mixed population of wild-type bacteria and an A2059G mutant was detected during josamycin treatment failure. The same multilocus variable-number tandem-repeat analysis (MLVA) type (MLVA type I) was isolated before and after treatment failure. The child recovered after ciprofloxacin treatment

related to travel in south-eastern Asia, France, June 2019.

International audienceWe report two cases of multidrug-resistant Neisseria gonorrhoeae urogenital infection with ceftriaxone resistance in a heterosexual couple in south-western France who were successfully treated with a single, high dose of intramuscular ceftriaxone (1 g). Whole genome sequencing of isolate F91 identified MLST13871, NG-MAST1086, NG-STAR233. Patient history revealed the isolate F91 was most likely acquired during a trip to Cambodia and belongs to the successful multidrug-resistant FC428 Asian clone

Cloning, stability and modification of Mycoplasma hominis genome in yeast.

Mycoplasma hominis is a minimal human pathogen that is responsible for genital and neonatal infections. Despite many attempts, there is no efficient genetic tool to manipulate this bacterium, limiting most investigations of its pathogenicity and its uncommon energy metabolism that relies on arginine. The recent cloning and subsequent engineering of other mycoplasma genomes in yeast opens new possibilities for studies of the genomes of genetically intractable organisms. Here, we report the successful one-step cloning of the M. hominis PG21 genome in yeast using the transformation-associated recombination (TAR) cloning method. At low passages, the M. hominis genome cloned into yeast displayed a conserved size. However, after ~60 generations in selective media, this stability was affected, and large degradation events were detected, raising questions regarding the stability of large heterologous DNA molecules cloned in yeast and the need to minimize host propagation. Taking these results into account, we selected early passage yeast clones and successfully modified the M. hominis PG21 genome using the CRISPR/Cas9 editing tool, available in Saccharomyces cerevisiae. Complete M. hominis PG21 genomes lacking the adhesion-related vaa gene were efficiently obtained