Estudo da actividade anti-tumoral de complexos organometálicos

Tese de mestrado, Bioquímica, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2009Estudos anteriores demonstraram que os complexos organometálicos de molibdénio (II) possuem boas actividades anti-tumorais. Assim, sintetizaram-se novos complexos, de forma a expandir a gama de compostos com estas características, e realizar experiências mais esclarecedoras. A maioria dos complexos estudados apresentou actividades anti-tumorais interessantes. Foram feitos testes de inibição de crescimento para 8 compostos (A, B, C, D, E, F, G e H) em três linhas celulares: HeLa (linha celular derivada do cancro cervical humano), MCF-7 (linha celular derivada do cancro mamário humano) e N1E-115 (neuroblastoma derivado de rato, células não diferenciadas e diferenciadas). As células foram incubadas com os compostos numa gama de concentrações (1 a 1000 μM) durante 48 horas. O efeito antiproliferativo foi medido pelo ensaio do MTT. Os valores de IC50 obtidos para os diferentes compostos, variaram entre 2,1 e 458,6 μM, apresentando diferenças entre as linhas celulares. Estudou-se igualmente a estabilidade dos compostos durante o tempo de incubação, e concluiu-se que os compostos B e E mantêm a sua estrutura. Para avaliar a possibilidade de intercalação dos compostos com a molécula de DNA, efectuaram-se estudos espectrofotométricos e determinou-se a viscosidade de soluções de DNA com diferentes concentrações de compostos. Os resultados obtidos parecem indicar que os compostos B, G e H são intercaladores. Finalmente, os estudos biológicos, mostraram que existe degradação do DNA das células incubadas com os compostos. Embora a análise morfológica e a citometria de fluxo permitissem identificar células em apoptose, esta não foi detectada por electroforese. Por citometria de fluxo foi também possível detectar o aumento de espécies reactivas de oxigénio nas células incubadas com os compostos em estudo. Os mecanismos de acção dos compostos parecem assim envolver a indução de apoptose e a produção de espécies reactivas de oxigénio, contudo os estudos realizados não permitiram esclarecer a relevância de cada um destes processos.Organometallic complexes of molybdenum (II) have shown antitumor activity in previous studies. In order to expand the range of compounds and to perform more complete experiments, new complexes were synthesized. The majority of organometalic studied complexes have interesting antitumoral properties. Cytotoxicity studies were developed for 8 compounds (A, B, C, D, E, F, G and H), in three cell lines: HeLa (cervical cancer cells), MCF-7 (breast cancer cells) and N1E-115 (mouse neuroblastoma cells, in two different states: nondifferentiated, and differentiated). Cells were incubated with compounds in concentrations ranging from 1 to 1000 μM, during 48 hours. The antiproliferative effect was evaluated using MTT viability assay. The IC50 values ranged from 2, 1 to 458,6 μM, showing some differences between the cell lines. Stability studies were performed and showed that both compounds B and E, kept their structure during the incubation intervals. Spectrofotometric assays and determination of the viscosity of DNA solutions with increasing amounts of compounds were undertaken to evaluate the possibility of interaction between the compounds and the DNA molecule. The results showed that B, G and H compounds may be intercalative agents. Electrophoresis of cellular DNA confirmed the degradation of DNA after the incubation of the cells with the compounds. Morphological analysis of cells, by staining with Hoechst 33342 and flow cytometry, allowed the identification of apoptotic cells. Flow cytometry showed the increase of reactive oxygen species (ROS) in cells incubated with the compounds. The results didn’t allow the elucidation of the relevance of each of these processes, but suggest that the mechanisms of action of the compounds are related to the induction of apoptosis and production of ROS