The Driving Force of Phase Separation between Synaptophysin and Synapsin

학위논문(석사) -- 서울대학교대학원 : 의과대학 의과학과, 2023. 8. 장성호.Our group has recently demonstrated that the proteins synaptophysin (Syph) and synapsin (Syn) can undergo a process called liquid-liquid phase separation (LLPS), resulting in the clustering of small synaptic-like microvesicles within living non-neuronal cells, resembling synaptic vesicle (SV) clusters. Despite the absence of direct physical interactions between Syph and Syn, the mechanism underlying their coacervation, or the formation of droplet-like clusters, has remained elusive. Here, I propose that multivalent electrostatic pi-cation interactions play a primary role in their coacervation. The C-terminal region (Ct) of Syph contains ten repeated sequences, with nine starting with tyrosine (Y-G-P/Q-Q-G), known to facilitate phase separation via pi-pi and pi-cation interactions. Additionally, disorder-promoting amino acids, such as glycine, proline, and glutamine, were abundant in the Syph Ct, suggesting a propensity for phase separation. My findings demonstrate that Syph Ct can undergo LLPS through pi-pi interactions, but only at non-physiological concentrations in vitro. Additionally, it can also undergo phase separation with the help of or additional interactions by combining with light-sensitive CRY2PHR or tagging subunits of a multimeric protein within living cells. Importantly, mutating the tyrosine residues to serine (referred to as 9YS) abolishes the phase-separating property of Syph Ct, underscoring the critical role of tyrosine-mediated pi-interactions in this process. Moreover, my investigations have revealed that the 9YS mutation prevents the coacervation between Syph and Syn. Notably, since Syph 9YS retains same negative charge of Syph in the cytoplasm, my results strongly suggest that pi-cation interactions, rather than simple charge interactions, are responsible for the coacervation of these proteins. By unraveling the underlying mechanism governing the coacervation of Syph and Syn, my study not only provides valuable insights into the molecular processes at play but also raises the intriguing possibility that the regulation of pi-cation interactions between Syph and Syn during synaptic activity may contribute to the dynamic nature of synaptic vesicle clustering.최근 연구에서 신경 세포 외의 생체 내에서 synaptophysin (Syph)과 synapsin (Syn) 단백질이 액체-액체 상 분리 (LLPS)라는 과정을 겪어 시냅스 소포(SV) 클러스터와 유사한 작은 시냅스 모양의 미세 소포들이 군집화 될 수 있다는 것을 최근 입증했었다. 흥미로운 점은 Syph와 Syn 사이에 직접적인 물리적 상호작용이 없음에도 불구하고, 이들의 코아세르베이션 (coacervation) 현상 또는 드롭렛 (droplet)과 같은 군집화 형성 메커니즘은 여전히 알려지지 않았다는 것이다. 이번 연구를 통해 Syph와 Syn 사이의 코아세르베이션이 주로 다가 파이 양이온 정전기적 상호작용 (multivalent electrostatic pi-cation interaction)에 의해 주도된다는 것을 보여주었다. 이러한 상호작용은 Syph의 C-말단(Ct) 영역에 존재하는 티로신 (tyrosine) 잔기와 Syn의 양전하를 띤 영역과 관련이 있는 것을 확인하였다. Syph의 본질적으로 무질서한 (intrinsically disordered) C-말단 영역인 Syph Ct가 높은 농도로 세포와 유사하게 밀집되어 있는 in vitro 조건에서 자체적으로 액체 드롭렛을 형성하는 것을 발견하였다. 게다가, 빛에 민감한 CRY2PHR 또는 다중 단백질의 서브 유닛으로 태깅을 이용한 추가 상호 작용의 도움으로 살아있는 세포 내에서 상 분리 현상을 수행하는 것을 확인하였다. Syph의 C-말단 영역에는 티로신으로 시작하는 9개의 반복된 서열을 포함한 총 10개의 반복된 서열이 있음을 확인하였다. 흥미롭게도, 이러한 9개의 티로신 잔기를 세린으 (serine)로 돌연변이시키면 (Syph 9YS로 지칭됨) Syph Ct의 상분리 능력이 완전히 사라진다는 것을 발견하였다. 이는 티로신으로 매개되는 파이 (pi)-상호작용이 이 과정에서 매우 중요한 역할을 한다는 것을 알 수 있었다. 더욱이, 이번 연구 결과는 9YS 돌연변이가 Syph와 Syn 사이의 코아세르베이션을 방지한다는 것을 밝혀내었다. 특히, Syph 9YS는 세포질에서 Syph의 동일한 음전하를 유지한다는 점에서, 이번 연구 결과를 통해 단순한 전하 상호작용보다는 파이 양이온 정전기적 상호작용이 단백질들의 코아세르베이션에 관련이 있는 것으로 강력하게 시사하였다. Syph와 Syn의 코아세르베이션을 지배하는 기전을 해명함으로써, 이번 연구는 분자적 과정에 대한 소중한 통찰력을 제공할 뿐만 아니라, 시냅스 활동 중 Syph와 Syn 사이의 다가 파이 양이온 정전기적 상호작용 조절이 시냅스 소포 군집화의 동적 특성에 기여할 수 있는 흥미로운 가능성을 제기하였다.Introduction 1 Material and Methods 4 Results 10 Discussion 32 References 41 Abstract in Korean 47석

나홀로 여가 시간 및 활동 특성 - 10대, 60대 이상 남성을 중심으로

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 환경대학원 환경계획학과, 2018. 8. 최막중.우리 사회에서 나홀로 여가에 대한 관심이 높아져 가고 있다. 전통적으로 마을, 가족, 친구 등과 함께 하는 여가를 중심으로 해왔던 한국의 여가 문화는 나홀로 여가의 증가로 인해 새로운 국면을 맞이하게 되었다. 본 연구는 최근 들어 갑자기 등장한 청년 1인 가구 중심의 마케팅적 관점을 그대로 받아들이기보다 우리 사회의 근본적인 변화상을 파악하기 위하여 사회구조적 차원에서 나홀로 여가에 대한 분석을 시도하였다. 나홀로 여가는 여가 동반인이 없이 홀로 시간을 보내는 여가 형태로, 기존에 사람들과 함께 하는 여가 시간 속에서 자연스럽게 형성되었던 인내, 협동 등의 사회성 발달, 외로운 노년기의 고독감 해소, 공동체 내 사회적 자본의 축적 등을 저해할 수 있는 특성을 지닌다. 특히 본 연구는 나홀로 여가 현상을 다룸에 있어, 한국 사회의 급격한 경제적, 기술적 발전에 따라 노동을 삶의 중심에 두어왔던 개발연대로부터 IT기술의 눈부신 성장을 이룬 스마트 시대까지 한국 사회의 변화 과정에서 어쩔 수 없이 나홀로 여가를 보내고 있는 여가소외계층이 존재하지 않는지 진단하는데 연구의 목적을 두고 있다. 본 연구에서는 가장 먼저 2014 생활시간조사 데이터를 토대로 나홀로 여가의 시간과 활동을 분석했다. 여기서는 나홀로 여가의 계층적 특성을 분석하기 위하여 주요한 영향요인으로서 연령, 성별, 가구원, 소득 변수를 다루었다. 특히 급격한 사회적 변화를 겪으며 벌어진 세대 간 격차에 주목하기 위하여 기존 선행연구에서 주로 연구해왔던 저소득, 1인 가구 보다 연령 효과와 성별 효과를 정확히 밝혀내는데 초점을 두었다. 또한 나홀로 여가의 시간과 활동의 분석에 있어서 세부적으로 집안과 집밖 여가라는 장소적 구분, 세부 활동종류의 구분을 활용하였는데, 여가 동반자 측면에서 소극적 활동인 나홀로 여가 안에서도 장소와 활동종류의 구분에 따라 소극적 수준이 세부적으로 구분될 수 있기 때문이었다. 결과적으로 나홀로 여가는 시간적 특성 측면에서 연령과 성별에 따른 영향을 강하게 받고 있었다. 특히 연령 면에서는 선행연구에서 주로 다루어진 20~30대 청년세대가 아니라 10대 청소년과 60대 이상의 노년층에게서 더 높은 수준의 나홀로 여가가 이루어지고 있음을 알 수 있었다. 성별 역시 기존의 통념과는 달리 여성보다 남성에게서 더 긴 나홀로 여가 시간과 시간비율을 발견할 수 있었다. 연령과 성별 변수의 상호작용항인 10대 남성과 60대 이상 남성의 변수도 통계적으로 유의하게 나타났다. 그 중에서도 10대 남성은 전체 여가 시간이 가장 짧은 편이었는데, 상대적으로 적은 여가시간을 여가동반자와 장소 모두 소극적으로 쉽게 접근할 수 있는 형태인 나홀로 집안 여가로 보내고 있었다. 60대 이상 남성은 전체 여가 시간이 가장 긴 편이었으며 상대적으로 나홀로 집밖 여가에 가장 많은 시간을 할애하고 있었다. 소득과 가구원의 영향력은 상대적으로 낮았는데, 집안 여가는 저소득 1인 가구일수록 더 많은 시간을 사용하였으며 반대로 집밖 여가는 고소득층일수록 더 많이 하는 경향이 나타났다. 나홀로 여가의 활동적 특성에서는 집안 여가와 집밖 여가를 세부적인 활동으로 구분하였다. 집안 여가 중에서는 여가시간이 상대적으로 부족한 편이었던 10대 남성을 중심으로 최신 기술발달의 도움을 받아 온라인 속 인터넷⋅게임에 집중하게 되는 현상을 발견할 수 있었으며, 집밖 여가 중에서는 60대 이상 남성들에게서 익숙한 전통적 해법으로서 오프라인에서의 걷기산책등산에 편중되는 경향을 파악할 수 있었다. 무비용으로 할 수 있는 간단한 운동인 걷기산책등산은 고소득을 중심으로 하였던 집밖 여가 중에서도 유독 저소득 1인 가구의 경향이 나타났다. 한편 동반여가의 경우, 어린 연령대부터 여성의 비율이 높았으며, 특히 20~30대에서 가장 높은 비율로 동반 여가, 교제외식, 문화관광쇼핑에 참여하는 특성을 살펴볼 수 있었다. 여성의 경우, 60대 이상이 되면 종교, 사회봉사의 비중도 높게 나타났다. 제5장에서는 나홀로 시간과 활동 특성에서 양적인 데이터만으로 충분히 살펴보기 어려웠던 부분인 나홀로 여가의 원인과 평가를 추가적인 면접조사를 통해 조사해보았다. 여기서는 나홀로 여가 활동 측면에서 중심이 되었던 나홀로 인터넷⋅게임과 걷기산책등산에 집중하였다. 이를 위해 면접조사의 전사 자료를 활용해 내용분석을 실시하였다. 그 결과로서, 10대 남성의 인터넷⋅게임은 아직 충분한 인간관계가 형성되기 이전인 시기에 미숙한 관계와 학업으로 인한 절대시간의 부족이 원인이 되어 발생했으며, 그들은 이러한 활동을 통해 본능적 욕구를 충족시킬 수 있다는 평가와 함께 극단적 성향이 발현되었음에 대한 아쉬움을 지적하였다. 60대 이상 남성은 홀로 걷기산책등산을 하는 이유로 관계의 단절과 그로 인해 공원에서 경제적 부담을 줄여가며 시간을 보내고 있는 상황을 언급하였다. 이러한 행위는 그들에게 신체적, 심리적 건강 측면에 대해 집에 머물러 있는 것보다 나은 대안이 되어주었지만 그들은 여전히 외로운 기분을 느꼈으며 사회적 의미가 결여되어있기 때문에 혼자 놀기의 한계를 느끼고 있었다. 최종적으로 도시계획 측면에서 다음과 같은 시사점을 얻을 수 있었다. 통계분석 결과 전통적 공동체가 사라진 도시 지역과 이웃 간의 만남을 위한 부대복지시설이 부족한 비아파트 지역에서 나홀로 여가 시간이 길게 나타났으며, 주요 계층인 10대 청소년과 60대 이상 노인 역시 학업과 건강상의 이유로 멀리 위치한 여가시설을 방문하기 어려웠는데, 이러한 측면에서 앞으로는 동네 단위의 생활 밀착형 여가공간의 공급이 필요하다고 여겨진다. 특히 남성 노인들에게는 단순 현금 보조 중심인 현행복지방식을 넘어서 동네 질서 관리, 동네 방범 활동 등 사회적으로 의미 있는 활동으로서 지역 중심 일자리를 확대 공급하여야 할 것이며, 남성 청소년들을 위해서도 학교, 학원가 등 생활공간 주변에서 쉽고 빠르게 할 수 있는 스케이트보드, 브레이크 댄스 등 소규모 스포츠 시설을 제공하여 만남의 기회를 확대할 필요가 있다.제1장 서 론 1 제1절 연구의 배경 및 목적 1 제2절 연구의 범위 및 구성 3 제2장 이론 및 선행연구 고찰 7 제1절 나홀로 여가의 정의 7 제2절 나홀로 여가와 사회적 관계 9 1. 인간 발달과 사회성 배양 10 2. 노년기 심리적 위축과 고독감 11 3. 사회적 자본과 관계형 여가 12 제3절 나홀로 여가의 한국적 맥락 14 1. 노동-여가 관계의 변천 15 2. 한국사회의 급격한 변화 16 3. 한국사회에서 나홀로 여가 경향 17 제4절 나홀로 여가의 영향요인과 관련연구 18 1. 연령 효과 18 2. 성별 효과 20 3. 가구원 효과 21 4. 소득 효과 22 5. 기타 23 6. 종합 25 제3장 나홀로 여가 시간 특성 27 제1절 나홀로 여가 시간 변수의 정의 27 1. 나홀로 여가와 집안, 집밖 여가 시간 변수의 정의 27 2. 나홀로 여가 시간 영향요인 변수의 정의 29 제2절 나홀로 여가 시간의 배분 33 1. 일일 여가 시간의 배분 34 2. 일일 나홀로 여가 시간의 배분 36 3. 일일 나홀로 집안 여가 시간의 배분 37 4. 일일 나홀로 집밖 여가 시간의 배분 40 제3절 나홀로 여가 시간의 영향요인 42 1. 일일 나홀로 여가 시간량의 영향요인 42 2. 일일 나홀로 집안 여가 시간량의 영향요인 47 3. 일일 나홀로 집밖 여가 시간량의 영향요인 49 제4절 소결 51 제4장 나홀로 여가 활동 특성 53 제1절 나홀로 여가 활동종류의 정의 53 제2절 나홀로 여가 활동종류의 집단별 분포 55 1. 나홀로 집안 여가의 집단별 분포 56 2. 나홀로 집밖 여가의 집단별 분포 57 3. 나홀로 여가와 동반 여가의 집단별 분포 58 제3절 나홀로 인터넷게임 활동의 특성 59 1. 나홀로 인터넷게임 시간의 배분 59 2. 나홀로 인터넷게임 시간의 영향요인 62 제4절 나홀로 걷기산책등산 활동의 특성 64 1. 나홀로 걷기산책등산 시간의 배분 64 2. 나홀로 걷기산책등산 시간의 영향요인 66 제5절 소결 68 제5장 나홀로 여가 활동의 원인과 평가 70 제1절 나홀로 여가 활동 면접조사 개요 70 1. 조사개요 70 2. 면접내용 및 분석방법 71 제2절 나홀로 인터넷게임 면접조사 결과 75 1. 응답자 특성 75 2. 내용분석 결과 77 제3절 나홀로 걷기산책등산 면접조사 결과 85 1. 응답자 특성 85 2. 내용분석 결과 87 제4절 소결 93 제6장 결론 95 제1절 연구의 요약 95 제2절 연구의 시사점 97 참고문헌 100 Abstract 107Docto

마을만들기에 있어 물리적 사업과 재산권 제약의 정도에 관한 연구

학위논문 (석사)-- 서울대학교 환경대학원 : 환경계획학과, 2013. 2. 최막중.본 연구는 국토해양부 살고싶은 도시만들기 시범마을과 서울시 마을공동체담당관 선정 우수 마을공동체 사례모음에서 추출한 마을만들기 사업 사례에 대하여 물리･비물리적 사업의 비중과 재산권 제약의 정도를 분석하였다. 이를 통해 확인한 결과는 다음과 같이 요약될 수 있다. 첫째, 마을만들기 사업을 전체 총합했을 때, 물리적 사업과 비물리적 사업의 실시 비중은 대체로 동등하다. 마을 수와 사업 수 측면에서 물리적 사업과 비물리적 사업을 실시한 전체 횟수는 거의 일치한다. 그러나 마을별로 세부사업을 보면, 물리적 사업 위주로 진행되는 마을이 비물리적 사업 위주로 진행되는 마을에 비하여 높은 비율을 차지하고 있다. 둘째, 마을만들기의 물리적 사업에서 주민의 재산권 제약 사업은 대체로 미미한 비율로 발생하며, 제약 정도가 높아질수록 비율은 감소한다. 이를 통해 아직까지 주민들이 마을만들기 사업에 대해서 자신의 재산에 가해지는 제약을 적극적으로 수용하고 있지 않다는 것을 알 수 있다. 셋째, 마을만들기 사업은 전반적으로 긍정적 외부효과 창출에 효과적이며, 부정적 외부효과 방지에 관한 사업은 거의 나타나지 않았다. 그러나 마을주민들의 특성과 정부지원금 여부가 부정적 외부효과 방지에 관한 사업의 등장에 큰 영향을 끼친다. 위의 분석결과를 바탕으로 도출된 연구의 시사점은 다음과 같다. 가장 먼저, 마을만들기는 기존의 공공이 주도하는 전통적 도시계획사업에서 이루어지던 것과 같은 물리적 사업 이외에도 비물리적 사업을 도입시켜 보다 다양한 내용을 통합적으로 다루며, 주민의 자발성을 바탕으로 긍정적 외부효과를 증대시킬 수 있는 사업을 추진할 수 있다는 점에서 장점을 지닌다. 그러나 한편으로는 주민 개인의 재산을 대상으로 하는 사업의 비율이 높지 못하며, 부정적 외부효과 방지에 대하여 높은 성과를 보이지 못한다는 점에서 한계를 지닌다. 이는 지역에서 부정적 외부효과를 방지하기 위한 사업이 반드시 필요할 경우, 마을만들기가 아닌 공공이 주도하는 사업을 통해 보완할 수 있음을 시사한다. 하지만 지금까지의 마을만들기 사업에서 재산권 제약 사업 및 부정적 외부효과 방지 사업이 차지하는 비중이 적다고해서 마을만들기 범위 안에서 이러한 사업들이 자생적으로 생겨나는 것을 억제하고 한계 지어서는 안 될 것이며, 마을만들기와 전통적 방식의 도시계획 사이에 상호 보완을 추구하여야 할 것이다. 한편, 이와 같은 연구의 결과와 시사점은 다음과 같은 한계를 지니고 있다. 무엇보다 자료의 구성 면에서 본 연구는 국토해양부 살고싶은 도시만들기 시범마을을 주된 대상으로 하기에 국내 마을만들기 사업 전반을 관측하고 판단할 수 있는 자료들이 일부 누락되었을 수 있다. 따라서 차후에 엄밀한 사례 추출을 통한 재검토가 필요하며, 국내 마을만들기 전반의 실태를 정확히 파악하기 위해서는 도시 지역과 비도시 지역을 아우르는 연구가 행해져야 할 것이다. 그리고 마을만들기의 정부지원금 여부를 가리기 위해서는 보다 세심한 접근이 요구된다. 본 논문에서는 획득한 자료의 한계로 국토해양부의 지원을 전, 중, 후로 단계를 나누어 정부지원 여부를 결정하였다. 국토부 지원 외에도 모든 정부지원 사업과 주민자체 사업을 나누어 정부지원 여부에 관한 분류를 실시할 때, 보다 정확한 정부지원 여부와 마을만들기 사업 간의 관계가 입증될 것이다.제 1 장 서 론 제 1 절 연구의 배경 및 목적 제 2 절 연구의 범위 및 방법 제 2 장 이론적 고찰 제 1 절 마을만들기의 개념 및 현황 1. 마을만들기의 개념 2. 국내 마을만들기 사업의 종류 3. 국내 마을만들기 사업의 참여주체 4. 국내 마을만들기 사업의 현황 제 2 절 재산권 제약과 외부효과 1. 법적인 의미에서 재산권 제약 2. 토지이용규제에서 재산권 제약과 외부효과 3. 마을만들기에서 주민의 재산권 제약과 외부효과 제 3 절 선행연구 고찰 제 3 장 분석개요 및 분석의 틀 제 1 절 대상지 선정 및 대상지의 특성 1. 국토해양부 살고싶은 도시만들기 시범마을 2. 서울시 마을공동체담당관 마을공동체 사례모음 3. 대상지의 일반적 특성 4. 대상지 분석의 단위 제 2 절 물리･비물리적 사업 유형화 및 측정항목 1. 물리･비물리적 사업 유형화 2. 물리･비물리적 사업 비중 측정항목 도출 제 3 절 물리적 사업에서 재산권 제약 유형화 및 측정항목 1. 재산권 제약 유형화 2. 재산권 제약 정도 측정항목 도출 제 4 절 분석의 틀 제 4 장 마을만들기의 물리적 사업과 재산권 제약의 정도 제 1 절 물리･비물리적 사업 비중 1. 물리･비물리적 사업 비중과 특징 2. 정부지원금에 따른 물리･비물리적 사업 비중과 특징 제 2 절 물리적 사업에서 재산권 제약 정도 1. 재산권 제약 정도와 특징 2. 재산권 제약 높음 사업의 특징 제 5 장 결론 제 1 절 연구요약 제 2 절 연구의 시사점 및 한계 참고문헌 AbstractMaste

MB660의 HIF-1α 분해를 통한 망막신생혈관 억제 효과

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 임상의과학과, 2013. 2. 김정훈.Purpose: Anti-cancer, anti-viral, anti-bacterial, and anti-inflammatory effect of MB660 (3,4-dihydro-2,2-dimethyl-2H-naphtho-[1,2-b]pyran-5,6-dione) has been well known. We aimed to demonstrate the anti-angiogenic effect of MB660 on the retinal neovascularization via HIF-1α degradation. Methods: The toxicity of MB660 was evaluated by modified 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay in human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs) as well as histologic examination and terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick-end labeling staining in the MB660-injected retina of C57BL/6J mice. Retinal neovascularization was examined by fluorescence angiography and vessel counting in cross sections after intravitreal injection of MB660 in the oxygen induced retinopathy (OIR) mouse model. Western blot analysis was used to assess inhibition of hypoxia inducible factor (HIF)-1α by MB660 at a protein level under hypoxic condition induced by CoCl2. Results: MB660 did not show any toxicity on HRMECs and did not induce any structural or inflammatory changes in normal retina layers up to 1 µM. Intravitreal injection of MB660 effectively reduced anomalous retinal angiogenesis, shown as decreased neovascular tufts on fluorescein angiography and decreased vascular lumens in cross section in the OIR mouse model and also attenuated CoCl2 induced HIF-1α production. Conclusions: Our data suggest that MB660 may have anti-angiogenic activity on retinal neovascularization by suppressing hypoxia-induced vascular endothelial growth factor expression via attenuating HIF-1α without retinal toxicity.1. Introduction•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 1 2. Materials and Methods •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 3 2.1 Animals 2.2 Cell cultures 2.3 Cell viability assay 2.4 Histology 2.5 Terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick-end labeling (TUNEL) Assay 2.6 Oxygen induced retinopathy (OIR) 2.7 Qualitative assessment of retinal neovascularization by fluorescein angiography 2.8 Quantitative assessment of retinal neovascularization by counting vascular lumens 2.9 Western blot 2.10 Statistical analysis 3. Results ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 9 3.1 Effect of MB660 on the viability of human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs) and retina 3.2 Anti-angiogenic effect of MB660 on retinal neovascularization in OIR 3.3 Effect of MB660 on cobalt chloride induced HIF-1α expression in human brain astrocytes 4. Discussion ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 18 5. References ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 21 6. 국문초록 •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 24Maste

피부 표피 멜라닌세포에서 Calcineurin 및 MEF2A 신호전달이 멜라닌 합성에 미치는 영향

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :의과대학 의과학과,2020. 2. 정진호.Calcineurin (CaN) is a calcium/calmodulin regulated serine/threonine protein phosphatase that has been widely studied in calcium signaling pathways. For the treatment of Vitiligo that is a depigmenting autoimmune disease in skin, calcineurin inhibitors such as cyclosporin A and FK506 are used to prevent the transcription of proinflammatory cytokines. However, there is some controversy about the effect of these inhibitors on melanogenesis and little has been reported the effect of calcineurin itself on melanogenesis in human skin. The downstream targets of calcineurin in calcium pathways have been variously ascribed to members of the NFAT and MEF2 families of transcription factors. Although the role of NFAT in human skin has been reported, the effect of MEF2 remains unknown. Among the MEF2 transcription factor members, MEF2A has been reported to be expressed higher than other members in human epidermal melanocytes. To investigate the role of calcineurin and MEF2 in melanogenesis, knockdown and overexpression experiments were performed. A decrease in expression of calcineurin by siRNA of calcineurin B subunit gene, PPP3R1, caused a decrease in melanin synthesis and resulted in the downregulation of mRNA and protein expression of tyrosinase which is a crucial enzyme for melanogenesis in human epidermal melanocytes. Likewise, knockdown of MEF2A decreased the melanin synthesis and resulted in the downregulation of mRNA and protein expression of tyrosinase. To complement knockdown experiments of calcineurin and MEF2A, lentiviral overexpression experiments were performed. The overexpression of both calcineurin A subunit and B subunit in human melanocytes didnt change the melanin synthesis as well as tyrosinase, while the overexpression of MEF2A resulted in increase of melanin synthesis. In addition, the mRNA and protein expression of tyrosinase was increased by overexpression of MEF2A. Furthermore, MEF2 luciferase reporter assay was performed to examine whether calcineurin regulates MEF2A transcriptional activity. Calcineurin overexpression enhanced MEF2A transcriptional activity in B16 melanoma cells. Taken together, these results suggest that calcineurin regulates melanin synthesis and tyrosinase expression through activation of MEF2A pathway. We suggest that MEF2A could be a new candidate gene that regulates skin pigmentation.칼시뉴린(calcineurin)은 칼슘과 칼모듈린(calmodulin)에 의존적으로 활성화되는 인산가수분해효소로 칼슘 신호전달 경로에 중요한 인자이다. T 림프구 매개 면역반응 활성화에 중요한 인자이기 때문에 사이클로스포린 A(cyclosporin A)와 타크로리무스(tacrolimus, FK506) 등의 국소 칼시뉴린 억제제는 백반증과 같은 자가 면역 질환에 국소 면역 억제제로 가장 흔하게 사용되고 있다. 하지만, 이러한 국소 칼시뉴린 억제제들이 피부 표피 멜라닌세포에서 멜라닌 합성에 미치는 영향은 다르게 보고되어 있어 논란의 여지가 있다. 따라서 본 연구에서는 칼시뉴린 본연의 단백질이 멜라닌 합성 과정에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 칼시뉴린에 의해 조절을 받는 하위 인자로 NFAT와 MEF2 단백질이 잘 알려져 있지만, 사람 피부 조직에서 칼시뉴린-NFAT의 신호 전달 경로는 잘 알려진 반면에 칼시뉴린-MEF2의 경로는 아직 보고된 바 없다. MEF2는 근육 세포 분화 및 발달에 중요한 전사 조절 인자로 근육 이외에도 심장, 신경 및 면역세포에서 활발하게 연구되었지만 피부에서의 역할은 아직 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 피부 표피의 각질형성세포와 멜라닌세포 그리고 피부 진피의 섬유아세포에서 MEF2A의 발현을 비교해본 결과, 멜라닌세포에서 가장 발현이 높게 나타남을 확인하였다. 또한, luciferase reporter 실험을 통하여 멜라닌세포에서도 칼시뉴린에 의해 MEF2A의 전사 활성이 증가함을 확인하였다. 이후 칼시뉴린과 MEF2A가 멜라닌 합성 과정에 미치는 영향을 확인해 보고자 유전자 간섭 실험을 통해 멜라닌세포에서 발현을 각각 억제한 결과, 칼시뉴린과 MEF2A 발현 감소에 따라 멜라닌 합성량이 감소함을 관찰하였다. 이러한 멜라닌 합성의 감소가 타이로시네이즈(tyrosinase), TRP-1, DCT, MITF 등과 같은 멜라닌 합성 핵심 효소들의 변화에서 기인한 것인지 확인해보았다. 그 결과, 가장 첫 단계에 관여하는 핵심 산화 효소인 타이로시네이즈의 mRNA와 단백질 발현이 모두 감소한 것을 확인하였다. 이후 칼시뉴린과 MEF2A의 역할을 한번 더 검증해보기 위해 바이러스 매개 과발현 실험을 진행하였다. 멜라닌세포에서 칼시뉴린을 과발현 시켰을 때는 멜라닌 합성량에 변화가 없었지만, MEF2A를 과발현 시킨 결과 유전자 간섭 실험과 반대로 타이로시네이즈의 mRNA와 단백질 발현이 증가하여 최종 멜라닌 합성량이 증가함을 관찰하였다. 결과를 종합해 보았을 때, 칼슘 신호에 의존적인 칼시뉴린은 MEF2A 전사 조절 인자의 활성을 증가시켜 멜라닌 합성에 핵심 효소인 타이로시네이즈의 발현을 증가시킴으로써 멜라닌 합성에 관여하고 있음을 새롭게 규명하였다. 본 연구에서는 사람 피부에서 처음으로 MEF2의 역할을 밝혔고 특히 멜라닌세포에서 멜라닌 합성을 조절하는데 새로운 표적 인자가 될 수 있음을 새롭게 제시하였다.Introduction 1 Materials and Methods 7 Results 18 1. Knockdown of calcineurin B subunit decreases phosphatase activity of calcineurin and melanin synthesis in human epidermal melanocytes. 18 2. Knockdown of calcineurin B downregulates both mRNA and protein expression of tyrosinase in human epidermal melanocytes 22 3. Overexpression of calcineurin has no effect on melanin synthesis in human epidermal melanocytes 26 4. MEF2A is most expressed in human epidermal melanocytes and calcineurin enhances MEF2A transcriptional activity in melanocytes 29 5. Knockdown of MEF2A decreases melanin synthesis in human epidermal melanocytes 33 6. Knockdown of MEF2A downregulates both mRNA and protein expression of tyrosinase in human epidermal melanocytes. 36 7. Overexpression of MEF2A increases melanin synthesis in human epidermal melanocytes 40 8. Overexpression of MEF2A upregulates both mRNA and protein expression of tyrosinase in human epidermal melanocytes. 43 9. Schematic diagram showing the effects of calcineurin and MEF2A signaling on melanin synthesis. 47 Discussion 48 References 52 국문 초록 56Maste

지속적 안구내 약물 방출을 위한 알부민 나노입자 기반 약물 전달 시스템 개발

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 의학과, 2017. 2. 박기호.Purpose: Eye drops are one of the most common types of glaucoma medication notwithstanding their limitations in terms of bioavailability and low compliance. Albumin-based nanoparticles have shown potential for effective and continuous drug release. Thus, we investigated the potential of human serum albumin nanoparticle (HSA-NP) as a tool for sustained delivery of neuroprotective agent in optic nerve crush (ONC) injury model. Methods: Albumin nanoparticles loaded with brimonidine (HSA-BRM-NPs) were prepared by ethanol precipitation, including 0.18% brimonidine (BRM) and 3.5% human serum albumin (HSA) in HSA-BRM-NP solution. In vitro release profile of BRM was measured using Spectra/por dialysis membrane and assessed by high-performance liquid chromatography. We performed ONC and intravitreal injection in Sprague-Dawley rats, which were divided into Normal, balanced salt solution (BSS)-injected ONC, HSA-NP-injected ONC, BRM-injected ONC, and HSA-BRM-NP-injected ONC groups. The survival of RGC was compared at 5 and 14 days after procedures. Results: The HSA-BRM-NP released 95% BRM in a sustained manner for 3 days, and the rest until 5 days. The percentages of RGC survival in the HSA-NP (52.6 ± 3.3%), BRM (58.0 ± 4.2%), and HSA-BRM-NP (63.5 ± 7.1%) groups relative to Normal (100%) were significantly higher than in the BSS group (29.2 ± 3.3%) 5 days after ONC (P < 0.001). At 5 days, no significant difference was found in the percentage of RGC survival between BRM and HSA-BRM-NP groups (P = 0.014). However, the HSA-BRM-NP (38.1 ± 3.6%) group showed significantly higher RGC density than the BRM (18.6 ± 3.9%, P = 0.006) group at 14 days. Conclusions: Albumin nanoparticles showed sustained therapeutic effect with the combined neuroprotective agent. Our results suggest the potential of albumin nanoparticles as a promising tool for sustained intraocular drug release.1. Introduction 1 2. Materials and Methods 3 2.1 Materials 3 2.2 Preparation of human serum albumin nanoparticles loaded with brimonidine 3 2.3 Characterization of human serum albumin nanoparticles loaded with brimonidine 4 2.4 Optic nerve crush injury model 5 2.5 Intravitreal injection of test agents 6 2.6 Evaluation of retinal ganglion cell survival 7 2.7 In vivo retinal distribution of human serum albumin nanoparticles loaded with brimonidine 8 2.8 Immunohistochemistry for amyloid-β 8 2.9 Cell viability assay for human serum albumin inhibition of amyloid-β aggregation 9 2.10 Statistical analysis 10 3. Results 11 3.1 Characterization of nanoparticles 11 3.2 In vivo retinal distribution of human serum albumin nanoparticles loaded with brimonidine 11 3.3 Sustained therapeutic effect of human serum albumin nanoparticles loaded with brimonidine on retinal ganglion cell survival 11 3.4 Neuroprotective mechanism of human serum albumin nanoparticles 12 4. Discussion 20 5. References 27 6. 국문초록 35Docto

노년기 요실금의 유병률과 관련요인에 관한 연구

학위논문(석사)--서울대학교 보건대학원 :보건학과 보건학전공,1997.Maste

부산 지역어의 성조형과 성조 변화

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 국어국문학과, 2016. 2. 정승철.<국문초록> 부산 지역어의 성조형과 성조 변화 김 고 은 본 연구는 경남의 부산 지역어를 대상으로 하여, 성조소 및 복합조 목록과 성조형을 공시적으로 기술하는 한편, 이 지역의 노년층과 청년층 사이에서 나타나는 성조상의 변화를 고찰하는 것을 목적으로 한다. 먼저 1장에서는 연구의 목적 및 대상을 밝혔으며 조사 및 연구 방법과 논문의 구성을 설명하고 경남 방언에 대한 성조형 및 세대 간 성조 변화에 대한 연구 성과를 살펴보았다. 2장에서는 부산 지역어의 성조소 및 복합조의 목록을 확인하였다. 이 지역어는 ‘고조(H)’와 ‘저조(L)’의 두 가지 성조소 및 ‘고저복합조(H·L)’, ‘저고복합조(L·H)’의 두 가지 복합조를 가지고 있다. 3장에서는 체언과 용언의 성조형을 기술하였다. 여기서의 성조형이란 체언과 용언의 어간이 각각 곡용·활용할 때 보이는 성조 패러다임을 중심으로 그 어간들을 분류한 것이다. 이 지역어의 성조형은 하나의 곡용형‧활용형이 몇 개의 고조를 허용하느냐에 따라 크게 두 가지로 나눌 수 있다. 성조형에 따라 한 곡용형‧활용형 내에 오로지 한 개의 고조만이 존재하는 경우도 있고, 고조가 연속해서 두 개 존재하는 경우도 있다. 후자의 경우 연속된 두 개의 고조가 제1·2음절에 나타나느냐, 제2·3음절에 나타나느냐에 따라 성조형이 다시 세분된다. 4장에서는 3장에서 확인한 체언과 용언의 성조형을 바탕으로 부산 지역어에서 나타나고 있는 세대 간 성조 변화를 검토하였다. 부산 지역어의 체언‧용언에서는 공통적으로 어간의 음절수에 관계없이 곡용형‧활용형이 HL…로 실현되는 성조형은 변화를 입기 쉬우며 변화의 결과로 거의 나타나지 않는 반면, 곡용형‧활용형이 LH…로 실현되는 성조형은 변화를 쉽게 입지 않으며 변화의 결과로서 빈번히 나타난다. 또한 3음절 어간의 LHH형과 LLH형의 구분이 모호해지는 가운데, LLH형이 LHH형에 유사하게 실현되고 있다. 그 외에도 체언에서는 규칙적 H(H)형의 비율이 낮아지고, 변칙적 H(H)형의 비율이 높아진다. 용언에서는 LH형에 속하면서 모음 혹은 유음으로 끝나는 어간이 어미 ‘-(으)니까’와 결합하였을 때 그 성조가 LHLL~LLHL로 수의적 교체를 보인다. 5장은 결론으로 지금까지의 논의를 요약하였으며 본 연구의 한계와 남은 문제들을 제시하였다. 주요어: 부산 지역어, 성조소, 복합조, 성조형, 어간 성조형, 세대 간 성조 변화 학번:　2014-200811. 서론 1 1.1. 연구 목적 및 대상 1 1.2. 조사 및 연구 방법 2 1.3. 선행 논의 검토 4 1.4. 논의의 구성 6 2. 성조소 및 복합조 목록 7 3. 체언과 용언의 성조형 13 3.1. 체언의 성조형 15 3.1.1. 1음절 어간 15 3.1.2. 2음절 어간 20 3.1.3. 3음절 어간 25 3.1.4. 정리 30 3.2. 용언의 성조형 33 3.2.1. 1음절 어간 33 3.2.2. 2음절 어간 42 3.2.3. 3음절 어간 51 3.2.4. 정리 58 4. 체언과 용언의 성조 변화 61 4.1. 체언의 성조 변화 61 4.1.1. 1음절 어간 61 4.1.2. 2음절 어간 65 4.1.3. 3음절 어간 66 4.1.4. 정리 71 4.2. 용언의 성조 변화 73 4.2.1. 1음절 어간 73 4.2.2. 2음절 어간 76 4.2.3. 3음절 어간 80 4.2.4. 정리 81 5. 결론 83 참고문헌 85 ABSTRACT 89Maste

Development of health care education content for pediatric heart transplant recipients and their families

심장이식을 받은 아동은 성인기 전까지는 부모와 가족이 많은 부분의 건강관리를 담당하므로 이들의 역할이 매우 중요하다. 본 연구의 목적은 심장이식 아동과 가족에게 필요한 교육내용을 개발함으로써 보호자의 아동 건강관리 능력을 향상시키고 아동이 안전하게 일상으로 돌아갈 수 있도록 하기 위함이다. 본 연구는 ADDIE모델 5단계 중 앞 3단계 A (Analysis), D (Design), D (Development)를 통해 교육내용을 개발하였다. 분석단계는 3개의 데이터베이스를 이용하여 최종 추출된 12건의 문헌고찰과 7개의 국내외 의료기관 및 관련기관 웹사이트 분석 및 심장이식 수술을 받은 6명 아동의 주 돌봄제공자 개별 심층면담을 통해 교육내용 및 요구도를 분석하였다. 세 가지 분석결과를 토대로 심장이식의 이해, 퇴원준비와 일정관리, 약물복용, 감염, 거부반응, 합병증, 영양, 일상생활로 돌아가기, 지원체계의 9개 대분류와 40개의 소분류로 교육 항목을 설계하였다. 설계한 교육 항목을 바탕으로 심장이식 아동과 가족을 위한 건강관리 교육내용 초안을 개발하였고 10명의 관련 전문가에게 교육 항목 및 내용에 대한 내용타당도 검증을 받았다. 모든 항목이 기준점수 0.8 이상 검증되어 교육내용에 포함되었으며 전문가 조언을 바탕으로 일부 내용을 수정하여 최종 교육 내용을 개발하였다. 본 연구는 선행 연구와 국내외 의료기관 교육내용을 분석함과 동시에 보호자 개별심층면담을 통해 우리나라 실정에 맞는 건강관리 교육내용을 개발했다는 점에 있어 그 의미가 있다. Heart transplantation in children requires thorough management of the family because parents and family manage themselves until the child becomes an adult. The purpose of this study is to develop educational content for children who have undergone heart transplant and their families to improve the caregivers’ child health management ability and enable the child to return to daily life safely. This study developed educational content through the first three steps A (Analysis), D (Design), and D (Development) from the five steps outlined in the ADDIE model. In the analysis stage, the contents were analyzed by 12 literature reviews, 7 websites of domestic and international medical centers, and related institutions. The needs of education were analyzed by individual in-depth interviews with six caregivers of children who had undergone heart transplantation. Based on the results of the three analyses, education items were designed in 9 major categories and 40 sub-categories. The major categories were preparation for discharge and schedule management, drug use, infection, rejection, complications, nutrition, return to daily life, and support systems. Based on the designed educational contents, a draft health management education content for children who have undergone heart transplants and their families was developed, and the content validity of the educational contents was verified by 10 related experts. All contents were verified with a standard score of 0.8 or higher and included in the education content, and some contents were modified based on expert advice to develop the final education content. This study is meaningful in that it has developed health management education suitable for the situation in Korea through an in-depth interview with caregivers as well as analyzing previous studies and educational contents of domestic and international medical centers.prohibition석