重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子致过敏性休克1例

1病例资料患者男,61岁,以\"上腹部闷痛伴巩膜黄染2d\"为主诉于2017年4月30日来我院就诊。体检:T 36.8℃,P 80次/min,R 22次/min,BP 150/90 mmHg。患者上腹部闷痛不适,呈阵发性加重,无放射转移痛,皮肤、巩膜中度黄染,余无特殊。辅助检查:血常规:白细胞（WBC）50.54×109·L-1,中性粒细胞（NEU）4.75×109·L-1,淋巴细胞（LYM）10.90×109·L-1,单核细胞（MONO）34.76×109·L-1,血红蛋白（Hb）129 g·L-1,血小板（Plt）35×109·L-1;肝肾功能:血肌酐（SCr）88.7μmol·L-1,葡萄糖（Glu）6.89 mmol·L-1,总胆红素（TBIL）130.08μmol·L-1,直接胆红素（DBIL）129.05μmol·L-1,

慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF的构建及鉴定

目的:构建敲减人血清反应因子SRF基因的慢病毒质粒,为进一步研究SRF在口腔鳞状细胞癌中的作用提供工具。方法:利用Thermo Fisher公司RNAi网站设计出针对SRF基因特异性敲减的片段,然后通过对pLKO.1载体进行双酶切,胶回收纯化后,经T4连接酶将双酶切线性化载体与设计的目的片段进行连接,转化和质粒提取,采用双酶切以及测序的方法对重组质粒进行序列鉴定。利用293T细胞对构建正确的pLKO.1-hSRF质粒进行病毒包装后感染SAS口腔鳞癌细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定株,并通过Western blot和实时荧光定量PCR对稳定转染细胞株的敲减效率进行验证。结果:构建出的慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF经测序和酶切鉴定均正确,感染该慢病毒质粒的SAS细胞后,其SRF蛋白表达量和mRNA水平与对照组相比均显著下降(P<0.01)。结论:慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF构建成功,获得SRF低表达的SAS细胞株。国家自然科学基金(81671001,81771079,207201);;福建省中青年骨干人才项目(2015-ZQN-ZD-35);;厦门医学院科研基金(K2015-06);;厦门市重大疾病联合攻关项目(3502Z20179051