利用逆微胞自醱酵液中分離幾丁聚醣及生產幾丁寡醣(2/3)

本研究乃探討如何利用逆微胞系統之特性，調 整微胞內酵素、受質及水之含量比，來促進酵素之 逆合成反應而能生產較具有生理功能之高聚合度 幾丁聚醣。同時，本研究亦探討如何利用膜反應器 之操作特性，將初水解成寡醣之產物以超過濾膜分 離出反應器，而能避免其被進一步水解成低分子量 寡糖使產品含較多之高聚合度寡醣。在逆微胞反應 器實驗方面，本研究發現粗酵素在逆微胞中有合成 四、五、六醣現象，但由於水解反應和逆合成反應 會相互競爭，以致於難以解釋所觀察到之現象。進 一步將粗酵素分離成三個純化酵素，分別命名為 CBC I、CBC II、CBC III，探討其於逆微胞中之反 應，結果雖然觀察到轉糖反應，但是目前仍然無法 完全掌控反應之進行。在膜反應器之研究方面，已 經初步了解E/S 比與產物中高聚合度寡醣含量之關 係，將進一步研究其他加工條件，以生產出較多的 高聚合度寡醣

於膜反應器中利用酵素水解豬血生產生物活性peptide

豬隻全血液㆗約有17 ~ 18 %之粗蛋白質，為㆒良好的動物性蛋白質來源。本研究分別利用豬血球、血漿、去纖維蛋白原血漿為受質，於幾種酵素組合㆘進行水解，探討生產生物活性胜的可行性。其㆗以血球為受質，使用單㆒酵素trypsin水解24小時，可得到較佳之還原力，如果使用trypsin、chymotrypsin、 thermolysin所組成的混合酵素水解，水解6小時，可得到較佳抑制ACE能力，IC50為0.58 mg/ml，水解10小時可得到較佳的清除DPPH自由基效果，其清除能力為64.9% ，而水解液之胜分子量主要集㆗於1002~1450 Da，初步推論較具活性成分之胜為9~13胺基酸組成

利用酵素水解豬血生產含生物活性胜且具生理機能性之產品(3/3)

猪隻全血液中約有17 ~ 18 %之粗蛋白質，為一良好的動物性蛋白質 來源。本研究分別以猪血球、血漿、去纖維蛋白原血漿為受質，於幾種 酵素組合下進行水解，探討生產生物活性胜肽的可行性。其中以血球為 受質，添加複合酵素(trypsin、chymotrypsin、 thermolysin)進行水解，水 解6 hr，可得到較佳抑制ACE能力之水解物，IC50為0.58 mg/ml；水解10 hr可得到較佳的清除DPPH自由基，清除能力為64.9%，而且將該水解液 添加在含有β-amyloid(25-35)之RBE4 培養液中，RBE4 細胞存活率可由 67%升高至82%，具潛在預防Alzheimer's Disease效果。血球之酵素水解 液亦具有其他機能性，包括還原力、促進皮膚纖維母細胞增生、免疫調 節、抑制腫瘤細胞生長等，雖然所表現之效果未優於其他已知產品或研 究，但在一水解產品中同時存在各類機能性亦屬難得。 綜合上述結果，猪血球水解液在抑制ACE 能力、清除DPPH 自由基 優於許多動植物蛋白水解液，且同時具潛在預防Alzheimer's Disease 效 果及存在其他功能性，為值得發展成產品。因此，為有效率生產含生物 活性胜肽且具生理機能性之產品，本研究進一步利用膜反應器系統連續 式量產。當酵素受質比為1/5，駐留時間100 min，於操作2hr 以後，透 流液抑制ACE 活性及清除DPPH 自由基效果則維持穏定steady state，抑 制ACE 率達86%、清除DPPH 自由基效果達54%。繼續延長操作時間 至6 小時，該二項機能性未有顯著變化。整體研究結果，在連續式膜反 應器生產下，能有效利用猪血生產含生物活性胜肽產品，同時也因節省 酵素使用量及具初步脫色的效果，更降低生產成本及提高消費大眾對產 品接受度

利用酵素水解豬血生產含生物活性胜且具生理機能性之產品(1/3)

豬隻全血液中約有17 ~ 18 %之粗蛋 白質，為一良好的動物性蛋白質來源。本 研究室曾分別以豬血球、血漿、去纖維蛋 白原血漿為受質，於幾種酵素組合下進行 水解。其中以血球為受質，使用單一酵素 trypsin 水解24 小時，可得到較佳之還原 力之水解物；使用trypsin、chymotrypsin、 thermolysin 所組成的混合酵素水解，水解 6 小時，可得到較佳抑制ACE 能力之水解 物，IC50 為0.58 mg/ml；水解10 小時可得 到較佳的清除DPPH 自由基效果之水解 物，其清除能力為64.9% 。本年度分別將 上述具較佳還原力、清除DPPH 自由基及 抑制ACE 能力之三水解液利用濾析 4 (Diafiltration)更進一步分成大於10000、 10000~3000、3000~1000、1000 Da 以下四 個分子量區分，以探討水解液中主要貢獻 生理活性之分子量範圍，除此之外，更進 一步地測試水解液是否還有其他生理機能 (如抑制腫瘤細胞增生)。初步結果顯示， 水解液中較具還原力及清除DPPH 自由基 之胜分子量為10000 Da 以上，而抑制 ACE 活性之分子量為3000-10000 Da；於 抑制腫瘤細胞增生上，對B16F10、Hep G2 二種癌細胞並無顯著的抑制效果