β1-адренорецептор, солюбилизированный в форме нанодисков: скрининг различных амфипатических полимеров

The development of a reliable and easily used diagnostic test for measuring autoantibodies to β1-adrenergic receptor (β1ADR Ab) in patient blood is an unmet clinical need. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is considered as the most appropriate method for this task. In ELISA, the use of peptides corresponding to various fragments of amino acid sequence of β1ADR as antigens leads to inadequate results as β1ADR Ab appear to recognize conformationally dependent epitopes that are generated during the formation of unique tertiary structure of the receptor. Isolation of β1ADR preserving the native conformation and functional characteristics is a quite challenging task. A promising approach to address this task is the use of amphipatic polymers capable of forming nanodiscs, it permits to successfully solubilize membrane proteins. In order to obtain the preparations of solubilized β1ADR that can be used as antigens in ELISA we have tested 17 various amphipatic polymers. The best relative solubilization values (RSV) were obtained using UltrasoluteTM Amphipol 17 (87%) and 18 (62%), as well as by AASTY 11-45 (76%), 11-50 (77%) and 6-50 (78.5%).Создание надежного и удобного в использовании диагностического теста для определения в крови пациентов аутоантител к β1‑адренорецептору (АДРБ1 АТ) является насущной потребностью клинической практики. Формат иммуноферментного анализа (ИФА) представляется наиболее подходящим для решения этой задачи. Использование в ИФА в качестве антигена пептидов, воспроизводящих отдельные фрагменты аминокислотной последовательности АДРБ1, приводит к неадекватным результатам, поскольку, по-видимому, АДРБ1 АТ узнают конформационно-зависимые эпитопы, образующиеся при формировании уникальной третичной структуры рецептора. Выделение АДРБ1, сохраняющего нативную конформацию и функциональные свойства, является весьма сложной задачей. Перспективным способом ее решения является использование амфипатических полимеров, формирующих нанодиски, что позволяет успешно солюбилизировать мембранные белки. В настоящей работе описаны результаты тестирования 17 различных амфипатических полимеров с целью получения препаратов солюбилизированных АДРБ1, пригодных для использования в ИФА в качестве антигена. Наилучшие условные показатели солюбилизации (УПС) продемонстрировали UltrasoluteTM Amphipol 17 (87%) и 18 (62%), AASTY 11-45 (76%), 11-50 (77%), 6-50 (78.5%)