Effects of the binding of a Helianthus annuus lectin to Candida albicans cell wall on biofilm development and adhesion to host cells

Background: In our previous study, we isolated and characterized a lectin called Helja from Helianthus annuus (sunflower) and then, in a further study, demonstrated its antifungal activity against Candida spp. Since Candida infections are a major health concern due to the increasing emergence of antifungal resistant strains, the search for new antifungal agents offers a promising opportunity for improving the treatment strategies against candidiasis. Purpose: The aim of this work was to get insights about the mechanism of action of Helja, an antifungal lectin of H. annuus, and to explore its ability to inhibit Candida albicans biofilm development and adherence to buccal epithelial cells (BEC). Study design/methods: Yeast viability was evaluated by Evans Blue uptake and counting of colony forming units (CFU). The yeast cell integrity was assessed using Calcofluor White (CFW) as a cell wall perturbing agent and sorbitol as osmotic protectant. The induction of oxidative stress was evaluated using 3,3′-diaminobenzidine (DAB) for detection of hydrogen peroxide. The adherence was determined by counting the yeast cells attached to BEC after methylene blue staining. The biofilms were developed on polystyrene microplates, visualized by confocal laser scanning microscopy and the viable biomass was quantified by CFU counting. The binding lectin-Candida was assessed using Helja conjugated to fluorescein isothiocyanate (Helja-FITC) and simultaneous staining with CFW. The cellular surface hydrophobicity (CSH) was determined using a microbial adhesion to hydrocarbons method. Results: C. albicans cells treated with 0.1 µg/µl of Helja showed a drastic decrease in yeast survival. The lectin affected the fungal cell integrity, induced the production of hydrogen peroxide and inhibited the morphological transition from yeast to filamentous forms. Helja caused a significant reduction of adherent cells and a decrease in biofilm biomass and coverage area. The treatment with the protein also reduced the surface hydrophobicity of fungal cells. We show the binding of Helja-FITC to yeast cells distributed as a thin outer layer to the CFW signal, and this interaction was displaced by mannose and Concanavalin A. Conclusion: The results demonstrate the interaction of Helja with the mannoproteins of C. albicans cell wall, the disruption of the cell integrity, the induction of oxidative stress, the inhibition of the morphological transition from yeast to filamentous forms and the fungal cell viability loss. The binding Helja-Candida also provides a possible explanation of the lectin effect on cell adherence, biofilm development and CSH, relevant features related to virulence of the pathogen.Fil: del Rio, Marianela Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: de la Canal, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Pinedo, Marcela Lilian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Mora Montes, Héctor M.. Universidad de Guanajuato; MéxicoFil: Regente, Mariana Clelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentin

Una lectina de girasol con propiedades biológicas de interés aplicado

Las lectinas son proteínas que poseen la capacidad de reconocer azúcares simples, pero muestran mayor afinidad por biomoléculas complejas tales como glicoconjugados de la superficie celular. Esta propiedad les confiere un papel relevante en diversos procesos y está asociada a múltiples aplicaciones, entre las que cabe mencionar su capacidad de funcionar como señuelos para diferentes microorganismos, agentes antimicrobianos, antivirales, participar en la dosificación de fármacos o intermediarios en los mecanismos de respuesta inmunológica, entre otras. Las lectinas están presentes en la mayoría de los seres vivos, pero las plantas son reconocidas como las principales fuentes de este tipo de proteínas. Nuestro grupo de investigación logró aislar e identificar una lectina del apoplasto de semillas de girasol con afinidad por manosa denominada Helja (Hellianthus annus-Jacalin Related Lectin). En el presente trabajo de tesis abordamos la caracterización de las diversas actividades biológicas de Helja sobre diferentes células blanco y la descripción de su modo de acción. Por un lado, a través de ensayos de actividad antifúngica sobre hongos fitopatógenos se observó que Helja inhibió el crecimiento de S. slcerotiorum y no de F. solani., el mecanismo de acción de la lectina involucró la permeabilización de la membrana plasmática e inducción de ROS. Mediante microscopia de fluoresencia observamos que Helja interacciona con las esporas de S. sclerotiorum en las que posteriormente se internaliza, mientras que no se une a la superficie celular de F. solani. Además se observó el efecto antimicótico de Helja sobre tres especies de levaduras patógenas de humanos del género Candida y actividad antibiofilm sobre C. albicans. Las paredes celulares fúngicas poseen glucano, quitina y una variedad de glicoproteínas que presentan diferente grado de exposición hacia la superficie celular, dependiendo de la especie; la pared celular de Candida es rica en oligómeros de manosa (mananos). El modo de acción de Helja sobre C. albicans incluyó la disrupción de la integridad de la pared celular. Mediante microscopía confocal se pudo localizar a la lectina en la cara externa de la pared celular de las levaduras, sugiriendo la interacción con los mananos expuestos hacia el exterior de la célula. En ambas especies fúngicas (C. albicans y S. sclerotiorum) la unión de Helja con las células fue inhibida por la adición de manosa exógena, demostrando que la actividad antifúngica dependería de la afinidad de Helja por estructuras manosiladas presentes en la superficie celular de los hongos. Finalmente, considerando que las lectinas de plantas se conocen como potentes agentes inmunomoduladores, capaces de actuar sobre la respuesta inmune innata o adaptativa y modular la producción de citoquinas, exploramos la capacidad inmunomodulatoria de Helja. Demostramos así la acción de la lectina como agente inmunomodulador, dado que estimuló la liberación de citoquinas en células mononucleares de sangre periférica humana mostrando un perfil correspondiente a la estimulación de la respuesta inmune innata. Los resultados obtenidos en este trabajo permiten considerar a Helja como una herramienta potencial frente a infecciones fúngicas y en el desarrollo de terapias alternativas.Fil: del Rio, Marianela Victoria. Autor; . Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentin

Plant antifungal lectins: Mechanism of action and targets on human pathogenic fungi

Lectins are proteins characterized by their ability to specifically bind different carbohydrate motifs. This feature is associated with their endogenous biological function as well as with multiple applications. Plants are important natural sources of these proteins; however only a reduced group was shown to display antifungal activity. Although it is hypothesized that the target of lectins is the fungal cell wall, the mechanism through which they exert the antifungal action is poorly understood. This topic is relevant to improve therapies against pathogens of importance for human health. In this context, mechanisms pointing to essential attributes for virulence instead of the viability of the pathogen emerge as a promising approach. This review provides the current knowledge on the action mechanism of plant antifungal lectins and their putative use for the development of novel active principles against fungal infections.Fil: del Rio, Marianela Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: de la Canal, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Regente, Mariana Clelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentin

Internalization of a sunflower mannose-binding lectin into phytopathogenic fungal cells induces cytotoxicity

Lectins are carbohydrate-affinity proteins with the ability to recognize and reversibly bind specific glycoconjugates. We have previously isolated a bioactive sunflower mannose-binding lectin belonging to the jacalin-related family called Helja. Despite of the significant number of plant lectins described in the literature, only a small group exhibits antifungal activity and the mechanism by which they kill fungi is still not understood. The aim of this work was to explore Helja activity on plant pathogenic fungi, and provide insights into its mechanism of action. Through cellular and biochemical experimental approaches, here we show that Helja exerts an antifungal effect on Sclerotinia sclerotiorum, a sunflower pathogen. The lectin interacts with the fungal spore surface, permeabilizes its plasma membrane, can be internalized into the cell and induces oxidative stress, finally leading to the cell death. On the other hand, Helja is inactive towards Fusarium solani, a non-pathogen of sunflower, showing the selective action of the lectin. The mechanistic basis for the antifungal activity of an extracellular jacalin lectin is presented, suggesting its initial interaction with fungal cell wall carbohydrates and further internalization. The implication of our findings for plant defense is discussed.Fil: del Rio, Marianela Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata; ArgentinaFil: de la Canal, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata; ArgentinaFil: Pinedo, Marcela Lilian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata; ArgentinaFil: Regente, Mariana Clelia. Universidad Nacional de Mar del Plata; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentin

Chlorogenic acid is a fungicide active against phytopathogenic fungi

Plants synthesize diverse types of secondary metabolites and some of them participate in plant protection against pathogen attack. These compounds are biodegradable and renewable alternatives, which may be envisaged for the control of plant pests and diseases. Chlorogenic acid (CGA) is a phenolic secondary metabolite which accumulates in diverse plant tissues and can be found in several agro-industrial by-products and waste. The aim of this work was to determine whether CGA could control the growth of various plant pathogenic fungi, gaining insight into its mechanism of action. Microscopic analysis showed the complete inhibition of spore germination or reduction of mycelial growth for Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium solani, Verticillium dahliae, Botrytis cinerea and Cercospora sojina. CGA concentrations that did not completely abolish spore germination were able to produce a partial inhibition of mycelial growth. Viability tests and vital dye staining demonstrate that CGA induces fungal cell lysis. Its fungicidal activity involves an early membrane permeabilization of the spores. These results show the antifungal activity of CGA against phytopathogenic fungi relevant in horticulture and agriculture highlighting the potential of CGA-enriched wastes and by-products to be used as biofungicides.Fil: Martinez, Guadalupe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Regente, Mariana Clelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Jacobi, Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: del Rio, Marianela Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Pinedo, Marcela Lilian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: de la Canal, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentin

A mannose-binding lectin from helianthus annuus recognizes GP120 from HIV-1 and promotes phonotype maturation in dendritic cells

Background: Plant lectins have potential use in biomedicine as antimicrobial reagents due to their binding specificity to glycoconjugates. Helja is a mannose-binding lectin isolated from sunflower seeds. Half of the molecular mass of the HIV-1 envelope glycoprotein (gp120) is constituted by high-mannose and complex N-glycans. The aim of this work is to analyze if Helja could recognize gp120 and induce dendritic cell maturation. Methods: Helja was purified from Helianthus annuus seeds on a D-mannose-agarose affinity chromatography. Potential molecular interaction between Helja and recombinant gp120 (M Group, B Subtype, SinoBiological, USA) was evaluated by dot blot and ligand blot approaches using anti-Helja antibodies. Bone marrow dendritic cells (BMDCs) were cultured in complete RPMI medium supplemented with FLT3-L. Cellular activation state was evaluated in Helja-treated BMDCs by measuring membrane proteins (CD86, CD40, MHCII, CD11c, CD80, Clec9a, Ly6G, SIPRα, CD103, SiglecH) by FACS. Results: The interaction of Helja with gp120 was initially detected in dot blot assays by immunodetection of lectin bound to viral protein immobilized on nitrocellulose membranes. This interaction was confirmed in ligand blot assays by detecting a signal whose molecular weight corresponds to gp120 (95 kDa). On the other hand, the presence of Helja (10 µg/ml) in BMDC culture induced an upregulation of MHCII, MHCI, CD80, CD40 and CD86 (n=3, **p<0.01 Helja-treated BMDCs vs controls, *p<0.05 Helja+LPS-treated BMDCs vs LPS control). No changes in Clec9a, Ly6G, SIRPα, CD103 and SiglecH were detected. Conclusions: These results suggest that Helja induces dendritic cell maturation, important to promote immune activation, and recognizes specific glycosidic residues and arrangements on the HIV-1 envelope protein which could have a potential biomedical use as a phyto-neutralizing agent in viral infection.Fil: Radicioni, Melisa Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Chop, Maia. Universidad Nacional de Mar del Plata; ArgentinaFil: del Rio, Marianela Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Sabatte, Juan Atilio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Regente, Mariana Clelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Rodriguez Rodrigues, Christian. Universidad Nacional de Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente; ArgentinaLXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXX Reunión Anual de La Sociedad Argentina de Inmunología; 3er Congreso Franco-Argentino De Inmunología y Reunión Anual 2022 de La Sociedad Argentina De FisiologíaMar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigaciones ClínicasSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina de Fisiologí

Metformin induce autophagy and UPR under intracystic glucose deprivation in in vitro metacestodes and in vivo experimental models of Echinococcus granulosus.

Metformin (Met) is an experimental antiechinococcal drug (Loos etal., 2017; 2020), which inhibits the complex I of the respiratory chainin in vitro Echinococcus larval stage, resulting in an indirect AMPKactivation (by an increased ADP/ATP ratio due to ATP drop) anda subsequent inhibition of TOR signaling with autophagy induction(Loos et al., 2015, 2018). Here, we demonstrated that Met mediatedthe dephosphorylation of Eg-TOR in Ser3122, which trigger the reductionof its activity in metacestodes, responding also to exogenousinsulin and rapamycin. Moreover, Met induced the overexpressionof TFEB, a hub transcription factor that regulates lysosome biogenesis,lipid catabolism and autophagy in metazoa. In concordance withthe mitochondrial depolarization induced by Met, an increase in totalcellular Pi (an activator of PFK1) was detected, with stimulation ofglycogen consumption (glycogenolysis) and, increase of glycolysisand the lactate fraction. Cumulatively, this supports the reductionin the glucose intracystic content demonstrated in vitro, as well asin two different experiments (50 and 250 mg/kg/day of Met) in theechinococcosis murine model. In this line of evidence, the energystarvation induced by Met causes endoplasmic reticulum stress-mediatedunfolded protein response (UPR). In presence of a mannose-specific lectin (Helja-FITC) and using confocal microscopy, wefound that parasite cells expanded their ER volume at least 3-foldunder treatment with Met. Using thapsigargin, tunicamycin andMet-treated parasites, we validated the IRE activity by XBP1 splicingand demonstrated that Met induced the mRNA of Bip/Grp78d.In this context, we described that UPR induced after Met-treatmentcan take place upon glucose deprivation in the parasite, suggestingthat the anthelminthic effects of Met result from sustained autophagymediated by activation of the AMPK-TOR-TFEB signaling pathwayinterdependent with UPR activation, especially through the IRE/XBParm.Fil: Loos, Julia Alexandra. Universidad Nacional de Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente; ArgentinaFil: Negro, Perla. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Ledo, Camila. Universidad Nacional de Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente; ArgentinaFil: Nicolao, María Celeste. Universidad Nacional de Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente; ArgentinaFil: Pavía, Natalia. Universidad Nacional de Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente; ArgentinaFil: Díaz, Malena. Universidad Nacional de Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente; ArgentinaFil: del Rio, Marianela Victoria. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: de la Canal, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Cumino, Andrea Carina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones en Producción, Sanidad y Ambiente; ArgentinaLXVI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); LXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); LIII Reunión Anual de la Asociación Argentina de Farmacología Experimental (AAFE) y XI Reunión Anual de la Asociación Argentina de Nanomedicinas (NANOMED-AR)ArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de InmunologíaAsociación Argentina de Farmacología ExperimentalAsociación Argentina de Nanomedicina

A plant mannose-binding lectin and fluconazole: Key targets combination against Candida albicans

Aims: This study aimed to evaluate the combined effect of a mannose-binding lectin Helja with fluconazole (FLC) on Candida albicans and to get insights about the joint action mechanism. Methods and Results: The fungal growth was assessed following the optical density at 630 nm. Fungal cell morphology and nucleus integrity were analysed by flow cytometry and confocal laser scanning microscopy using Calcofluor White (CFW) and 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining respectively. The basis of Helja + FLC action on cell wall and plasma membrane was analysed using perturbing agents. The Helja + FLC combination exhibited an inhibitory effect of fungal growth about three times greater than the sum of both compounds separately and inhibited fungal morphological plasticity, an important virulence attribute associated with drug resistance. Cells treated with Helja + FLC showed morphological changes, nucleus disintegration and formation of multimera structures, leading to cell collapse. Conclusions: Our findings indicate that the Helja + FLC combination exhibited a potent antifungal activity based on their simultaneous action on different microbial cell targets. Significance and Impact of Study: The combination of a natural protein with conventional drugs might be helpful for the design of effective therapeutic strategies against Candida, contributing to minimize the development of drug resistance and host cell toxicity.Fil: del Rio, Marianela Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Radicioni, Melisa Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Mello, Érica O.. Universidade Estadual Do Norte Fluminense Darcy Ribeiro; BrasilFil: Ribeiro, Suzanna F. F.. Universidade Estadual Do Norte Fluminense Darcy Ribeiro; BrasilFil: Taveira, Gabriel B.. Universidade Estadual Do Norte Fluminense Darcy Ribeiro; BrasilFil: Carvalho, André O.. Universidade Estadual Do Norte Fluminense Darcy Ribeiro; BrasilFil: de la Canal, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Gomes, Valdirene M.. Universidade Estadual Do Norte Fluminense Darcy Ribeiro; BrasilFil: Regente, Mariana Clelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentin

Philology teacher training in Service Learning.

Formación del profesorado de la Facultad de Filología en la metodología Aprendizaje-Servicio para posteriormente desarrollar propuestas didácticas en las que se implemente dicha metodología.Depto. de Estudios Ingleses: Lingüística y LiteraturaFac. de FilologíaFALSEsubmitte