Caracterização química e avaliação das propriedades bioativas de folhas de Psydrax locuples (K. Schum.) Bridson

Mestrado em cooperação com a Universidade de SalamancaA humanidade sempre utilizou plantas medicinais como fonte primária no tratamento de algumas doenças. Em África, as plantas do género Psydrax são popularmente usadas na medicina tradicional para o tratamento de várias doenças e sintomas, incluindo malária, febre, dores de cabeça, edema, reumatismo, diarreia, conjuntivites, micoses e outras doenças inoficiosas. Existem estudos sobre os compostos presentes em algumas das plantas do género mencionado e responsáveis pela sua bioatividade, mas pouco se sabe sobre o perfil químico de Psydrax locuples (K. Schum.) Bridson. Assim, com o objetivo de contribuir para a descoberta de novos constituintes e avaliação de propriedades bioativas dessa espécie, foram realizados estudos com as folhas, muito utilizadas na medicina tradicional no sul de Moçambique. Os extratos foram preparados por maceração das folhas secas e moídas, sequencialmente, com solventes de polaridade progressiva. Os compostos solúveis em acetato de etilo, na maioria dos casos após acetilação, foram purificados por cromatografia em coluna e preparativa em camada fina. A elucidação estrutural destes compostos foi feita através da espetroscopia de RMN e espetrometria de massa (HRMS). Foram isolados derivados acetilados de dois triterpenos (ácido ursólico e 11β- hidroxiursólico) que, posteriormente, foram esterificados com trimetilsilildiazometano de forma a converter o grupo carboxílico em éster metílico. Quer o composto 11β- hidroxiursólico, quer os seus derivados eram desconhecidos. Também foram identificados nove dissacáridos acetilados dos quais cinco são cianogénicos. Previamente, já haviam sido descobertos numa planta de outra espécie, dois dissacáridos cianogénicos relacionados com os isolados. O potencial antioxidante dos extratos/frações foi determinado pela atividade captadora de radicais 2,2-difenil-picril-hidrazilo (DPPH), poder redutor (PR) e inibição da descoloração do β-caroteno. Todos os extratos/frações, apresentaram resultados satisfatórios, principalmente os extratos de metanol e água (EC50DPPH = 0,29 e 0,32 mg/mL, respetivamente; EC50PR = 0,31 e 0,30 mg/mL, respetivamente; EC50β-caroteno = 0,52 e 0,31 mg/mL, respetivamente). O potencial antitumoral foi avaliado in vitro, em quatro linhas celulares tumorais humanos (HeLa, HepG2, MCF7 e NCI-H460), pelo método da sulforodamina B. Todos os extratos e compostos isolados (sobretudo triperpenos e dissacáridos) revelaram atividade inibitória do crescimento celular. O extrato de acetato de etilo acetilado foi o que apresentou maior atividade em todas as linhas celulares testadas (80 μg/mL<GI50<219 μg/mL). A ausência de toxicidade dos extratos foi confirmada e ensaiada em culturas primárias de células de fígado de porco (PLP2). Os resultados dos ensaios de bioatividade vêm realçar o potencial medicinal das folhas de P. locuples tão utilizadas na medicina tradicional em Moçambique.Since ancient times, mankind has used medicinal plants as primary source to treat some diseases. In Africa, plants belonging to the genus of Psydrax are popularly used in the traditional medicine to treat several symptoms and diseases, such as fevers, malaria, edema, headache, rheumatic pains, diarrhea, conjunctivitis, mycoses and other infectious diseases. There are available studies on the compounds present in some of the plants of the mentioned genus and responsible for their bioactivity, but the chemical profile of Psydrax locuples (K. Schum.) Bridson is still unknown. Therefore, in order to contribute to the discovery of new compounds and evaluation of bioactive properties of this species, studies with its leaves, highly used in the traditional medicine in south of Mozambique, were carried out. The extracts were obtained by sequential maceration of the powder of the dried leaves of P. locuples using different solvents and increasing polarity. The soluble compounds in ethyl acetate, most of the cases after their acetylation, were purified by column and thin-layer preparative chromatographies. Their structural elucidation was done by NMR spectroscopy and mass spectrometry (HRMS). We have isolated acetylated derivative of two triterpenes (ursolic and 11β- hydroxyursolic acids) that were subsequently esterified with trimetysilyldiazomethane to convert the carboxylic to an ester group. 11β-Hydroxyursolic acid and its derivatives were unknown compounds. Furthermore, nine diglycoside compounds, which five are cyanogenic compounds, were also identified. Two cyanogenic diglycosides related with the ones isolated in the present work were previously identified in other species. Bioassays were conducted in order to know the biological potential of extracts and isolated compounds. The antioxidant activity of all the extracts/fractions was evaluated through DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) free radical scavenging activity, reducing power (RP) and β-carotene bleaching inhibition. All the extracts/fractions showed satisfactory results, especially the methanolic and water extracts (EC50DPPH = 0.29 and 0.32 mg/mL, respectively; EC50RP = 0.31 and 0.30 mg/mL, respectively; EC50β-carotene = 0.52 and 0.31 mg/mL, respectively). The in vitro antitumor potential of all the extracts and isolated compounds was evaluated in four human tumor cell lines (HeLa, HepG2, MCF7 and NCI-H460) by Sulforhodamine B assay. All the extracts and isolated compounds (especially triterpenes and diglycosides) showed results against tumor cell lines. The acetylated ethyl acetate extract expressed better inhibition of the cell growth in all the lines tested (80 μg/mL<GI50<219 μg/mL). The absence of toxicity of the extracts was confirmed in a primary culture of porcine liver cells (PLP2). The results obtained in the bioassays validate the medicinal potential of P. locuples leaves, commonly used in the traditional medicine of Mozambique

Disacáridos cianogénicos y benzoilados en hojas de Psydrax Locuples

Las plantas del género Psydrax y otras Rubiaceas relacionadas son usadas en la medicina popular africana frente a malaria, fiebre, dolores de cabeza, reumatismos, diarrea, conjuntivitis, micosis y otros cuadros infecciosos. Apenas existe bibliografía fitoquímica sobre este género: únicamente tres compuestos en la especie Psydrax livida [1]. Recientemente hemos comunicado las propiedades antioxidantes y citotóxicas de los extractos obtenidos de hojas de Psydrax locuples, planta arbórea utilizada particularmente en Mozambique para tratar la “doença da lua” en niños y recién nacidos, un síndrome relacionado con la epilepsia caracterizado por fiebre, vómitos, diarrea, dolor de cabeza y cólicos abdominales [2]. A partir del extracto de acetato de etilo de sus hojas se han aislado, mediante sucesivas cromatografías en columna y cromatografías en capa fina preparativas, varios disacáridos acetilados con estructura de (2R)-β-D-apiofuranosil-(1→6)-β-Dglucopiranosa. Estos disacáridos se pueden clasificar en dos familias en función de si el hidroxilo de la posición 1 de la β-D-glucopiranosa se encuentra benzoilado o si se encuentra unido a un residuo de mandelonitrilo formando glicósidos cianogénicos relacionados con la oxyanthina presente en Psydrax livida [1].Estos disacáridos son prácticamente desconocidos en el reino vegetal, tanto los benzoilados como los cianogénicos, siendo la mayoría nuevos productos naturales

Propriedades bioativas de extratos de folhas de Psydrax locuples (rubiaceae)

Introdução: Historicamente, as plantas medicinais têm sido utilizadas como fitoterápicos e fontes importantes para o desenvolvimento de novos fármacos. Na região sul de Moçambique, as folhas de Psydrax locuples são utilizadas para tratar e prevenir a "doença da lua", doença caracterizada por febre, vómitos, diarreia, dor de cabeça, cólicas abdominais, e por produzir sintomas e sinais idênticos aos da epilepsia, em recémnascidos e crianças. Objetivos: No presente trabalho, avaliaram-se as propriedades antioxidante e antitumoral de diferentes extratos obtidos a partir de folhas de P. locuples. Métodos: Os extratos foram preparados por maceração das folhas secas e moídas, sequencialmente, com solventes de polaridade progressiva (hexano, diclorometano, acetato de etilo, metanol e água). O extrato obtido com acetato de etilo foi acetilado para isolar e identificar os seus componentes. O potencial antioxidante foi determinado pela atividade captadora de radicais 2,2-difenil-1-picril-hidrazilo e pelo poder redutor (ensaio do ferricianeto/azul da Prússia). O potencial antitumoral foi avaliado, in vitro, em 4 linhas celulares tumorais humanas (HeLa-cervical, HepG2-hepatocelular, MCF7-mama e NCIH460- pulmão), pelo ensaio da sulforodamina B. A ausência de toxicidade dos extratos foi confirmada em culturas de células primárias de fígado de porco (PLP2). Resultados: De uma forma geral, os extratos obtidos com solventes de maior polaridade (metanol e água) revelaram maior atividade antioxidante (EC50 DPPH=0.29 e 0.32 mg/mL, respetivamente; EC50 PR=0.31 e 0.30 mg/mL, respetivamente), enquanto que os extratos obtidos com hexano, diclorometano e acetato de etilo (normal e acetilado) apresentaram menor potencial antioxidante. Relativamente aos ensaios de citotoxicidade em linhas celulares tumorais, todos os extratos revelaram atividade inibitória do seu crescimento. O extrato de acetato de etilo acetilado foi o que apresentou maior atividade em todas as linhas celulares testadas (80<GI50<219 μg/mL). Nenhum dos extratos revelou toxicidade nas PLP2 (células não tumorais). Conclusões: Estes resultados vêm realçar o potencial medicinal das folhas de P. locuples tão utilizadas na medicina tradicional em Moçambique. No entanto, este estudo está a ter continuidade no sentido de identificar os compostos presentes no extrato de acetato de etilo acetilado e responsáveis pela sua bioatividade