Kedi Oositlerinin In Vitro Olgunlaştırılması ve Kumulus Hücrelerinin Apoptoz Oranları Üzerine, Ovaryum Taşıma ve Saklama Sıcaklığının Etkisi

Çalışmanın amacı, ovaryumların iki farklı sıcaklıkta (37°C ve 4°C) taşınma ve soğukta 24 saat bekletilmenin kumulus hücrelerindeki apoptoza ve kedi oositlerinin in vitro olgunlaşma oranları (IVM) üzerine etkilerini incelemektir. Kısırlaştırılmış 15 kediden ovaryumlar alındı ve yarısı 37°C, diğer yarısı da 4°C’de olmak üzere, fosfat tampon tuzlu solüsyonunda (PBS) laboratuara taşındı. Soğukta bekletmenin etkilerini belirlemek içinse, 4°C ‘de taşınan ovaryumların yarısı, aynı sıcaklıkta olmak üzere 24 saat bekletildi. Seçilen kumulus oosit kompleksleri (COCs), %100’e yakın nemin sağlandığı %5 CO2’li inkübatörde mineral yağ altındaki 500 μL modifiye Sentetik Ovidukt Medyumu (mSOF) içeren dört gözlü petrilerde olmak üzere 38°C’de 48 saat süreyle olgunlaştırıldı. Apoptozun etkileri, hem iki farklı taşıma grubunda, hem de soğukta 24 saat bekletilen grupta olmak üzere in vitro olgunlaşmanın hemen öncesinde kumulus hücrelerinde test edildi. Apoptosis derecesi, deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) test ile ölçüldü. Oositlerin in vitro olgunlaşma düzeyleri Hoechst (33342) boyama ile belirlendi. Apoptotik hücre oranları, 37°C ve 4°C taşıma gruplarında sırasıyla; %19.40 ve %21.55 olarak belirlendi (P>0.001). Aynı değer, 24 saatlik soğukta bekletilen grupta ise daha yoğun olarak (%34.80) görüldü (P<0.001). IVM bulguları da sırasıyla 37°C ve 4 °C taşıma gruplarında %49.77, %44.55 (P>0.05) iken, 24 saat soğukta bekletme grubunda ise %18.90 olarak bulundu (P<0.05). Çalışma sonuçları, (I) kedi ovaryumlarının sıcak veya soğukta taşıma sırasında kumulus hücrelerinin, apoptoza kısmen maruz kaldıklarını, (II) ovaryumların 4°C’de 24 saat bekletilmesinin kumulus hücrelerinin apoptozunu önemli derecede artırdığını ve (III) 4°C’de 24 saat bekletmenin, oositlerin IVM oranlarını olumsuz etkilediğini göstermiştir

Effects of Ovary Transport and Storage Temperature on In Vitro Maturation and Cumulus Cell Apoptosis Rates in Cat Oocytes

Çalışmanın amacı, ovaryumların iki farklı sıcaklıkta (37°C ve 4°C) taşınma ve soğukta 24 saat bekletilmenin kumulus hücrelerindeki apoptoza ve kedi oositlerinin in vitro olgunlaşma oranları (IVM) üzerine etkilerini incelemektir. Kısırlaştırılmış 15 kediden ovaryumlar alındı ve yarısı 37°C, diğer yarısı da 4°C’de olmak üzere, fosfat tampon tuzlu solüsyonunda (PBS) laboratuara taşındı. Soğukta bekletmenin etkilerini belirlemek içinse, 4°C ‘de taşınan ovaryumların yarısı, aynı sıcaklıkta olmak üzere 24 saat bekletildi. Seçilen kumulus oosit kompleksleri (COCs), %100’e yakın nemin sağlandığı %5 CO2’li inkübatörde mineral yağ altındaki 500 μL modifiye Sentetik Ovidukt Medyumu (mSOF) içeren dört gözlü petrilerde olmak üzere 38°C’de 48 saat süreyle olgunlaştırıldı. Apoptozun etkileri, hem iki farklı taşıma grubunda, hem de soğukta 24 saat bekletilen grupta olmak üzere in vitro olgunlaşmanın hemen öncesinde kumulus hücrelerinde test edildi. Apoptosis derecesi, deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) test ile ölçüldü. Oositlerin in vitro olgunlaşma düzeyleri Hoechst (33342) boyama ile belirlendi. Apoptotik hücre oranları, 37°C ve 4°C taşıma gruplarında sırasıyla; %19.40 ve %21.55 olarak belirlendi (P>0.001). Aynı değer, 24 saatlik soğukta bekletilen grupta ise daha yoğun olarak (%34.80) görüldü (P<0.001). IVM bulguları da sırasıyla 37°C ve 4 °C taşıma gruplarında %49.77, %44.55 (P>0.05) iken, 24 saat soğukta bekletme grubunda ise %18.90 olarak bulundu (P<0.05). Çalışma sonuçları, (I) kedi ovaryumlarının sıcak veya soğukta taşıma sırasında kumulus hücrelerinin, apoptoza kısmen maruz kaldıklarını, (II) ovaryumların 4°C’de 24 saat bekletilmesinin kumulus hücrelerinin apoptozunu önemli derecede artırdığını ve (III) 4°C’de 24 saat bekletmenin, oositlerin IVM oranlarını olumsuz etkilediğini göstermiştir