Estudio preliminar de la interacción entre la proteína del síndrome de Werner, presente en la fracción citoplasmática de células HeLa, y la proteína ribosomal humana S3 recombinante mediante el ensayo in vitro de pull-down

Publicación a texto completo no autorizada por el autorEl gen WRN codifica a la proteína del síndrome de Werner (WRN), una proteína multifuncional con actividad helicasa y exonucleasa. Datos previos indican que WRN está asociada a la maquinaria traduccional y relacionada con las vías metabólicas que regulan la síntesis de macromoléculas, la producción de energía y el balance de óxidoreducción (redox) implicados en la proliferación celular. La proteína ribosomal eucariota S3 (eRPS3) es un elemento importante de la subunidad ribosomal menor 40S que promueve el reconocimiento del codón de inicio y la interacción con el ácido ribonucleico mensajero (ARNm) para el desarrollo de la síntesis proteica. La asociación entre la proteína ribosomal humana S3 (hRPS3) y WRN ha sido descrita previamente mediante ensayos de co-inmunoprecipitación, inmunoprecipitación y pulldown usando extractos totales de células embrionarias de riñón. Se identifica la interacción entre WRN, presente en la fracción citoplasmática de células HeLa, y la hRPS3. Mediante el uso de la tecnología de ADN recombinante se sintetizó en E. coli la proteína hRPS3 fusionada a una cola de seis histidinas (hRPS3-6xHis). Esta proteína de fusión fue inmovilizada por cromatografía de afinidad en una resina de agarosa con iones níquel, y se usó conjuntamente con la fracción citoplasmática de células HeLa que contenía a WRN para llevar a cabo el ensayo de pull-down. El análisis por Western blot del pull-down evidenció la presencia de WRN en la resina que contenía a la proteína de fusión hRPS3-6xHis. Este resultado demuestra la interacción entre WRN presente en el citoplasma y la hRPS3 que es un elemento importante de la maquinaria de traducción.Tesi

Measuring Golgi\u27s redox potential in CHO cells and its response to hypoxic conditions

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