Propagation of orchid Gongora quinquenervis by in vitro germination

O objetivo deste trabalho foi avaliar a germinação e a organogênese in vitro em Gongora quinquenervis em dois meios nutritivos, Knudson "C" e Murashige & Skoog, com três concentrações de BAP (0,0, 0,5 e 1,0 mg L-1). Os protocormos cultivados no meio Knudson "C" necrosaram. A maioria dos embriões cultivados em meio Murashige & Skoog tendeu a diferenciar-se em calos. Estes calos apresentaram alto potencial morfogenético, regenerando grande número de plantas via organogênese indireta, sobretudo no material proveniente do tratamento desprovido de BAP. Foram formadas 41 plantas pela rota normal de germinação, contrastando com 715 plantas regeneradas via organogênese indireta.The aim of this experiment was to study in vitro germination and organogenesis of Gongora quinquenervis in two culture media (Knudson "C" and Murashige & Skoog) on three concentrations of BAP (0.0, 0.5 and 1.0 mg L-1). The protocorms cultured on Knudson "C" medium died. The majority of the embryos cultured on the Murashige & Skoog medium formed calli. The calli presented a high morfogenetic potential, regenerating great number of plant through indirect organogenesis, and the treatment without BAP presented the highest regeneration frequency. Few plants were germinated through the normal route, performing a total of 41 plants, which contrasts with the 715 plants regenerated through indirect organogenesis. The aim of this experiment was to study in vitro germination and organogenesis of Gongora quinquenervis in two culture media (Knudson "C" and Murashige & Skoog) on three concentrations of BAP (0.0, 0.5 and 1.0 mg L-1). The protocorms cultured on Knudson "C" medium died. The majority of the embryos cultured on the Murashige & Skoog medium formed calli. The calli presented a high morfogenetic potential, regenerating great number of plant through indirect organogenesis, and the treatment without BAP presented the highest regeneration frequency. Few plants were germinated through the normal route, performing a total of 41 plants, which contrasts with the 715 plants regenerated through indirect organogenesis

Enzymatic activity in sugar cane varieties cultivated in vitro under nitrogen levels

O nitrogênio é considerado o elemento mineral mais abundante nas plantas, sendo componente essencial de biomoléculas e inúmeras enzimas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência no processo de assimilação do nitrogênio e encontrar parâmetros indicativos do potencial de fixação biológica em variedades de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum) cultivadas in vitro. Foram utilizadas as variedades de cana-de-açúcar RB 842021, RB 83102, RB 75126, RB 882980 e Co 997, além da Brachiaria arrecta (testemunha), cultivadas in vitro em diferentes níveis de nitrogênio [M1 (9,83 mM), M2 (2,46 mM), M3 (0,49 mM), M4 (0,0 mM)]. Todas as variedades e a cultura testemunha (Brachiaria arrecta) apresentaram atividade da nitrato redutase (NR) constitutiva e também da glutamina sintetase (GS), mesmo na ausência de amônio e nitrato no meio de cultura. A variedade RB 842021 apresentou a maior atividade da nitrato redutase e o maior conteúdo de clorofilas a e b, e a variedade RB 882980 a maior atividade da glutamina sintetase nas mesmas condições de cultivo, o que pode representar maior potencial de assimilação do nitrogênio.Nitrogen is considered the most abundant mineral element in the plants and an essential component to biomolecules and several enzymes. The objective of this work was to estimate nitrogen assimilation efficiency process and to identify biological fixation potential parameters on sugar cane varieties cultivated in vitro. The sugar cane varieties used were RB 842021, RB 83102, RB 75126, RB 882980, CO 997, besides Brachiaria arrecta (witness), cultivated in vitro in different nitrogen levels [M1 (9.83 mM), M2 (2.46 mM), M3 (0.49 mM), M4 (0.0 mM)]. All the varieties and plant witness (Brachiaria arrecta) exhibited redutase nitrate activity and glutamina sintetase, even in the ammonium and nitrate absence culture media. The RB 842021 variety showed the highest activity of nitrate reductase and the higher chlorophyll a and b contents, whereas RB 882980 variety showed the highest glutamine sintetase activity when cultivated without nitrogen, representing a higher potential assimilation of nitrogen

Germinação in vitro de Waltheria ferruginea A. St.-Hil.

Waltheria ferruginea é uma sterculiaceae que ocorre no Nordeste brasileiro. Essa espécie apresenta potencial medicinal devido ao seu poder anti-inflamatório. Durante o processo de germinação das sementes dessa espécie, realizada em placas de petri contendo papel úmido ou em bandejas contendo areia lavada, verificou-se um baixo índice de germinação e, além disso, ocorreu necrose das plântulas germinadas. Esse trabalho foi desenvolvido com a finalidade viabilizar a obtenção de plantas dessa espécie utilizando a germinação e propagação in vitro. As sementes de W. ferruginea foram submetidas a um processo de desinfestação, constituído da imersão em solução de álcool 70% (v/v) por 1-3 minutos, em seguida em solução de hipoclorito de sódio 2,5% (v/v) por 15 minutos e finalmente enxaguadas 3 vezes em água destilada estéril. Após o processo de desinfestação, em câmara de fluxo laminar, as sementes foram transferidas para frascos contendo uma solução de cefatoxima sódica 250 mg.L-1, onde foram mantidas no escuro, em sala de crescimento, até a germinação das sementes. Após a germinação, as sementes foram transferidas, sem enxágüe, para tubos contendo meio de cultivo constituído pelos sais e vitaminas do MS, acrescido de 30g.L-1 de sacarose e desprovido de reguladores de crescimento. As sementes apresentaram um considerável índice de germinação (80%), no entanto muito irregularmente. As plantas apresentaram bom desenvolvimento da parte aérea e sistema radicular após 60 dias de cultivo. Observou-se após 15 dias da inoculação, o desenvolvimento de necrose do caule em 5% das plantas cultivadas, mesmo sintoma observado durante os métodos convencionais de germinação descritos anteriormente. Após 60 dias de cultivo as plantas, aparentemente, sadias foram aclimatizadas. Verificou-se após 7 dias do plantio o aparecimento do mesmo sintoma, o que inviabilizou a obtenção das plantas. Experimentos utilizando diferentes tipos e concentrações de antimicrobianos estão sendo conduzidos com o objetivo de obtenção de plantas sadias de W. ferruginea

Utilização do PPM (Plant Preservative Mixture) para controle da contaminação visando o estabelecimento <i>in</i> <i>vitro</i> de explantes de Eucalyptus citriodora Hook

O eucalipto tem sido extensivamente utilizado em plantios florestais devido ao seu rápido crescimento, alta produtividade, ampla variação de espécies, grande capacidade de adaptação e variadas aplicações industriais. A micropropagação é uma das técnicas que oferece excelentes possibilidades para propagação comercial dessa espécie. No entanto, elevados índices de contaminação do meio de cultivo dificultam a sua aplicação. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência e selecionar a concentração mais adequada do antimicrobiano PPM (Plant Preservative Mixture) produzido pela Plant cell Technology, Inc, para o controle da contaminação durante o estabelecimento in vitro de explantes de Eucalyptus citriodora. Utilizou-se como explante, gemas laterais de plantas  jovens coletados no campo. Os explantes foram inicialmente lavados com detergente neutro comercial e em seguida, em ambiente estéril, foram submetidos ao processo de desinfestação, constituído da imersão em álcool 70% (v/v) por 1-3 minutos, seguida da imersão em hipoclorito de sódio 2,5% (v/v) por 10 minutos e finalmente enxaguados 3 vezes em água destilada estéril. Os explantes foram seccionados em segmentos de aproximadamente 2 cm, contendo pelo menos uma gema lateral. Parte dos explantes foi mantida em solução de PPM (Plant Preservative Mixture) a 5% (v/v) e outra em água destilada estéril por 4 horas. Após esse período, os explantes foram transferidos, sem enxágüe, para tubos contendo meio de cultivo constituído pelos sais e vitaminas do MS, acrescido de 30g.L-1 e diferentes doses de PPM (T0= sem PPM; T1= MS + 0,5% de PPM; T2= MS + 0,2% de PPM; T3= MS + 0,1% de PPM). Nos tratamentos T1 e T2 não houve contaminação tanto nos explantes pré-tratados apenas com água como naqueles pré-tratados com solução de PPM. No tratamento T3 observou-se que houve 40% de contaminação nos explantes pré-tratados apenas com água, enquanto naqueles pré-tratados com solução de PPM não houve contaminação. No tratamento T0, sem adição de PPM, verificou-se que houve 60% de contaminação nos explantes prétratados com água, enquanto naqueles pré-tratados com solução de PPM houve apenas 20% de contaminação. Verificou-se pelos resultados obtidos que, embora o pré-tratamento com solução de PPM tenha sido eficiente no controle da contaminação, observou-se um aumento da oxidação do meio de cultivo em relação aqueles explantes pré- tratados apenas com água. Outros estudos estão sendo executados para avaliar a fitotoxicidade do PPM para o eucalipto e outras culturas.

Plantas de cana-de-açúcar cultivadas in vitro com antibióticos Sugar cane plants cultivated in vitro with antibiotics

A contaminação por microrganismos é conhecida como um dos mais sérios problemas da cultura de tecidos de plantas, especialmente, em espécies tropicais. Com o objetivo de eliminar bactérias endofíticas, propágulos das cultivares de cana-de-açúcar Co 997, SP 70-1143 e ápices caulinares isolados de plantas, provenientes de semente botânica biparental (RB 818004 x SP 71-6949), foram cultivados in vitro, em meios de cultivo com antibióticos. No primeiro experimento, propágulos das cultivares Co 997 e SP 70-1143 foram cultivados em meio de cultivo contendo 200 e 300 mg.L-1 de amoxicilina e cefatoxima sódica durante 30 dias. Num segundo experimento, utilizou-se apenas a amoxicilina em concentrações mais elevadas ( 300, 600 e 1000 mg.L-1), com as mesmas plantas utilizadas no primeiro experimento, permanecendo em cultivo por mais 30 dias. No terceiro experimento foram utilizados ápices caulinares isolados de plantas provenientes de semente botânica biparental (RB 818004 x SP 71-6949), cultivados em meio de cultivo contendo 1000 mg.L-1 de amoxicilina, por um período de 120 dias. Após estes períodos de cultivo, testes de infecção e observações histológicas revelaram que o isolamento do ápice caulinar associado ao uso de antibiótico no meio de cultivo não foi suficiente para eliminar as bactérias endofíticas.Contamination by microrganism is known as one of the most serious problems in plant tissue cultures, especially, of tropical species. Most of the time, this contamination is derived from endophytic bacteria. With the objective of eliminating the endophytic bacteria Acetobacter diazotrophicus and Herbaspirillum spp., propagules of the cultivars Co 997, SP 70-1143 and shoot tips of sugarcane plants, from botanical biparental seed (RB 818004 x SP 71-6949) were cultivated in vitro in culture media with antibiotic. In the first experiment, propagules of the cultivars Co 997 and SP 70-1143 were cultivated in culture media with 200 and 300 mg.L-1 of amoxicilin and sodic cephatoxin for 30 days. In the second experiment, plants from the first one were transferred to culture media containing amoxicilin in concentrations of 300, 600 and 1000 mg.L-1 for more 30 days. In the third experiment, shoot tips were cultivated in culture media with 1000 mg.L-1 of amoxicilin during 120 days. After these cultivation periods, infection tests and histological observations revealed that bacteria were not eliminated from sugarcane tissues

Caracterização molecular de cultivares de cana-de-açúcar utilizando marcadores ISSR Molecular characterization of the sugarcane cultivars obtained by issr markers

A diversidade genética de catorze cultivares de cana-de-açúcar (Saccharum oficinarum) foi acessada por meio de marcadores moleculares ISSR. Objetivou-se caracterizar molecularmente as cultivares estudadas. Foram utilizados trinta e sete primers de ISSR, dos quais, oito foram eficientes na amplificação do DNA das amostras analisadas, sendo sete primers suficientes para distinguir todas as cultivares de cana-de-açúcar envolvidas nas análises. A faixa de amplicons variou de 300 a 2000 pb. As cultivares RB 92579 e RB 863129 apresentaram maiores coeficientes de similaridade (77%) enquanto as cultivares RB 961 e RB 931611 formaram o grupo com menor similaridade (22%). Os resultados indicam que os marcadores ISSR foram úteis na análise da diversidade genética e geração de padrões genéticos (fingerprint), em germoplasma de cana-de-açúcar. Marcadores ISSR cultivar-específico foram obtidos com o primer UBC 817 para as 14 cultivares testadas. Num próximo trabalho, mais primers ISSR serão utilizados para buscar mais polimorfismos dessas e de outras cultivares de cana-de-açúcar.<br>Genetic diversity of fourteen sugarcane cultivars was accessed by ISSR molecular markers. With the aim to characterizing and validating the efficiency of these markers in the fingerprint of studied cultivars, thirty seven ISSR primers were used, from which, eight were efficient for the DNA amplification. Seven primers were efficient to discriminate the fourteen studied sugarcane cultivars. The amplicons varied from 300 to 2000 bp. The cultivars RB 92579 and RB 863129 presented higher similarity coefficient (77%) while the cultivars RB 961 and RB 93611 formed the group with lower similarity (22%). The results suggested that ISSR markers were useful in the analysis of the genetic diversity and in the fingerprint in sugarcane germosplasm. In the next step more ISSR primers will be used in order to obtain more polymorphism from these varieties and to analyze more sugarcane cultivars