Биологически активное покрытие для тканеинженерной конструкции кровеносных сосудов малого диаметра

Objective: to develop a method for modifying composite small-diameter porous tubular biopolymer scaffolds based on bacterial copolymer poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) and gelatin modified with a double-layered bioactive coating based on heparin (Hp) and platelet lysate (PL) that promote adhesion and proliferation of cell cultures.Materials and methods. Composite porous tubular biopolymer scaffolds with 4 mm internal diameter were made by electrospinning from a 1 : 2 (by volume) mixture of a 10% solution of poly(3-hydroxybutyrateco- 3-hydroxyvalerate) copolymer, commonly known as PHBV, and a 10% solution of gelatin, respectively, in hexafluoro-2-propanol. The structure of the scaffolds was stabilized with glutaraldehyde vapor. The scaffolds were modified with a bioactive Hp + PL-based coating. The surface morphology of the samples was analyzed using scanning electron microscopy. Biological safety of the modified scaffolds in vitro (hemolysis, cytotoxicity) was evaluated based on the GOST ISO 10993 standard. Interaction with cultures of human endothelial cell line (EA. hy926) and human adipose-derived mesenchymal stem cells (hADMSCs) was studied using vital dyes.Results. We developed a method for modifying small-diameter composite porous tubular biopolymer scaffolds obtained by electrospinning from a mixture of PHBV and gelatin modified with double-layered bioactive coating based on covalently immobilized Hp and human PL. The modified scaffold was shown to have no cytotoxicity and hemolytic activity in vitro. It was also demonstrated that the developed coating promotes hADMSC adhesion and proliferation on the external surface and EA.hy926 on the internal surface of the composite porous tubular biopolymer scaffolds in vitro.Conclusion. The developed coating can be used for the formation of in vivo tissueengineered small-diameter vascular grafts.Цель работы: разработка способа модифицирования композитных пористых трубчатых биополимерных каркасов малого диаметра на основе бактериального сополимера поли(3-гидроксибутирата-со-3-гидроксивалерата) и желатина двухслойным биологически-активным покрытием на основе гепарина и лизата тромбоцитов, способствующим адгезии и пролиферации клеточных культур.Материалы и методы. Композитные пористые трубчатые биополимерные каркасы с внутренним диаметром 4 мм изготавливали методом электроспиннинга из смеси 1 : 2 (по объему) 10% раствора сополимера поли(3-гидроксибутирата-со-3-гидроксивалерата) и 10% раствора желатина соответственно в гексафтор-2-пропаноле. Структуру каркасов стабилизировали парами глутарового альдегида. Каркасы модифицировали биологически-активным покрытием на основе гепарина и лизата тромбоцитов человека. Морфологию поверхности образцов анализировали с применением сканирующей электронной микроскопии. Биологическую безопасность модифицированных каркасов in vitro (гемолиз, цитотоксичность) оценивали согласно ГОСТ ISO 10993. Взаимодействие с культурами эндотелиальных клеток человека линии EA.hy926 и мезенхимальных стромальных клеток из жировой ткани человека исследовали с применением витальных красителей.Результаты. Разработан способ модифицирования композитных пористых трубчатых биополимерных каркасов малого диаметра, полученных методом электроспиннинга из смеси поли(3-гидроксибутирата-со- 3-гидроксивалерата) и желатина, двухслойным биологически-активным покрытием на основе ковалентно иммобилизованного гепарина и лизата тромбоцитов человека. In vitro доказано отсутствие цитотоксичности и гемолитической активности образцов модифицированных каркасов. Показано, что разработанное покрытие способствует адгезии и пролиферации мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека на внешней поверхности и эндотелиальных клеток пупочной вены человека линии EA.hy926 на внутренней поверхности композитных пористых трубчатых биополимерных каркасов в условиях in vitro.Заключение. Полученные результаты позволяют прийти к заключению о возможности использования разработанного покрытия для формирования in vivo тканеинженерной конструкции кровеносных сосудов малого диаметра

БИОСТАБИЛЬНОСТЬ И ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ НА ОСНОВЕ СШИТЫХ БИОПОЛИМЕРОВ

The increase in biostability of medical products/materials based on proteins and their derivatives, including resorbable 2Dand 3D-matrices for tissue engineering and regenerative medicine is usually achieved by means of cross-linking with glutaraldehyde (GA). One of the serious fl aws of the products stabilized with GA is their cytotoxicity caused by trace amounts of GA which are diffi cult to remove from cross-linked biopolymer matrices, thus the search for chemical and physical methods of cross-linking of such medical products remains essential. Aim: to compare the infl uence of various cross-linking methods on the cytotoxicity of collagen and gelatin samples.Materials and methods. Samples – fi lms with diameter of 30 mm and thickness of ~ 150 μm, – were obtained by irrigation method usingthesolution of scleral collagen (SC) of Type farm animals or with gelatin with the subsequent drying at 37º С until constant weight on air. Samples of porous matrices in shape of tubes of gelatin and polyoxybutirate-co-valerate with the weight ratio 2:1 were obtained by electrospinning. The cytotoxicity of structurally stabilized samples was studied by fi ve methods: 1) dehydrothermal cross-linking with the residual pressure of 10–20 mm Hg and temperature of 120 °С; 2) injection of GA immediately into the biopolymer solution; 3) with GA vapors; 4) with GA vapors with the subsequent incubation in phosphate buffered saline (PBS) with рН = 7.4; 37 °С; 24 h; 5) with GA vapors with the subsequent incubation in 0.1% lysine solution with рН = 7.4; 37 °С; 24 hour in DMEM medium. Cytotoxicity of samples was evaluated according to the requirements of interstate standard GOST ISO 10993-5-2011 on the culture of mice fi broblasts of NIH 3Т3 line using extracts from samples (37 °С; 24 h) and by means of direct contact of samples with these cells.Results. Matrices treated hydrothermally demonstrated complete absence of cytotoxicity. Samples, fi xated in GA solution in the range of concentrations from 0.01 to 1.0% demonstrated a high level of cytotoxicity which does not answer the requirements of GOST ISO 10993-5-2011. Fixation of collagen and gelatin matrices with GA vapors during 48 h infl uences their cytotoxicity minimally but with the treatment time increased to 72 hours cytotoxicity escalates to severe levels. With the subsequent incubation of cytotoxic gelatin samples in PBS the decrease in cytotoxicity to the levels corresponding with the requirements of GOST ISO 10993-5-2011 was observed. For the analogous decrease in cytotoxicity of collagen fi lms treated with GA vapors during more than 48 h an additional incubation in lysine solution was needed.Conclusion. Dehydrothermal cross-linking method is optimal from the view point of absence of cytotoxicity of stabilized biopolymers, however its area of application is limited by the risk of infl uence of high temperatures on the medico-technical properties of the products. Fixation in GA vapors is a universally applicable and a rather simple method of treatment of medical products or biopolymer-based coatings, but it does not resolve the issue of their cytotoxicity at treatment times exceeding 48 h. Rinsing in buffer solution in case of gelatin or treatment with the amino acid (lysine) solution in case of collagen allow to decrease the level of cytotoxicity of products stabilized with GA vapors to the values corresponding with the requirements of GOST ISO 10993-5-2011.Увеличение биостабильности медицинских изделий/материалов на основе белков и их производных, в том числе резорбируемых 2Dи 3D-матриксов для тканевой инженерии и регенеративной медицины, достигается в основном сшивкой глутаровым альдегидом (ГА). Одним из серьезных недостатков стабилизированных ГА изделий является их цитотоксичность, обусловленная следовыми количествами ГА, трудно удаляемых из сшитых биополимерных матриксов, поэтому поиск химических и физических способов сшивки таких медицинских изделий остается актуальной задачей.Цель: сравнить влияние различных методов сшивки на цитотоксичность образцов из коллагена и желатина.Материалы и методы. Образцы в виде пленок диаметром 30 мм и толщиной ~150 мкм получали методом полива из раствора склерального коллагена (СК) сельскохозяйственных животных I типа или желатина с последующей сушкой при 37 °С до постоянного веса на воздухе. Образцы пористых матриксов в виде трубок из смеси желатина и полиоксибутирата-ко-валерата в соотношении 2 : 1 по весу получали методом электроспиннинга. Исследовали цитотоксичность образцов, структурно стабилизированных пятью способами: 1) дегидротермосшивкой при остаточном давлении 10–20 мм рт. ст. и температуре 120 °С; 2) введением ГА непосредственно в раствор биополимера; 3) парами ГА; 4) парами ГА с последующей инкубацией в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) при рН = 7,4; 37 °С; 24 ч; 5) парами ГА с последующей инкубацией в 0,1% растворе лизина при рН = 7,4; 37 °C; 24 ч или в среде DMEM. Цитотоксичность образцов оценивали согласно требованиям межгосударственного стандарта ГОСТ ISO 10993-5-2011 на культуре фибробластов мыши линии NIH 3Т3 с использованием экстрактов из образцов (37 °С; 24 ч) и методом прямого контакта образцов с этими клетками.Результаты. Дегидротермообработанные матриксы показали полное отсутствие цитотоксичности. Образцы, фиксированные в растворе ГА в интервале концентраций от 0,01 до 1,0%, проявляли высокий уровень цитотоксичности, не удовлетворяющий требованиям ГОСТ ISO 10993-5-2011. Фиксация коллагеновых и желатиновых матриксов парами ГА в течение 48 ч оказывает минимальное влияние на их цитотоксичность, но с увеличением времени обработки до 72 часов цитотоксичность возрастает до уровня «резкая». При последующей инкубации цитотоксичных образцов из желатина в ФСБ наблюдали снижение цитотоксичности до уровня, удовлетворяющего требованиям ГОСТ ISO 10993-5-2011. Для аналогичного снижения цитотоксичности пленок из коллагена, обработанных парами ГА в течение более 48 ч, требовалась дополнительная инкубация в растворе лизина.Заключение. Метод дегидротермосшивки является оптимальным с точки зрения отсутствия цитотоксичности стабилизированных биополимеров, однако область его применения ограничена риском воздействия высоких температур на медико-технические свойства изделий. Фиксация в парах ГА является универсальным и достаточно простым способом обработки медицинских изделий или покрытий на основе биополимеров, но не решает вопрос их цитотоксичности при временах обработки, превышающих 48 ч. Снизить степень цитотоксичности изделий, стабилизированных парами ГА, до значений, удовлетворяющих требованиям ГОСТ ISO 10993-5-2011, позволяет отмывка в буферном растворе в случае желатина или обработка раствором аминокислоты (лизина) в случае коллагена

Способ уменьшения хирургической пористости протезов кровеносных сосудов малого диаметра

High surgical porosity (SP) is one of the causes of significant blood loss, as well as hematoma formation. So, reducing the SP of small-diameter vascular grafts (VGs) is a crucial task.The objective of this work was to develop a technology for the formation of polycaprolactone (PCL)-based small-diameter VGs with a bioactive coating with reduced SP.Materials and methods. Porous VGs with an inner diameter of 3 mm were fabricated by electrospinning from 5% PCL solution with addition of 5–30% gelatin (PCL/G) on an NANON-01A unit (MECC CO, Japan). Bioactive coating was applied by sequential incubation of VGs in solutions of bovine serum albumin, heparin and platelet lysate with fixation in a glutaric aldehyde solution. The surface structure and mechanical properties of the samples were investigated. Functional properties of the bioactive VGs were evaluated in relation to their interaction with cell cultures in vitro.Results. It was found that introduction of gelatin into the working solution reduces SP from 30.4 ± 1.5 mL/(cm2 ·min) to 2.8 ± 0.5 ml/(cm2 ·min). It was shown that at a PCL/gelatin ratio of 9 : 1, the outer and inner sides of the bioactive VGs samples are characterized by surface uniformity (no defects), mechanical properties close to blood vessels of the same diameter (Young’s modulus 6.7 ± 2.1 MPa, tensile strength 26.7 ± 4.9 N and elongation to break 423 ± 80%) and ability to support adhesion and proliferation of human umbilical vein endothelial cell line, EA.hy926.Conclusion. Introduction of 10% gelatin content (by the polymer weight) into PCL solution reduces the SP of small-diameter VGs, leads to uniformity in their inner and outer surface, improvement in their mechanical properties without reducing their ability to support adhesion and proliferation of vascular endothelial cells.Высокая хирургическая пористость (ХП) является одной из причин значительной кровопотери, а также образования гематом, поэтому снижение ХП протезов кровеносных сосудов является актуальной задачей.Целью данной работы была разработка технологии формирования протезов кровеносных сосудов (ПКС) малого диаметра на основе поликапролактона (ПКЛ) с биоактивным покрытием со сниженной ХП.Материалы и методы. Пористые ПКС с внутренним диаметром 3 мм изготавливали методом электроспиннинга из 5% раствора ПКЛ с добавлением 5–30% желатина (ПКЛ-Ж) на установке NANON-01A («MECC CO», Япония). Биоактивное покрытие наносили последовательной инкубацией ПКС в растворах бычьего сывороточного альбумина, гепарина и лизата тромбоцитов с фиксацией в растворе глутаровом альдегида. Исследовали структуру поверхности, механические свойства образцов. Функциональные свойства биоактивных ПКС оценивали относительно их взаимодействия с клеточными культурами in vitro.Результаты. Установлено, что введение в рабочий раствор желатина приводит к снижению ХП с 30,4 ± 1,5 мл/(см2 ·мин) до 2,8 ± 0,5 мл/(см2 ·мин). Показано, что при соотношении ПКЛ : желатин, равном 9 : 1, для внешней и внутренней стороны образцов биоактивных ПКС характерны однородность (отсутствие дефектов) поверхности, близкие к кровеносным сосудам того же диаметра механические свойства (модуль Юнга 6,7 ± 2,1 МПа, усилие до разрыва 26,7 ± 4,9 Н и удлинение до разрыва 423 ± 80%) и способность поддерживать адгезию и пролиферацию эндотелиальных клеток человека линии EA.hy926.Заключение. Введение в раствор ПКЛ 10% концентрации желатина (по весу полимера) приводит к снижению хирургической пористости ПКС малого диаметра, однородности его внутренней и внешней поверхности, улучшению его механических свойств без снижения способности поддерживать адгезию и пролиферацию клеток сосудистого эндотелия

Сравнительный анализ секреторной способности островков Лангерганса, культивированных с биополимерным коллагенсодержащим гидрогелем и тканеспецифическим матриксом

Introduction. Creation of a biomedical cell product – a bioengineered pancreatic construct – is hampered by problems associated with maintaining the viability of functionally active isolated islets of Langerhans (ILs). Both biopolymer and tissue-specific scaffolds can contribute to maintaining the structure and function of isolated ILs in vitro and in vivo. The most preferred tissue-specific scaffolds for cells can be obtained via decellularized pancreas matrix scaffold (DP matrix scaffold). Objective: to conduct a comparative analysis of the secretory function of isolated ILs of rats cultured in biopolymer-based collagen-containing hydrogel (BCH) and tissue-specific DP matrix scaffold, respectively. Materials and methods. ILs from rat pancreas was isolated using classical collagenase technique with some modifications. ILs were cultured in BCH and tissue-specific scaffold under standard conditions. Tissue-specific DP matrix scaffold was obtained through decellularization of rat pancreas. The DP matrix scaffold was examined for cytotoxicity and DNA presence; it was subjected to morphological study. The secretory function of ILs was studied through enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results. The secretory function of islets cultured in BCH and DP scaffolds is significantly higher than in the monoculture of islets. The advantage of using tissue-specific DP matrix scaffolds when creating bioengineered constructs of the pancreas over BCH matrix scaffolds was identified. Conclusion. BCH and tissue-specific DP scaffolds contribute not only to preserving the viability of isolated ILs, but also to prolonging their secretory capacity for 10 days, compared with ILs monoculture.Введение. Созданию биомедицинского клеточного продукта – биоинженерной конструкции поджелудочной железы (ПЖ) – препятствуют проблемы, связанные с поддержанием жизнеспособности функционально активных изолированных островков Лангерганса (ОЛ). Сохранению структуры и функции изолированных ОЛ в условиях in vitro и in vivo могут способствовать как биополимерные, так и тканеспецифические матриксы. Наиболее предпочтительные для клеток тканеспецифические матриксы могут быть получены в результате децеллюляризации поджелудочной железы (ДПЖ-матрикс). Цель. Провести сравнительный анализ секреторной функции изолированных ОЛ крысы, культивированных в присутствии биополимерного коллагенсодержащего гидрогеля (БМКГ) и тканеспецифического ДПЖ-матрикса соответственно. Материалы и методы. ОЛ из ПЖ крысы выделяли, используя классическую коллагеназную технику с некоторыми модификациями. ОЛ культивировали в присутствии БМКГ- и тканеспецифического матрикса в стандартных условиях. Тканеспецифический ДПЖ-матрикс получали в результате децеллюляризации ПЖ крысы. ДПЖ-матрикс был исследован на цитотоксичность, присутствие ДНК и подвергнут морфологическому изучению. Секреторную функцию ОЛ исследовали методом иммуноферментного анализа (ИФА). Результаты. Было показано, что секреторная функция островков, культивированных в присутствии БМКГи ДПЖ-матрикса, значительно выше, чем в монокультуре островков. Выявлено преимущество применения тканеспецифического ДПЖ-матрикса при создании биоинженерной конструкции ПЖ по сравнению с БМКГ-матриксом. Заключение. БМКГ и тканеспецифический ДПЖ-матриксы способствуют не только сохранению жизнеспособности изолированных ОЛ, но и пролонгированию их секреторной способности в течение 10 дней, по сравнению с монокультурой ОЛ

Криогенно-структурированный гидрогель на основе желатина как резорбируемая макропористая матрица для биомедицинских технологий

Objective: to investigate the biological properties of a matrix made of cryogenically structured hydrogel in the form of a macroporous gelatin sponge, as well as the possibility of creating cell-engineered constructs (CECs) on its basis. Materials and methods. The main components of the cryogenically structured hydrogel were gelatin (type A) obtained from porcine skin collagen, N-(3-dimethylaminopropyl)-N’-ethylcarbodiimide, (EDC) and urea (all from Sigma-Aldrich, USA). Surface morphology was examined using scanning electron microscopy (SEM). The degree of swelling in water of the samples was determined by gravimetric method. Cytotoxicity was studied on NIH3T3, a fibroblast cell line isolated from a mouse, and on human adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells (hAMSCs) using IncuCyte ZOOM (EssenBioscience, USA). The metabolic activity of hAMSCs was assessed using PrestoBlue™ reagents (Invitrogen™, USA). To create CECs, we used hAMSCs, human hepatocellular carcinoma cell line HepG2 or human umbilical vein endothelial cell lines EA.hy926. Albumin content in the culture medium was determined by enzyme immunoassay. Ammonia metabolism rate was assessed after 90 minutes of incubation with 1 mM ammonium chloride (Sigma-Aldrich, USA) diluted in a culture medium on day 15 of the experiment. Results. Obtaining a cryogenically structured hydrogel scaffold in the form of macroporous gelatin sponge included freezing an aqueous solution of a gelatin+urea mixture, removal of polycrystals of frozen solvent by lyophilization, extraction of urea with ethanol and treatment of the cryostructurate with an ethanol solution of EDC. Scanning electron microscopy identified three types of pores on the carrier surface: large (109 ± 17 μm), medium (39 ± 10 μm), and small (16 ± 6 μm). The degree of swelling in water of the matrix samples was 3.8 ± 0.2 g H2O per 1 g of dry polymer. The macroporous gelatin sponge as a part of CEC was found to have the ability to support adhesion and proliferation of hAMSCs, EA.hy926 and HepG2 for 28, 15 and 9 days, respectively. Albumin secretion and ammonia metabolism when HepG2 cells were cultured on the gelatin sponge were detected. Conclusion. The use of a matrix made from macroporous cryogenically structured gelatin-based hydrogel for tissue engineering products is shown to be promising using a cell-engineered liver construct as a case.Цель: исследование биологических свойств матрицы из криогенно-структурированного гидрогеля в форме макропористой желатиновой губки, а также возможности создания на ее основе клеточно-инженерных конструкций. Материалы и методы. Основными компонентами криогенно-структурированного гидрогеля были желатин (тип А), полученный из коллагена свиной кожи, N-(3-диметиламинопропил)-N’-этил-карбодиимид, (ЭДК) и мочевина (все – Sigma-Aldrich, США). Морфологию поверхности исследовали с использованием сканирующей электронной микроскопии. Степень набухания в воде образцов определяли гравиметрическим методом. Цитотоксичность исследовали на фибробластах мыши линии NIH 3T3 и мезенхимальных стромальных клетках жировой ткани человека (МСК ЖТч) с использованием IncuCyte ZOOM (EssenBioscience, США). Метаболическую активность МСК ЖТч оценивали с помощью реагентов PrestoBlue™ (Invitrogen™, США). Для создания клеточно-инженерных конструкций (КИК) использовали МСК ЖТч, клетки гепатоцеллюлярной карциномы HepG2 или эндотелиальные клетки пупочной вены человека линии EA.hy926. Содержание альбумина в культуральной среде определяли методом иммуноферментного анализа. Скорость метаболизма аммиака оценивали после 90 минут инкубации с 1 mM хлоридом аммония (Sigma-Aldrich, США), разведенным в культуральной среде на 15-е сутки эксперимента. Результаты. Получение матрицы из криогенно-структурированного гидрогеля в форме макропористой желатиновой губки включало замораживание водного раствора смеси желатина и мочевины, удаление поликристаллов замерзшего растворителя лиофилизацией, экстракцию мочевины этанолом и обработку криоструктурата этанольным раствором ЭДК. Сканирующая электронная микроскопия позволила выделить три типа пор на поверхности носителя: крупные (109 ± 17 мкм), средние (39 ± 10 мкм) и малые (16 ± 6 мкм). Степень набухания в воде образцов матрицы составила 3,8 ± 0,2 г Н2О на 1 г сухого полимера. Установлена способность макропористой желатиновой губки в составе КИК поддерживать адгезию и пролиферацию МСК ЖТч, эндотелиальных клеток пупочной вены человека линии EA.hy926 и HepG2 в течение 28, 15 и 9 суток соответственно. Доказано наличие секреции альбумина и метаболизма аммиака при культивировании клеток HepG2 на желатиновой губке. Заключение. На примере клеточно-инженерной конструкции печени показана перспективность использования матрицы из макропористого криогенно-структурированного гидрогеля на основе желатина для создания продуктов тканевой инженерии

BISTABILITY AND CYTOTOXICITY OF MEDICAL DEVICES BASED ON CROSS-LINKED BIOPOLYMERS

The increase in biostability of medical products/materials based on proteins and their derivatives, including resorbable 2Dand 3D-matrices for tissue engineering and regenerative medicine is usually achieved by means of cross-linking with glutaraldehyde (GA). One of the serious fl aws of the products stabilized with GA is their cytotoxicity caused by trace amounts of GA which are diffi cult to remove from cross-linked biopolymer matrices, thus the search for chemical and physical methods of cross-linking of such medical products remains essential. Aim: to compare the infl uence of various cross-linking methods on the cytotoxicity of collagen and gelatin samples.Materials and methods. Samples – fi lms with diameter of 30 mm and thickness of ~ 150 μm, – were obtained by irrigation method usingthesolution of scleral collagen (SC) of Type farm animals or with gelatin with the subsequent drying at 37º С until constant weight on air. Samples of porous matrices in shape of tubes of gelatin and polyoxybutirate-co-valerate with the weight ratio 2:1 were obtained by electrospinning. The cytotoxicity of structurally stabilized samples was studied by fi ve methods: 1) dehydrothermal cross-linking with the residual pressure of 10–20 mm Hg and temperature of 120 °С; 2) injection of GA immediately into the biopolymer solution; 3) with GA vapors; 4) with GA vapors with the subsequent incubation in phosphate buffered saline (PBS) with рН = 7.4; 37 °С; 24 h; 5) with GA vapors with the subsequent incubation in 0.1% lysine solution with рН = 7.4; 37 °С; 24 hour in DMEM medium. Cytotoxicity of samples was evaluated according to the requirements of interstate standard GOST ISO 10993-5-2011 on the culture of mice fi broblasts of NIH 3Т3 line using extracts from samples (37 °С; 24 h) and by means of direct contact of samples with these cells.Results. Matrices treated hydrothermally demonstrated complete absence of cytotoxicity. Samples, fi xated in GA solution in the range of concentrations from 0.01 to 1.0% demonstrated a high level of cytotoxicity which does not answer the requirements of GOST ISO 10993-5-2011. Fixation of collagen and gelatin matrices with GA vapors during 48 h infl uences their cytotoxicity minimally but with the treatment time increased to 72 hours cytotoxicity escalates to severe levels. With the subsequent incubation of cytotoxic gelatin samples in PBS the decrease in cytotoxicity to the levels corresponding with the requirements of GOST ISO 10993-5-2011 was observed. For the analogous decrease in cytotoxicity of collagen fi lms treated with GA vapors during more than 48 h an additional incubation in lysine solution was needed.Conclusion. Dehydrothermal cross-linking method is optimal from the view point of absence of cytotoxicity of stabilized biopolymers, however its area of application is limited by the risk of infl uence of high temperatures on the medico-technical properties of the products. Fixation in GA vapors is a universally applicable and a rather simple method of treatment of medical products or biopolymer-based coatings, but it does not resolve the issue of their cytotoxicity at treatment times exceeding 48 h. Rinsing in buffer solution in case of gelatin or treatment with the amino acid (lysine) solution in case of collagen allow to decrease the level of cytotoxicity of products stabilized with GA vapors to the values corresponding with the requirements of GOST ISO 10993-5-2011

THE RESEARCH OF WEAK PHYSICAL ELECTROMAGNETIC FACTORS INFLUENCE ON NIH 3T3 MOUSE FIBROBLASTS

It was found that short-term (15 min) and energy weak electromagnetic influences (a weak laser radiation, λ = 0,89 μm, repetition frequency 4 Hz and 3000 Hz, and vector potential of magnetic field value of 10–5–10–4 Tl×m) influenced on a six-day cultured mouse fibroblasts metabolism. A magnitude and trend of the effect depend on radiation power and repetition frequency