Валидационные исследования методики спирального посева для определения «Специфической активности» лактосодержащих пробиотических препаратов

Scientific relevance. Viable cell counting is an important microbiological test for the quality assessment of medicinal products containing live microorganisms. To optimise labour and material costs and enhance testing precision and reproducibility, it is practical to use partially automated instrumental methods, such as the spiral plating method.Aim. The aim was to conduct a validation study of the spiral plating method for assessing the potency of biologicals containing live bacterial cells, using a lactobacillus-containing probiotic medicinal product as a case study.Materials and methods. This study used a culture of Lactiplantibacillus plantarum isolated from a probiotic medicinal product. Spiral plating on agar-based biological culture media was performed using an automatic Eddy Jet 2 plating system. The study used an IUL Flash & Go colony counter for automatic reporting of the results. The validation study was conducted according to the general chapter on the validation of microbiological testing methods (OFS.1.1.0021.18) of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation.Results. According to the validation results for the main parameters, the spiral plating method had the range of 104–105 CFU/mL; the limit of quantification of 102 CFU/mL; and the coefficient of linear determination, R2, of 0.99. The accuracy of the spiral plating method in determining the potency of the test sample was 93%; the repeatability was 4.9%.Conclusions. The study results confirm the similarity of the spiral plating method with an automatic colony counter to Koch’s plating method, which is currently used in accordance with the State Pharmacopoeia of the Russian Federation, in terms of the validated parameters. Therefore, spiral plating can be used to evaluate the potency of lactobacillus-containing probiotics. Spiral plating can help improve the cost-effectiveness and accuracy of testing.Актуальность. Определение количества жизнеспособных клеток является важным микробиологическим исследованием при оценке качества лекарственных препаратов, содержащих живые микроорганизмы. Для оптимизации трудовых и материальных затрат, повышения точности и воспроизводимости испытаний целесообразно применение частично автоматизированных инструментальных методов, к которым относится метод спирального посева.Цель. Проведение валидационных исследований методики спирального посева при испытании по показателю «Специфическая активность» биологических лекарственных препаратов, содержащих живые бактериальные клетки, на примере лактосодержащего пробиотического лекарственного препарата.Материалы и методы. В исследовании использовали культуру Lactiplantibacillus plantarum, выделенную из образца пробиотического лекарственного препарата. Спиральный посев на агаризованные питательные бактериологические среды осуществляли с помощью автоматической системы нанесения пробы Eddy Jet 2 с последующим автоматическим учетом результатов с применением счетчика колоний IUL Flash & Go. Валидационные исследования проводили согласно требованиям Государственной фармакопеи Российской Федерации (ОФС.1.1.0021.18).Результаты. Определены основные валидационные характеристики методики спирального посева: рабочий диапазон от 104 до 105 КОЕ/мл, предел количественного определения — 102 КОЕ/мл, коэффициент линейной детерминации R2 — 0,99. Правильность методики спирального посева при определении специфической активности составила 93% с повторяемостью 4,9%.Выводы. Методика спирального посева с применением автоматического счетчика колоний может использоваться при оценке качества лактосодержащих пробиотических лекарственных препаратов по показателю «Специфическая активность», поскольку результаты валидационных исследований подтверждают аналогичность анализируемых характеристик методу Коха, который применяется в настоящее время в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации. Использование методики спирального посева способствует оптимизации затрат и повышению точности результатов испытаний

The experimental correction of the dysbacteriosis by probiotics

In vivo, the obtained evidences were received to necessitate the performance of the standard preclinical research of different dosages of the probiotics in experimental model of the probiotics treatment efficiency study in the case of dysbacteriosis correction. The use of different commercial probiotics in the experimental disbiosis lead to various results of the corrections of intestinal microflora balance: to the increasing of normoflora without the correction of potentially harmful organisms in case of using the normoflora medication; to the increasing of lactose-positive E.coli, lactobacteria, without the bifidobacteria level shifting and to the elimination of fungi and staphylococcus in case of the biosporin. Bactisubtil didn't restore the normoflora and didn't correct the level of the fungi and staphylococcus