Эра изучения врождённых заболеваний метаболизма в Молдове

IMSP Institutul Mamei şi CopiluluiInborn errors of metabolism (IEM) are a phenotypically and genetically heterogeneous group of disorders caused by a defect in a metabolic pathway, leading to malfunctioning metabolism and/or the accumulation of toxic intermediate metabolites. Currently, there are over 6,000 known rare diseases, of which more than 1,000 are IEM, which most often affect children. A third of affected children die by the age of 1 year, often by sudden death, another third survive only up to 5 years. The main objective of IEM diagnosis is to administer effective treatment as early as possible. A lot of IEM currently diagnosing by neonatal screening tests, especially by mean of mass spectrometry method. A revolutionary technology performed in developed countries considering the gas chromatography coupled with mass spectrometry, which allows identifying more than 100 neonatal IEM. In the last 60 years of IEM screening methods have evolved dramatically, reaching actually to the methods of "untargeted metabolic screening next generation". In Moldova, we do not have a system of diagnostic, monitoring, and registration of IEM. Currently, we diagnose only one metabolic pathology - Phenylketonuria, its prevalence is 1:7997 births. In this regard, we created a multicenter research Network of IEM diagnosis with different countries having the necessary techniques for the diagnosis of IEM. It is necessary to develop a system for early diagnosis and monitoring of IEM in the Republic of Moldova. International cooperation contributes to the development of diagnostic Regional Network of IEM and creating the Consortia of multicenter research of IEM.Врождённые заболевания метаболизма (ВЗМ) – фенотипически и генетически гетерогенная группа нарушений, вызванных генетическими дефектами, приводящими к метаболическим нарушениям и/или накоплению токсических промежуточных метаболитов. В настоящее время известно более 6000 редких заболеваний, из которых более 1000 относятся к ВЗМ, наиболее часто встречающихся у детей. Треть больных детей умирают на первом году жизни, часто внезапно, ещё треть доживает только до 5 лет. Основной целью диагностики ВЗМ является как можно более раннее назначение эффективного лечения. Многие ВЗМ в настоящее время диагностируются с помощью методов неонатального скрининга, особенно методом масс-спектрометрии (МС). Революционная технология, применяющаяся в развитых странах: используется газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией, что позволяет выявлять более 100 ВЗМ в неонатальном периоде. За последние 60 лет методы скрининга ВЗМ развились в значительной степени, и представляют собой в настоящее время «нецелевой метаболический скрининг нового поколения». В Молдове нет системы диагностики, мониторинга и регистрации ВОМ. В настоящее время у нас диагностируется только одна метаболическая патология – Фенилкетонурия, её распространённость составляет 1:7997 новорожденных. В этой связи, мы создали мультицентровый исследовательский консорциум ВЗМ с участием многих стран, имеющих необходимые методы диагностики ВОМ. Необходимо создать систему ранней диагностики и мониторинга ВЗМ в Республике Молдова. Международное сотрудничество способствует созданию диагностической региональной сети ВЗМ и созданию Консорциума мультицентровых исследований ВЗМ

Unele aspecte ale metabolismului aminoacizilor în fenilcetonurie

The investigations of free amino acids level in blood and urina to the children with PKU showed that the troubles of other amino acids metabolism-Trp, Met, His, Glu, Tyr, very important in the nervous system development had determined, along with the troubles of Phe metabolism. The deregulations of amino acids transport enzymatic systems on the intestinal and kidney level had found

Analiza molecular-genetică a genei PAH la pacienţii cu PKU din Republica Moldova

Fenilcetonuria (PKU) este o patologie metabolică ereditară cu transmitere autozom recesivă cauzată de deficienţa enzimei fenilalanin hidroxilaza (PAH). În urma blocului enzimatic creşte cantitatea Phe şi a metaboliţilor ei care sunt extrem de toxici pentru sistemul nervos în dezvoltare, suscitând un retard mental sever. Analizând rezultatele screening-ului neonatal frecvenţa PKU în Republica Moldova poate fi considerată de 1 la 7325 de nou-născuţi, cu o rată medie de cuprindere de 75,2%. Scopul lucrării a fost de a aprecia frecvenţa mutaţiilor cercetatate în gena PAH la pacienţii cu PKU moldoveni şi de a monitoriza efi cienţa diagnosticului molecular-genetic a PKU în Republica Moldova. Pentru aceasta au fost supuse cercetării molecular-genetice 89 de mostre de ADN a pacienţilor cu PKU moldoveni. În urma cercetării moleculare s-a stabilit că cea mai frecventă mutaţie în gena PAH în populaţia moldovenească este R408W (50,0%) urmată de P281L (5,1%), R262Q (3,9%) R158Q, R252W, (a câte 2,8% fiecare), IVS12nt1 (2,3%). Spectrul mutaţional din gena PAH cercetat în Republica Moldova la momentul actual permite depistarea mutaţiilor cu rata de 69,7%, ceea ce accentuează necesitatea implementării noilor metodici pentru depistarea mutaţiilor noi, ceea ce ar eficientiza efectuarea diagnosticului prenatal în familiile cu risc prevenind naşterea copiilor cu PKU în Republica Moldova

Перспективa неонатального скрининга спинальной мышечной атрофии

Atrofia musculară spinală (SMA) este cea mai frecventă patologie neuromusculară ereditară și principala cauză genetică a mortalității infantile cauzată de mutații în gena SMN1. Detectarea precoce a SMA prin screening-ul nou-născutului (NBS) este esențială pentru selectarea tratamentului pre-simptomatic și pentru asigurarea unui follow-up optim. Scopul lucrării este de a evalua perspectiva implementării screening-ului nou-născutului pentru SMA în Republica Moldova. Materiale și metode. În scopul evaluării perspectivei, în cadrul LGMU al IMșiC am dezvoltat un algoritm pentru implementarea screening-ului mutațiilor asociate SMA, care include metode bazate pe genetica moleculară cum ar fi PCR in timp real și MLPA, cu utilizarea petelor de sânge pe carduri din hârtie de filtru colectate de la nou-născuți. Rezultate. În scopul implementării metodei molecular-genetice de detecție a mutațiilor asociate SMA au fost elaborate sonde și matrițe specifice pentru metoda PCR in timp real, de asemenea a fost implementată metoda MLPA care are ca scop confirmarea și aprecierea numărului copiilor genelor SMN1/SMN2. Totodată, la momentul actual au fost aprobate designul și protocolul de cercetare pentru această inițiativă. De asemenea au fost elaborate consimțământul si formularul de acceptare pentru confirmarea acceptării participării la studiu, care a fost aprobat de către Comitetul de Etică a Cercetării al USMF „N.Testemițanu”. Totodată suntem parte a CLSI în scopul elaborării unui protocol internațional pentru screening neonatal al SMA. Concluzii. Screening-ul nou-născutului poate detecta pacienții afectați de SMA înainte de apariția simptomelor și poate permite intervenția terapeutică precoce. Inițiativa de implementare al algoritmului pentru screening, în cadrul LGMU, IMșiC, vine în suportul evaluării perspectivei acestuia prin aprecierea fezabilității și rentabilității sale pentru Republica Moldova.Спинальная мышечная атрофия (СМА) является наиболее распространенным нейромышечным наследственным заболеванием, вызванным мутациями в гене SMN1, которые приводят к младенческой смертности. Раннее выявление СМА с помощью скрининга новорожденных (NBS) имеет важное значение для выбора пре-симптоматического лечения и обеспечения оптимального последующего наблюдения. Цель статьи – оценить перспективы внедрения скрининга новорожденных на СМА в Республике Молдова. Материалы и методы. Для выполнения поставленной цели, в рамках Лаборатории Молекулярной Генетики Человека, Институт Матери и Ребенка мы разработали алгоритм проведения скрининговой диагностики мутаций, ассоциированных со СМА. Алгоритм включает молекулярно-генетические методы, такие как ПЦР в реальном времени и MLPA, с использованием пятна крови на фильтровальную бумагу, собранных у новорожденных. Полученные результаты. Для реализации молекулярно-генетического метода выявления мутаций, ассоциированных со СМА, были разработаны специфические зонды и праймеры для метода ПЦР в реальном времени, а также внедрен метод MLPA, целью которого является подтверждение и оценка количества копий генов SMN1/SMN2. В то же время, дизайн исследования и протокол этой инициативы уже утверждены в ИМиР. Для получения согласия на участие в исследовании также были разработаны информационное согласие, которые были одобрены Комитетом по Этике Исследований ГУМФ «Н. Тестемицану». Мы работаем вместе с CLSI над разработкой международного протокола неонатального скрининга на СМА. Выводы. Скрининг новорожденных может выявить пациентов, страдающих СМА, до появления симптомов и позволить раннее терапевтическое вмешательство. Инициатива по внедрению разработанного алгоритма проведения скрининга на мутации, в рамках ЛМГЧ, Институт Матери и Ребенка, даст оценку перспективы ее осуществимости и экономической эффективности для Республики Молдова

Polimorfismul genei enzimei de conversie a angiotensin transferazei (ACE I/D) la femei cu pierderi reproductive din Republica Moldova

Gena enzimei de conversie (ACE) la om are o inserție-deleție (I / D) de stat polimorfi c în intronul 16 pe cromozomul 17q23. Acest polimorfi sm a fost pe larg investigat în diferite boli. În acest studiu ne-am propus să investigăm frecvența polimorfi smului genei ACE I / D la femeile ce suferă pierderi de sarcină în comparatiție cu grupul-control constituit din femei ce au suportat două nașteri fără complicații și, să comparăm frecvența polimorfi smului alelic a genei ACE I/D la populația din R. Moldova cu alte populații. Material și metode: a fost analizat ADN-ul prin metoda PCR la un grup de cercetare alcatuit din 160 de femei diagnosticate cu pierderi reproductive (2 și mai multe pierderi eproductive), grupul control – din 80 de femei cu 2 și mai multe sarcini normale. Femeile au vârsta cupinsă între 22 și 40 de ani. În cerecetare a fost inclus și un grup de 100 de persoane sănătoase, etnici moldoveni cu vârsta de până la 11±5 ani, pentru a determina polimorfismul ACE (I/D) și a-l compara cu alte etnii. Rezultate: analizând frecvența alelică și efectuând testul χ2 la ambele grupe obținute indică o deviere semnifcativă a frecvențelor alelice (χ2=7,38; df=2; p=0,03). Frecvența depistării alelei D/D în grupul de cercetare cu 1,73 ori se întâlnește mai des, decât în grupul-control (OR1,73; 95%CI=0,96-3,13), în rezultatul unei analize statistice comparative a polimorfi smului genei ACE I/D între populația sănătoasă din Republica Moldova şi populaţia similară din alte state, se observă, că se întâlnesc frecvenţe asemănătoare cu India, Italia, Danemarca, Turcia unde χ2 nu indică devieri statistice, iar valoarea (p>0,05) este mai mare. Rezultatele diferă la compararea frecvenței alelice cu populația chirghiză unde valoarea (χ2=13,69; df=2; p=0,002), indică o deviere statistică veridică după frecvența alelice a polimorfismului genei ACE I/D. Concluzii: la femeile cu genotipul ACE D/D riscul de a produce avort spontan este cu 1,73 mai mare decât la femeile din grupul-control, după analiza frecvenței polimorfismelor genei ACE I/D în populaţia sănătoasă din Republica Moldova, putem argumenta că frecvența polimorfi smului alelic este similar cu cel din India, Italia, Danemarca, Turcia unde χ2 nu indică devieri statistice, iar valoarea (p>0,05) este mai mare. Rezultatele diferă la compararea frecvenței alelice cu populația chirghiză unde valoarea (χ2=13,69; df=2; p=0,002), indică o deviere statistică veridică după frecvența alelice a polimorfi smului genei ACE I/D

Оценка витамина D у детей с первичным ожирением

IP Universitatea de Stat de Medicină și Farmacie Nicolae Testemițanu, IMSP Institutul Mamei și CopiluluiÎn ultimele decenii, prevalența excesului ponderal la copii a crescut constant în întreaga lume. Situația este îngrijorătoare, deoarece are impact atât asupra sănătății actuale a copilului, cât și asupra celei de viitor adult. Apariția excesului ponderal presupune interacțiuni multiple între diverși factori: genetici, sociali, comportamentali, metabolici, celulari și moleculari, în urma cărora se produc modificări în echilibrul energetic. Constituind o tulburare cronică a stării de nutriție, caracterizată prin creșterea greutății corporale pe seama țesutului adipos, obezitatea mai este însoțită de dereglarea verigilor evidente ale metabolismului glucidic, lipidic și proteic și de o serie de comorbidități. Cei 100 de copii participanți în cercetare au fost testați în vederea identificării markerilor biochimici și hormonali, a nivelului 25(OH) vitamina D, ce denotă o afectare asociată obezității. Scopul cercetării a fost aprecierea nivelului vitaminei D în corelație cu indicele masei corporale și unii parametri biochimici la copiii cu obezitate primară. La copiii cercetați s-a observat un nivel mediu crescut al hormonului paratiroidian, care se corelează cu un deficit de Ca și vitamina D. Așadar, obezitatea primară la copii se asociază cu un deficit evident de 25(OH) vitamina D.In recent decades, the prevalence of overweight in children has steadily increased throughout the world. The situation is worrying, because it has it mark on both the current child’s health and the adult’s future. The occurrence of overweight involves multiple interactions between genetic, social, behavioral, metabolic, cellular and molecular factors resulting in changes in the energy balance. Being a chronic nutritional disorder, characterized by increased body weight due to fat, obesity is accompanied by disruptions of obvious links of glucose, lipid and protein metabolism, and a series of comorbidities. The 100 children participating in the research tested to identify the biochemical and hormonal markers, level 25(OH) Vitamin D, which denotes an obesity related disorder. The aim of the research was to evaluate the Vitamin D level in correlation with BMI and some biochemical parameters in children with primary obesity. An elevated PTH level, correlated with a deficiency of Ca and Vitamin D, observed in the analyzed children. Therefore, primary obesity in children is associated with an apparent shortage of 25(OH) Vitamin D.За последние десятилетия распространенность избыточного веса у детей неуклонно возрастала во всем мире. Ситуация тревожная, потому что она влияет как на здоровье нынешнего ребенка, так и на будущее взрослого. Возникновение избыточного веса включает в себя множественные взаимодействия между генетическими, социальными, поведенческими, метаболическими, клеточными и молекулярными факторами, что приводит к изменениям энергетического баланса. Будучи хроническим нарушением питания, характеризующимся увеличением массы тела из-за жира, ожирение сопровождается нарушением явных связей метаболизма глюкозы, липидов и белков, и ряда сопутствующих заболеваний. 100 детей, участвовавших в исследовании, были протестированы для выявления биохимических и гормональных маркеров, уровня 25(OH) витамина D, который обозначает заболевание, связанное с ожирением. Целью исследования являлось определение уровня витамина D в корреляции с ИМТ и некоторыми биохимическими показателями у детей с первичным ожирением. У анализируемых детей наблюдался повышенный средний уровень ПТГ, связанный с дефицитом Ca и витамина D. Таким образом, первичное ожирение у детей связано с явной нехваткой 25(ОН) витамина D

Thyroid dysfunction associated with primary obesity in children and adolescents

Catedra Endocrinologie Clinică, USMF Nicolae Testemițanu, IMSP Institutul Mamei şi CopiluluiSummary Thyroid dysfunction associated with primary obesity in children and adolescents Over the last decades, obesity is the most common chronic pathology in children and adolescents, affecting each age group. Being a chronic nutritional disorder characterized by the increasing in the body weight due to adipose tissue, obesity is also accompanied by the disruption of obvious links of carbohydrates, lipids and proteins metabolism, and a series of comorbidities. 100 children participating in the research were tested to identify the biochemical and hormonal markers that indicate an obesity related disorder. As a result, it was observed that 27 of the examined children had an increased TSH level (4.7-10 μIU/ml), 2 children had TSH values > 10 μIU/ml, high level of anti-TPO Ab in 14 cases, 65 children presented structural changes of the thyroid. Conclusion: Primary obesity is commonly associated with thyroid dysfunction, particularly subclinical hypothyroidism

Нарушение в генах фолатного и метионинового цикла у женщин с привычным невынашиванием беременности

ISMP Institutul Mamei şi Copilului, Centrul de Sănătate a Reproducerii şi Genetică MedicalăBackground: Pathogenesis in recurrent pregnancy loss (RLP) is complex and involves the interaction of multiple genetic and environmental factors. Is supposed that genetic polymorphisms in MTHFR (C677T and A1298C), MTR (A2756G) and MTRR (G66A) genes may be associated with the risk of recurrent pregnancy loss. In this study, we aimed to investigate the association between the polymorphism of MTHFR, MTR, MTRR genes and pregnancy loss. Methods: In this study, we determined the genotypic frequencies of the MTHFR, MTR, MTRR gene polymorphisms in a sample of 274 women from Moldova, 166 with 2 and more miscarriages and 108 without a history of miscarriages, with 2 healthy births. The genomic DNA was extracted from the peripheral blood collected on EDTA. The methods used to study polymorphisms were PCR and PCR-RFLP. Statistical analysis was performed using the www.gen-exp.ru site. Results: The results of this study showed that women with recurrent pregnancy loss have a higher proportion of the MTHFR677TT, MTHFR 677CT, MTR2756AG, MTRR66GG genotype compared with the control group, does not present significant differences between the study group and control (p>0.05). The test Hardy-Weinberg was applied for the control and research group. Have been established no statistically significant differences (p>0.05) between the observed and theoretically expected genotypic frequencies for MTHFRC677T, MTHFR A1298C, MTR A2756G polymorphisms, but for MTRR G66A polymorphism have found the Hardy-Weinberg disequilibrium in control and research groups (χ2 =22.81, p=0.000, respectively χ2 =28.31, p=0.000). Conclusion: Our study revealed the role of folate and methionine cycle genes polymorphisms (MTHFR, MTR, MTRR) in the etiology of recurrent pregnancy loss showed no correlation between the results obtained from the two groups (χ2 0.05), but the risk of pregnancy loss is higher for women carrying MTR 2756AG genotype, OR=1.38, 95% CI [0.81-2.34], as well as MTRR 66AA genotype (OR=1.19, 95% CI [0.21-6.59]).Актуалъностъ: Патогенез привычного невынашивания беременности (ПНБ) сложный и включает взаимодействие нескольких генетических и экологических факторов. Предполагается, что генетические полиморфизмы в генах MTHFR (C677T и A1298C), MTR (A2756G) и MTRR (G66A) могут быть связаны с риском ПНБ. В этом исследовании, мы изучали корреляции между этими полиморфизмами и ПНБ. Методы: Определялись генотипические частоты полиморфных генов MTHFR, MTR, MTRR у 274 женщин из Молдовы, из которых 166 женщин с двумя и > потерями и 108 без потерь с 2 нормальными родами. Геномную ДНК экстрагировали из периферической крови. Были использованы следующие молекулярно-генетические методы: PCR и PCR-RLFP. Статистическая обработка с использованием сайта www.gen-exp.ru. Результаты: Результаты данного исследования показали, что женщины с привычным невынашиванием имеют более высокую долю MTHFR677TT, MTHFR 677CT, MTR 2756AG, MTRR 66GG генотипа по сравнению с контрольной группой, но данные величины не являются статистически значимыми (р>0,05). Тест Харди-Вайнберга был проведён в группе исследуемой и контрольной группе и при сравнении наблюдаемых генотипических частот и теоретически ожидаемым для MTHFR C677T, MTHFR A1298C, MTR A2756G, не было выявлено статистически значимых различий (р>0,05), но для полиморфизма MTRR G66A наблюдалось статистически значимое отклонение от распределения Харди-Вайнберга в исследуемой и контрольной группе (χ2 =22,81, р=0,000, соответственно χ2 =28,31, р=0,000). Выводы: Исследование не выявило существенных различий между частотами генотипов в двух исследуемых группах (χ2 0,05), но риск ПНБ выше в 1,5 раза для женщин, несущих MTR 2756AG генотип, OR=1.38, 95% CI [0.81-2.34], а также несущих MTRR 66AA генотип (OR=1.19, 95% CI [0.21-6.59])

Молекулярно-генетическая специфика фенилкетонурии в Республике Молдова (2018- 2019)

Institute of Mother and Child, Chisinau, Republic of MoldovaIntroducere: Fenilcetonuria (PKU) este o patologie autosomal recesivă, cauzată de deficienţa enzimei fenilalanin hidroxilaza, care duce la acumularea fenilalaninei (Phe) serice, cauzând retard mental. Scopul lucrării: Diagnosticarea PKU în baza screeningului neonatal, organizat în perioada 2018-2019, precum şi cercetarea, la nivel molecular genetic, a pacienţilor identificaţi pentru a stabili mutaţiile cauzatoare de boală. Material şi metode: În perioada 2018-2019 au fost supuşi screeningului 62943 de nou-născuţi din Moldova (rata de screening 96,16%), în baza metodei fluorometrice. La 17 copii a fost detectată PKU, iar 11 au fost testaţi genetic prin metoda PCR/RFLP la 6 mutaţii în gena PAH (p.R408W, p.P281L, p.L48S, .p.R158Q, p.R252W, p.R261Q) şi secvenţierea exonilor 2,3,5,6-8,10-13 ai genei PAH după metoda Sanger. Rezultate: Analiza molecular-genetică prin PCR/RFLP a permis detectarea mutaţiilor în 45,45% de cazuri. Cel mai frecvent genotip a fost p.R408W/p.L48S, stabilit la 3 pacienţi. Analiza suplimentară prin metoda Sanger a permis detectarea genotipului complet în restul cazurilor, determinând mutaţii de tip splicing (IVS7+4A>G, IVS11+7T>C, IVS12+1G>A), missense (p.A342T) şi nonsense (p.R111*). Concluzii: În urma studiului a fost detectat un spectru de mutaţii specifice cohortei PKU din Moldova, datorită metodelor eficiente de screening şi diagnostic.Введение: Фенилкетонурия (ФКУ) – это генетическое заболевание с аутосомно рецессивной моделью наследования обусловленное дефицитом фенилаланин- гидроксилазы. Дисфункция данного энзима приводит к накоплению фенилаланина в крови и последующим дегенеративным процессам в нервной системе. Цель: Целью исследования была диагностика пациентов с ФКУ с помощью неонатального скрининга, в период 2018-2019 годов, а так же проведение молекулярно- генетического изучения пациентов для идентификации мутаций в гене PAH. Материалы и методы: В период 2018-2019 годов, неонатальному скринингу подверглись 62943 новорождённых (доля 96,16%), по средством флуорометрического метода. У 17 детей была выявлена ФКУ, 11 из которых были подвержены ПЦР/ПДРФ анализу с целью выявления 6 частых мутаций в гене PAH (p.R408W, p.P281L, p.L48S, p.R158Q, p.R252W, p.R261Q) и секвенированию экзонов 2,3,5,6-8,10-13 гена PAH при помощи капилярного электрофореза по методике Sanger. Результаты: В результате проведения скрининга, были выявлены 376 подозреваемых случаев ФКУ, у которых показатели фенилаланина были больше 3 мг/дЛ, Образцы ДНК были получены у 11 из 17 подтвержденных пациентов. Молекулярно- генетическое исследование при помощи ПЦР/ПДРФ, позволило выявить мутации в 45,45% случаев. Самым распространённым генотипом оказался p.R408W/ p.L48S, выявленный у 3 пациентов. Пополнение исследования результатами секвенирования кодирующей части гена PAH позволило определить полный генотип в остальных случаях

Determinarea creatininei urinare la pacienţii cu alcaptonurie

Introducere. Nivelul creatininei urinare este utilizat pentru a recalcula concentraţiile multor metaboliţi la estimarea vitezei de excreţie a lor cu urina, în cazurile în care colectarea urinei nictemerale este dificilă. Metoda Jaffe, bazată pe reacţia de reducere a anionului picrat în picramat cu creatinina şi utilizată pe scară largă, este simplă şi ieftină, dar nu-i suficient de selectivă faţă de alte substanţe reducătoare, care pot fi prezente în urină. La pacienţii cu alcaptonurie (AKU), acidul homogentisic (HGA), un metabolit anormal, este excretat cu urina în cantităţi destul de mari. În condiţiile metodei Jaffe, HGA nu interacţionează imediat cu acidul picric, dar se oxidează în mediu alcalin cu oxigenul atmosferic, formând produse de culoare închisă (Fig. 1), fapt ce duce la rezultate majorate considerabil pentru creatinină. Scopul lucrării: Crearea unei variante a metodei Jaffe selective faţă de acidul homogentisic. Materiale şi Metode. Spectrofotometru UV-VIS "Lambda-25" (Perkin Elmer), probe de urină normală şi de la pacienţi cu alcaptonurie, substanţe de referinţă creatinină şi HGA, reagenţi (acid picric, hidroxid de sodiu). Descrierea metodei elaborate: Toate operaţiunile s-au efectuat la temperatura aerului 20°C T 1°C, adăugând probele şi reactivele la aceiaşi temperatură. La 20 ml urină de analizat sau soluţie standard creatinină »1 mg/ml (8.84 mMol/l) se adaugă 1.6 ml apă, 0.4 ml soluţie acid picric 1% şi, în ultimul rând, 0.4 ml soluţie hidroxid de sodiu 0.75 Mol/l; se agită scurt. Exact după 3 minute de la adăugarea soluţiei hidroxid de sodiu se măsoară absorbanţa optică la lungimile de undă 520 şi 600 nm. Soluţie de compensare se foloseşte proba preparată din 20 ml apă în loc de urină. Concentraţia creatininei în urină (X, mMol/l) se calculează conform formulei: X = CSt • AU,520 - 2• 3 • AU,600/ ASt520 - 2• 3 • ASt,600 în care: CSt - concentraţia soluţiei standard creatinină, mMol/l; AU520 şi AU,600 - valori de absorbanţă optică a probei, preparate din urină, la 520 şi 600 nm corespunzător; ASt,520 şi ASt,600 - valori de absorbanţă optică a probei, preparate din soluţia standard creatinină, la aceleaşi lungimi de undă. Rezultate. Pe bază analizei spectrelor UV-VIS ale probelor model (Fig. 2) s-au selectat 2 lungimi de undă pentru măsurare: 520 nm, utilizată şi în metoda Jaffe tradiţională datorită raportului optim dintre absorbanţa acidului picramic (produsul reducerii acidului picric cu creatinina) şi absobanţă de fon a reactivului, şi 600 nm - în afara benzii de absorbanţă a acidului picramic. Coeficientul 2.3 în formula de calcul este raportul dintre valorile absorbanţei produselor de oxidare a HGA în mediu alcalin la 520 şi 600 nm. Totodată s-a observat că, în prezenţa HGA, răspunsul analitic pentru creatinină scade în timp, probabil din cauza interacţiunii dintre acidul picramic şi produsele intermediare a oxidării HGA de natură chinonă. Din acest motiv reacţia trebuie de efectuat la temperatură constantă şi în timp limitat. Metoda propusă a fost testată pe probe de urină de la pacienţii cu alcaptonurie (AKU 1, AKU 2, AKU 3, AKU 4) şi cu fenilcetonurie (urină fără HGA) (Control 1, Control 2, Control 3), comparând rezultatele cu cele obţinute prin metoda HPLC, utilizată ca metoda de referinţă (Tabelul 1). Metoda oferă rezultate veridice pentru creatinina urinară independent de prezenţa HGA. Concluzii: A fost creată o variantă simplă şi fiabilă a metodei Jaffe, cu măsurarea la 2 lungimi de undă, utilă pentru determinarea creatininei urinare la pacienţii cu alcaptonurie