In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells

Aim. To develop a model to study the interaction between tumor and stromal cells in three-dimensional culture. Methods. Cultivation of HeLa cell lines and human dermal fibroblasts in monolayer and three-dimensional culture, immunofluorescent and immunohistochemical analysis. Results. In this work we present an approach based on a direct interaction between the cells of multicellular tumor spheroids and spheroids of fibroblasts. Subsequent immunofluorescence analysis allows to determine an origin of cells in the area of their contact. Conclusions. This model will be useful to study the basic mechanisms of carcinogenesis, and to find targets for anticancer therapy.Мета. Розробити модель для вивчення взаємодії пухлинних і стромальних клітин за умов тривимірної культури. Методи. Культивування клітин лінії HeLa і дермальних фібробластів людини в моношаровий і тривимірній культурі, імунофлуоресцентний та імуногістохімічний аналіз. Результати. Запропоновано підхід, що базується на дослідженні безпосередньої взаємодії клітин багатоклітинних сфероїдів пухлинних клітин і сфероїдів фібробластів. Подальший імунофлуоресцентний аналіз дає можливість визначити походження клітин у зоні їхнього контакту. Висновки. Описана модель буде корисною як для вивчення базових механізмів канцерогенезу, так і за пошуку мішеней для протипухлинної терапії.Цель. Разработать модель для изучения взаимодействия опухолевых и стромальных клеток в условиях трехмерной культуры. Методы. Культивирование клеток линии HeLa и дермальных фибробластов человека в монослойной и трехмерной культуре, иммунофлуоресцентный и иммуногистохимический анализ. Результаты. Предложен подход, базирующийся на исследовании непосредственных взаимодействий клеток многоклеточных сфероидов опухолевых клеток и сфероидов фибробластов. Последующий иммунофлуоресцентный анализ дает возможность определить происхождение клеток в зоне их контакта. Выводы. Описанная модель будет полезна как для изучения базовых механизмов канцерогенеза, так и при поиске мишеней для противоопухолевой терапии

Phospho-mTOR (Ser2481) colocalizes with condensed chromosomes during metaphase

Aim. To study the subcellular localization of phospho-mTOR (Ser2481) in cultured cells of human cancer cell lines. Methods. Immunofluorescent analysis of phospho-mTOR (Ser2481) subcellular localization in cultured MCF-7 (human breast adenocarcinoma) and HepG2 (human liver carcinoma) cells. Results. For the first time phospho-mTOR (Ser2481) was detected as bright spots situated in the equatorial region of chromosomes and colocalized with condensed chromosomes during metaphase. Conclusions. In this study, we describe for the first time the co-localization of phospho-mTOR (Ser2481) and chromosomes of the metaphase plate in the MCF-7 and HepG2 cells. Our data support the hypothesis that phospho-mTOR (Ser2481) could act as a CPP (chromosomal passenger protein)-like kinase, which takes part in the regulation of mitosis progression.Мета. Дослідити внутрішньоклітинну локалізацію phospho-mTOR (Ser2481) в лініях ракових клітин людини. Методи. Подвійний імунофлуоресцентний аналіз. Культивовані клітини ліній MCF-7 (аденокарцинома молочної залози людини) і HepG2 (карцинома печінки людини). Результати. Вперше phospho-mTOR (Ser2481) був виявлений у вигляді яскравих точок, які розташовувались в екваторіальній області клітини та співлокалізувались з конденсованими хромосомами під час метафази. Висновки. У цьому дослідженні ми вперше описуємо співлокалізацію phospho-mTOR (Ser2481) і хромосом метафазної пластинки у клітинах ліній MCF-7 і HepG2. Наші дані підкріплюють гіпотезу, що phospho-mTOR (Ser2481) може виступати в якості СРР-кінази і брати участь у регуляції проходження мітозу.Цель. Исследовать внутриклеточную локализацию phospho-mTOR (Ser2481) в раковых клеточных линиях человека. Методы. Двойной иммунофлуоресцентный анализ. Культивированные клетки линий MCF-7 (аденокарцинома молочной железы человека) и HepG2 (карцинома печени человека). Результаты. Впервые phospho-mTOR (Ser2481) был обнаружен в виде ярких точек, которые располагались в экваториальной области клетки и колокализировались с конденсированными хромосомами во время метафазы. Выводы. В этом исследовании мы впервые описываем колокализацию phospho-mTOR (Ser2481) и хромосом метафазной пластинки в клетках линий MCF-7 и HepG2. Наши данные подкрепляют гипотезу, что phospho-mTOR (Ser2481) может выступать в качестве СРР-киназы и участвовать в регуляции прохождения митоза

Optimization of cell motility evaluation in scratch assay

A scratch test is one of the most popular methods of classical cell migration assay in a monolayer culture. At the same time, the scratch assay has some disadvantages that can be easily corrected. Aim. Optimization the existent scratch assay on the base of detection of scratch wound surface area and the length of the field of observation which is more objective and less time consuming. Methods. Scratch assay. Results. The modification of scratch assay enables to perform measurement more accurately and rapidly. This approach is more simple and eliminates the main disadvantages of the classical method. Conclusions. The procedure of scratch wound width measurement calculated on the base of detection of cell free area and the length of the field of observation is more effective than the classical wound healing assay. It will be useful for the estimation of cell migration dynamics in monolayer culture for a wide range of live cell based experiments.Метод «раневої поверхні» є одним з найпоширеніших методів класичного аналізу міграції клітин у моношаровій культурі. Водночас, метод «раневої поверхні» має деякі недоліки, які можуть бути легко відкориговані. Мета. Оптимізація існуючого методу «раневої поверхні» на основі визначення площі поверхні рани і ширини поля зору, що є більш об’єктивним і менш часозатратним. Методи. Локомоторну активність клітин оцінювали за методом «раневої поверхні». Результати. Модифікація методу «ра- невої поверхні», представлена в статті, дає можливість отримувати більш точні дані. Практично цей підхід набагато простіший та усуває основний недолік зазначеного методу. Висновки. Процедура вимірювання ширини раневої поверхні, розрахованої на основі визначення площі, не зайнятої клітинами, і ширини поля зору, є значно ефективнішою, ніж класичний аналіз міграційного потенціалу клітин за методом «раневої поверхні». Така модифікація буде корисною для оцінки динаміки міграції клітин у моношаровій культурі для широкого кола експериментів, які передбачають використання живих клітин.Метод «раневой поверхности» является одним из наиболее распространенных методов классического анализа миграции клеток в монослойной культуре. В то же время метод «раневой поверхности» имеет некоторые недостатки, которые могут быть легко откорректированы. Цель. Оптимизация существующего метода «раневой поверхности» на основе определения площади раневой поверхности и ширины поля зрения, что является более объективным и менее затратным во времени. Методы. Локомоторную активность клеток оценивали по методу «раневой поверхности». Результаты. Модификация метода «раневой поверхности», представленная в статье, дает возможность получать более точные данные. Практически этот подход гораздо более простой и устраняет основной недостаток указанного метода. Выводы. Процедура измерения ширины раневой поверхности, рассчитанной на основе определения площади, не занятой клетками, и ширины поля зрения, является более эффективной, чем классический анализ миграционного потенциала клеток по методу «раневой поверхности». Такая модификация будет полезной для оценки динамики миграции клеток в монослойной культуре для широкого спектра экспериментов, предусматривающих использование живых клеток

Optimization of in vitro model for analysis of tumor cell migration dynamics

Migration ability is an important feature of tumor cells. There are several approaches to analyze the dynamics of cancer cell migration in vitro. One of the most perspective and closer to the in vivo conditions is the model of initiation of the cell migration from 3D multicellular spheroids onto growth surface. Aim. Optimization of the model for adequate quantitative characteristics of the tumor cell locomotion during several days. Methods. 2D and 3D MCF-7 cell culture, immunofluorescence analysis, and image analysis using computer software Fiji. Results. Unification of spheroid size allowed avoiding a significant data deviation. The obtained spheroids spread completely for 3 days. The highest migration ratio was observed at the 2nd day. The proliferation level at each of 3-day experiment was the same and did not exceed 3%. The validity of the model was tested after migration inhibition by rapamycin (mTOR signaling inhibitor). Additionally, this model was successfully applied to immunofluorescence analysis, namely investigation of p85S6K1 subcellular localization in moving MCF-7 cells. Conclusions. Double filtration of multicellular spheroids allowed unification of their size, which promotes an adequate interpretation of the migration assay. This model enabled the study of tumor cells migration dynamics and can be further used for the development of anticancer drug.Міграційна здатність є важливою ознакою пухлинних клітин. Існує кілька підходів до аналізу динаміки міграції ракових клітин in vitro. Однією з найбільш перспективних і близьких до умов in vivo є модель ініціювання міграції клітин з тривимірного багатоклітинного сфероїда на ростову поверхню. Мета. Оптимізація моделі для адекватної кількісної оцінки міграції пухлинних клітин. Методи. 2- та 3-вимірна культура клітин лінії MCF-7, імунофлюоресцентний аналіз, аналіз зображень з використанням комп'ютерної програми Фіджі. Результати. Уніфікація розміру сфероїдів дозволила уникнути значного розкиду даних. Отримані сфероїди повністю розпластувались протягом 3 днів. Найвищий показник міграції спостерігався на 2-гу добу розпластування сфероїда. Рівень проліферації клітин за кожну добу 3-денного експерименту був майже однаковим і не перевищував 3%. Валідність моделі була протестована після пригнічення міграційної активності клітин під впливом рапаміцину (інгібітор сигналізації mTOR). Крім того, запропонована модель була успішно застосована для дослідження субклітинної локалізації p85S6K1 в мігруючих клітинах лінії MCF-7 за допомогою імунофлюоресцентного аналізу. Висновки. Подвійне фільтрування багатоклітинних сфероїдів дозволяє уніфікувати їх розміри, що в подальшому сприяє адекватній оцінці міграційного потенціалу клітин. Запропонована модель дозволяє вивчати динаміку міграційних процесів пухлинних клітин і може бути використана для тестування протипухлинних препаратів in vitro.Миграционная способность является важной особенностью опухолевых клеток. Существует несколько подходов для анализа динамики миграции раковых клеток in vitro. Одной из наиболее перспективных и приближенных к условиям in vivo является модель инициации миграции клеток из трехмерных многоклеточных сфероидов на поверхность роста. Цель. Оптимизация модели для адекватных количественных характеристик локомоции опухолевых клеток в течение нескольких дней. Методы. 2D и 3D MCF-7 клеточная культура, иммунофлуоресцентный анализ и анализ изображений с использованием компьютерного программного обеспечения Фиджи. Результаты. Унификация размеров сфероидов позволила избежать значительного отклонения данных. Полученные сфероиды распространились полностью за 3 дня. Самый высокий коэффициент миграции наблюдался на 2-й день. Уровень пролиферации в каждом из 3-дневных экспериментов был одинаковым и не превышал 3%. Достоверность модели была проверена после ингибирования миграции рапамицином (ингибитор передачи сигналов mTOR). Кроме того, эта модель была успешно применена для иммунофлуоресцентного анализа, а именно для исследования субклеточной локализации p85S6K1 в движущихся клетках MCF-7. Выводы. Двойная фильтрация многоклеточных сфероидов позволила унифицировать их размер, что способствует адекватной интерпретации анализа миграции. Эта модель позволила изучить динамику миграции опухолевых клеток и может быть в дальнейшем использована для разработки противоопухолевого препарата

Identification of tumor-associated antigens in human thyroid papillar carcinoma

In this study two cDNA expressing libraries generated from thyroid papillar carcinomas were screened using SEREX approach. Thirty positive cDNA clones representing seventeen different genes were identified from both libraries. It is important to note, that three of them were isolated previously by other laboratories in SEREX screens of various types of human cancer. These include transcription factor NZF, a-catenin and BAG RP11 — a protein with unknown function. Moreover, we identified a whole panel of novel potential tumor-associated antigens, which would be further investigated. We are particularly interested in more detailed analysis of cathepsin H and transducer of ErbB2 (TOB2), which are differentially expressed in various types of human cancer. We will analyse the frequency of autoantibodies against identified antigens in sera of patients with various malignancies and healthy donors by heterologous screening. It is expected that among the clones isolated in this study, there might be novel cancer-associated markers.З двох зразків тканини папіломи щитовидної залози людини отримано дві кДНК експресуючі бібліотеки. Імуноскринуванням бібліотек методом SEREX ідентифіковано 30 пози­тивних клонів, які відповідали 17 різним генам. Потрібно відмітити, що три гени – транскрипційний фактор NZF, α-катенін і білок ВАС RP11 з поки невідомою функцією – раніше виявлено в інших лабораторіях методом SEREX, де скрикували бібліотеки з різних типів пухлин людини. Серед решти ідентифікованих генів найцікавішими є катепсин Н (cathepsin Н) и ТОВ2 (transducer of ErbB2), підвищену екс­пресію яких було знайдено в багатьох злоякісних пухлинах людини. Подальші дослідження буде направлено на виявлення частоти зустрічальності антитіл проти даних антигенів у сироватках крові хворих на рак різної етіології та здорових донорів. Серед визначених у нашій лабораторії нових SEREX позитивних клонів є потенційні маркери злоякісних новоутво­рень щитовидної залози людини.кДНК экспрессирующие библиотеки получены из двух образцов ткани злокачественной папилломы щитовидной железы человека. Иммуноскрининг библиотек методом SEREX дал воз­можность идентифицировать 30 положительных клонов, представляющих собой продукты 17 различных генов. Следует отметить, что три гена — транскрипционный фактор NZF, а-катенин и белок с неизвестной функцией ВАС RP11 – выявлены ранее в других лабораториях SEREX скринингом библиотек из различных типов опухолей человека. Среди ос­тальных идентифицированных генов наибольший интерес представляют катепсин Н (cathepsin Н) и ТОВ2 (transducer of ErbB2), повышенная экспресия которых выявлена во многих злокачественных опухолях человека. Дальнейшие исследования будут направлены на установление частоты встречаемости антител против данных антигенов в сыворотках крови боль­ных раком различной этиологии и здоровых доноров. Среди выявленных нами новых SEREX положительных клонов могут быть потенциальные маркеры злокачественных новообразова­ний щитовидной железы человека

Generation of monoclonal antibody against protein phosphatase 5

Aim. Serine/threonine protein phosphatase 5 (PP5) is a unique member of serine/threonine phosphatase family, comprises a regulatory tetratricopeptide repeat (TPR) domain and regulates many cell signaling pathways. Here, we describe the development of a PP5 specific monoclonal antibody (mAb) and characterize its suitability for Western blotting and immunoprecipitation. Methods. Hybridoma technology has been used for monoclonal antibody generation. Immunization was carried out with recombinant mouse PP5 expressed in Escherichia coli as a GST-tagged fusion protein. Results. mAb against PP5 has been generated. Conclusions. Generated mAb specifically recognizes recombinant and endogenous mouse and rat PP5 and is suitable for Western blotting and immunoprecipitation. This mAb will be useful tool for investigations of PP5 physiological role.Мета. Серин-треонінова протеїнфосфатаза 5 (PP5) є унікальним членом родини серин-треонінових протеїнфосфатаз, оскільки містить регуляторні тетратрикопептидні повтори (TPR). PP5 бере активну участь у процесах сигнальної трансдукції. Описано процедуру отримання моноклональних антитіл, специфічних до PP5, а також особливості їхнього використання у Вестерн-блот аналізі та імунопреципітації. Методи. Гібридомну технологію застосовано для отримання моноклональних антитіл. Імунізацію проводили рекомбінантним злитим білком GST-таг, синтезованим у бактерійній системі. Результати. Одержано специфічні моноклональні антитіла проти РР5. Висновки. Моноклональні антитіла специфічно розпізнають рекомбінантну та ендогенну PP5 у Вестерн-блот анализі та імунопреципітації. Вони можуть стати необхідним інструментом при дослідженні фізіологічної ролі PP5.Цель. Серин-треониновая протеинфосфатаза 5 (PP5) является уникальным членом семейства серин-треонинових протеинфосфатаз, поскольку содержит регуляторные тетратрикопептидные повторы (TPR). PP5 активно участвует в процессах сигнальной трансдукции. Описаны процедура получения моноклональных антител, специфичных к PP5, а также особенности их использования в Вестерн-блот анализе и иммунопреципитации. Методы. Гибридомная технология применена для получения моноклональных антител. Иммунизацию проводили рекомбинантным слитым белкомGST-таг, синтезированным в бактериальной системе. Результаты. Получены специфические моноклональные антитела против РР5. Выводы. Моноклональные антитела специфично распознают рекомбинантную и эндогенную PP5 в Вестерн-блот анализе и иммунопреципитации. Они могут стать необходимым инструментом при исследовании физиологической роли PP5

Generation of monoclonal antibodies specific to ribosomal protein S6 kinase 1

The aim of this study was to produce monoclonal antibodies directed to the N-terminal regulatory region of S6K1, which shows very low homology to S6K2. Methods. Hybridoma technology, ELISA, Western blot, Immunoprecipitation. Results. Three hybridoma clones (A1, A2 and A3) producing mAbs specific to ribosomal protein S6 kinase 1 have been generated. Specificity of mAbs has been confirmed by Western blot and immunoprecipitation technique. Conclusions. The obtained antibodies are suitable for elucidating signal transduction pathways involving S6K1. Keywords: ribosomal protein S6 kinase, mAbs.Мета. Отримати моноклональні антитіла проти N-кінцевої регуляторної ділянки кінази рибосомного білка S6-S6K1, який має низький рівень гомології з ізоформою S6K2. Методи. Гібридомна технологія, ІФА, Вестерн-блот, імунопреципітація. Результати. Створено тригібридомних клони (A1, A2 і A3), які продукують моноклональні антитіла, специфічні до кінази S6K1. Висновки. Одержані моноклональні антитіла за своїми характеристикам можна використовувати для дослідження S6K1-залежних сигнальних шляхів. Ключові слова: кіназа рибосомного білка S6, МкАТ.Цель. Получить моноклональные антитела против N-концевого регуляторного участка киназы рибосомного белка S6 – S6K1, имеющего низкий уровень гомологии с S6K2 изоформой. Методы. Гибридомная технология, ИФА, Вестерн-блот, иммунопреципитация. Результаты. Созданы три гибридомных клона (A1, A2 и A3), продуцирующих моноклональные антитела, специфичные к киназе S6K1. Специфичность антител подтверждена методами Вестерн блота и иммунопреципитации. Выводы. Полученные моноклональные антитела по своим характеристикам можно использовать для изучения S6K1-зависимых сигнальных путей. Ключевые слова: киназа рибосомного белка S6, МкАТ

Phospho-mTOR (Ser2481) colocalizes with condensed chromosomes during metaphase

Aim. To study the subcellular localization of phospho-mTOR (Ser2481) in cultured cells of human cancer cell lines. Methods. Immunofluorescent analysis of phospho-mTOR (Ser2481) subcellular localization in cultured MCF-7 (human breast adenocarcinoma) and HepG2 (human liver carcinoma) cells. Results. For the first time phospho-mTOR (Ser2481) was detected as bright spots situated in the equatorial region of chromosomes and colocalized with condensed chromosomes during metaphase. Conclusions. In this study, we describe for the first time the co-localization of phospho-mTOR (Ser2481) and chromosomes of the metaphase plate in the MCF-7 and HepG2 cells. Our data support the hypothesis that phospho-mTOR (Ser2481) could act as a CPP (chromosomal passenger protein)-like kinase, which takes part in the regulation of mitosis progression.Мета. Дослідити внутрішньоклітинну локалізацію phospho-mTOR (Ser2481) в лініях ракових клітин людини. Методи. Подвійний імунофлуоресцентний аналіз. Культивовані клітини ліній MCF-7 (аденокарцинома молочної залози людини) і HepG2 (карцинома печінки людини). Результати. Вперше phospho-mTOR (Ser2481) був виявлений у вигляді яскравих точок, які розташовувались в екваторіальній області клітини та співлокалізувались з конденсованими хромосомами під час метафази. Висновки. У цьому дослідженні ми вперше описуємо співлокалізацію phospho-mTOR (Ser2481) і хромосом метафазної пластинки у клітинах ліній MCF-7 і HepG2. Наші дані підкріплюють гіпотезу, що phospho-mTOR (Ser2481) може виступати в якості СРР-кінази і брати участь у регуляції проходження мітозу.Цель. Исследовать внутриклеточную локализацию phospho-mTOR (Ser2481) в раковых клеточных линиях человека. Методы. Двойной иммунофлуоресцентный анализ. Культивированные клетки линий MCF-7 (аденокарцинома молочной железы человека) и HepG2 (карцинома печени человека). Результаты. Впервые phospho-mTOR (Ser2481) был обнаружен в виде ярких точек, которые располагались в экваториальной области клетки и колокализировались с конденсированными хромосомами во время метафазы. Выводы. В этом исследовании мы впервые описываем колокализацию phospho-mTOR (Ser2481) и хромосом метафазной пластинки в клетках линий MCF-7 и HepG2. Наши данные подкрепляют гипотезу, что phospho-mTOR (Ser2481) может выступать в качестве СРР-киназы и участвовать в регуляции прохождения митоза

Identification of tumor-associated antigens in human thyroid papillar carcinoma

In this study two cDNA expressing libraries generated from thyroid papillar carcinomas were screened using SEREX approach. Thirty positive cDNA clones representing seventeen different genes were identified from both libraries. It is important to note, that three of them were isolated previously by other laboratories in SEREX screens of various types of human cancer. These include transcription factor NZF, a-catenin and BAG RP11 — a protein with unknown function. Moreover, we identified a whole panel of novel potential tumor-associated antigens, which would be further investigated. We are particularly interested in more detailed analysis of cathepsin H and transducer of ErbB2 (TOB2), which are differentially expressed in various types of human cancer. We will analyse the frequency of autoantibodies against identified antigens in sera of patients with various malignancies and healthy donors by heterologous screening. It is expected that among the clones isolated in this study, there might be novel cancer-associated markers.З двох зразків тканини папіломи щитовидної залози людини отримано дві кДНК експресуючі бібліотеки. Імуноскринуванням бібліотек методом SEREX ідентифіковано 30 пози­тивних клонів, які відповідали 17 різним генам. Потрібно відмітити, що три гени – транскрипційний фактор NZF, α-катенін і білок ВАС RP11 з поки невідомою функцією – раніше виявлено в інших лабораторіях методом SEREX, де скрикували бібліотеки з різних типів пухлин людини. Серед решти ідентифікованих генів найцікавішими є катепсин Н (cathepsin Н) и ТОВ2 (transducer of ErbB2), підвищену екс­пресію яких було знайдено в багатьох злоякісних пухлинах людини. Подальші дослідження буде направлено на виявлення частоти зустрічальності антитіл проти даних антигенів у сироватках крові хворих на рак різної етіології та здорових донорів. Серед визначених у нашій лабораторії нових SEREX позитивних клонів є потенційні маркери злоякісних новоутво­рень щитовидної залози людини.кДНК экспрессирующие библиотеки получены из двух образцов ткани злокачественной папилломы щитовидной железы человека. Иммуноскрининг библиотек методом SEREX дал воз­можность идентифицировать 30 положительных клонов, представляющих собой продукты 17 различных генов. Следует отметить, что три гена — транскрипционный фактор NZF, а-катенин и белок с неизвестной функцией ВАС RP11 – выявлены ранее в других лабораториях SEREX скринингом библиотек из различных типов опухолей человека. Среди ос­тальных идентифицированных генов наибольший интерес представляют катепсин Н (cathepsin Н) и ТОВ2 (transducer of ErbB2), повышенная экспресия которых выявлена во многих злокачественных опухолях человека. Дальнейшие исследования будут направлены на установление частоты встречаемости антител против данных антигенов в сыворотках крови боль­ных раком различной этиологии и здоровых доноров. Среди выявленных нами новых SEREX положительных клонов могут быть потенциальные маркеры злокачественных новообразова­ний щитовидной железы человека

Generation of monoclonal antibody against protein phosphatase 5

Aim. Serine/threonine protein phosphatase 5 (PP5) is a unique member of serine/threonine phosphatase family, comprises a regulatory tetratricopeptide repeat (TPR) domain and regulates many cell signaling pathways. Here, we describe the development of a PP5 specific monoclonal antibody (mAb) and characterize its suitability for Western blotting and immunoprecipitation. Methods. Hybridoma technology has been used for monoclonal antibody generation. Immunization was carried out with recombinant mouse PP5 expressed in Escherichia coli as a GST-tagged fusion protein. Results. mAb against PP5 has been generated. Conclusions. Generated mAb specifically recognizes recombinant and endogenous mouse and rat PP5 and is suitable for Western blotting and immunoprecipitation. This mAb will be useful tool for investigations of PP5 physiological role.Мета. Серин-треонінова протеїнфосфатаза 5 (PP5) є унікальним членом родини серин-треонінових протеїнфосфатаз, оскільки містить регуляторні тетратрикопептидні повтори (TPR). PP5 бере активну участь у процесах сигнальної трансдукції. Описано процедуру отримання моноклональних антитіл, специфічних до PP5, а також особливості їхнього використання у Вестерн-блот аналізі та імунопреципітації. Методи. Гібридомну технологію застосовано для отримання моноклональних антитіл. Імунізацію проводили рекомбінантним злитим білком GST-таг, синтезованим у бактерійній системі. Результати. Одержано специфічні моноклональні антитіла проти РР5. Висновки. Моноклональні антитіла специфічно розпізнають рекомбінантну та ендогенну PP5 у Вестерн-блот анализі та імунопреципітації. Вони можуть стати необхідним інструментом при дослідженні фізіологічної ролі PP5.Цель. Серин-треониновая протеинфосфатаза 5 (PP5) является уникальным членом семейства серин-треонинових протеинфосфатаз, поскольку содержит регуляторные тетратрикопептидные повторы (TPR). PP5 активно участвует в процессах сигнальной трансдукции. Описаны процедура получения моноклональных антител, специфичных к PP5, а также особенности их использования в Вестерн-блот анализе и иммунопреципитации. Методы. Гибридомная технология применена для получения моноклональных антител. Иммунизацию проводили рекомбинантным слитым белкомGST-таг, синтезированным в бактериальной системе. Результаты. Получены специфические моноклональные антитела против РР5. Выводы. Моноклональные антитела специфично распознают рекомбинантную и эндогенную PP5 в Вестерн-блот анализе и иммунопреципитации. Они могут стать необходимым инструментом при исследовании физиологической роли PP5