Antimicrobial and Antibiofilm Activities of Carvacrol, Amoxicillin and Salicylhydroxamic Acid Alone and in Combination vs. Helicobacter pylori: Towards a New Multi-Targeted Therapy

The World Health Organization has indicated Helicobacter pylori as a high-priority pathogen whose infections urgently require an update of the antibacterial treatments pipeline. Recently, bacterial ureases and carbonic anhydrases (CAs) were found to represent valuable pharmacological targets to inhibit bacterial growth. Hence, we explored the underexploited possibility of developing a multiple-targeted anti-H. pylori therapy by assessing the antimicrobial and antibiofilm activities of a CA inhibitor, carvacrol (CAR), amoxicillin (AMX) and a urease inhibitor (SHA), alone and in combination. Minimal Inhibitory (MIC) and Minimal Bactericidal (MBC) Concentrations of their different combinations were evaluated by checkerboard assay and three different methods were employed to assess their capability to eradicate H. pylori biofilm. Through Transmission Electron Microscopy (TEM) analysis, the mechanism of action of the three compounds alone and together was determined. Interestingly, most combinations were found to strongly inhibit H. pylori growth, resulting in an additive FIC index for both CAR-AMX and CAR-SHA associations, while an indifferent value was recorded for the AMX-SHA association. Greater antimicrobial and antibiofilm efficacy of the combinations CAR-AMX, SHA-AMX and CAR-SHA against H. pylori were found with respect to the same compounds used alone, thereby representing an innovative and promising strategy to counteract H. pylori infections

Profili di salute soggettivi e oggettivi: una combinazione vincente

<p><strong>Introduzione</strong>: nella valutazione prospettica dell’impegno assistenziale richiesto o retrospettiva del risultato di salute ottenuto, entrambi collegabili a meccanismi retributivi, diventa sempre più importante usare sintetici descrittori di severità/complessità/outcome. In quest’ottica abbiamo studiato con strumenti oggettivi (Charlson Index Score-CSI) e soggettivi (SF36) lo stato di salute di pazienti non ospedalizzati. Obiettivo: confrontare e correlare i livelli di salute registrati con i due strumenti.</p><p><strong>Materiali e Metodi</strong>: il CSI è un indice che considera numero e severità delle copatologie. Il questionario SF36 studia lo stato di salute percepito attraverso 8 domini. Sono stati studiati 137 pazienti di un Medico di Medicina Generale, che ha fornito età, sesso, livello di istruzione e stato civile dei pazienti. È stato creato un modello di regressione in cui il punteggio del CSI costituiva la variabile dipendente e le quattro scale dell’SF36 che sono risultate correlate con il CSI le variabili indipendenti. Risultati: è stata identificata correlazione tra i punteggi del CSI e le scale Salute Generale (SG) (Coefficiente di Spearman 0,38 p‹0,001), Attività Fisica (AF) (C.S. 0,35 p‹0,001), Ruolo Fisico (RF) (C.S. 0,37 p‹0,001), Ruolo Emotivo (RE) (C.S. 0,25 p=0,003). Aggiustando il CSI e le suddette 4 scale dell’SF 36 per “sesso”, “livello di istruzione” e “stato civile”, si è trovato che: (i) “stato civile” influenza l’associazione tra RF e CSI (crude O.R. 1,71, p‹0,001; O.R. coniugati 1,47 p= 0,025; O.R. non coniugati 3,05 p‹ 0,001) e SG e CSI (crude O.R. 1,76 p‹0,001; O.R. stato civile 1,61 p=0,006); (ii) “livello di istruzione” influenza l’associazione tra AF e CSI (crude O.R. 1,88 p‹0,001; O.R. livello di istruzione 1,76 p=0,001) e SG e CSI (crude O.R. 1,76 p‹0,001; O.R. elevata istruzione 1,22 p=0,33; O.R. scarsa istruzione 2,69 p‹0,001).</p><p><strong>Conclusioni</strong>: la correlazione tra i punteggi del CSI e le scale dell’SF36 (in particolare quelle relative all’area fisica) consente di ipotizzare un utilizzo integrato dei due strumenti e conferma l’affidabilità delle percezioni dei pazienti nell’ ”oggettivare” la propria salute.</p&gt

Nuovi strumenti di valutazione epidemiologica: indagine sullo stato di salute percepita da studenti universitari

<p><strong>Introduzione</strong>: gli strumenti “soggettivi” di valutazione dello stato di salute appaiono sempre più utili per l’epidemiologia descrittiva di popolazioni e comunità. Il profilo di salute ottenuto con strumenti psicometrici è utilizzabile come analizzatore del bisogno assistenziale (e, conseguentemente, valutatore del risultato di interventi e attività sanitarie) e si affianca ormai diffusamente alle più tradizionali misure “oggettive”. <strong></strong></p><p><strong>Obiettivo</strong>: descrivere il profilo di salute percepita dagli studenti e valutare il ruolo sullo stesso di alcune variabili.</p><p><strong>Materiali</strong> e <strong>Metodi</strong>: il questionario SF36 descrive lo stato di salute attraverso 8 domini, alcuni correlati con l’area fisica, altri con quella psicologica/sociale. Esso è stato distribuito a 380 studenti (179 esaminandi e 201 non esaminandi): 237 (62,4%) femmine, 261 (68,7%) non residenti nella provincia di Siena; età media 21 anni (range 18-41). Sono state calcolate le medie delle scale e confrontate con lo standard tramite il t test. Sono stati effettuati confronti per sesso, residenza e giorno di somministrazione del questionario (esame, non esame). Con il test del Chi quadrato si è verificato se le variabili sesso, età, residenza e giorno di somministrazione fossero associate alle 8 scale. Come standard di riferimento sono stati utilizzati i valori (fascia età 18-24 anni) derivati da una indagine condotta dalla DOXA in Italia nel 1995 (progetto IQOLA). Risultati: le medie delle scale del campione risultano tutte inferiori a quelle della popolazione di riferimento; la differenza non è significativa (p›0,05). Le medie femminili presentano valori inferiori a quelle maschili in tutte le scale; le differenze sono significative (p‹0,05) eccetto che per Dolore Fisico. Le medie dei residenti risultano superiori o uguali a quelle dei non residenti (p›0,05). Le medie dei non esaminandi appaiono superiori a quelle degli esaminandi tranne per Dolore Fisico; la differenza è significativa solo per Salute Mentale (p=0,05). La variabile sesso è quella più legata allo stato di salute e correla con Salute Generale, Ruolo Fisico, Ruolo Emotivo, Attività Sociali, Dolore Fisico e Salute mentale; il giorno di somministrazione è correlato con Vitalità.</p><p><strong>Conclusioni</strong>: lostatodisalutepercepitadeglistudentiappareinferiore a quello dei coetanei della popolazione di riferimento. Profili migliori sono stati trovati nei maschi e nei residenti. Il momento dell’esame universitario produce uno scadimento dello stato di salute percepita, significativo per la “salute mentale”. È evidente l’interesse che tali indagini sottendono per le istituzioni accademiche ed anche per quelle economiche e politiche</p&gt

Phosphoproteomics of CD2 signaling reveals AMPK-dependent regulation of lytic granule polarization in cytotoxic T cells

Understanding the costimulatory signaling that enhances the activity of cytotoxic T cells (CTLs) could identify potential targets for immunotherapy. Here, we report that CD2 costimulation plays a critical role in target cell killing by freshly isolated human CD8+ T cells, which represent a challenging but valuable model to gain insight into CTL biology. We found that CD2 stimulation critically enhanced signaling by the T cell receptor in the formation of functional immune synapses by promoting the polarization of lytic granules toward the microtubule-organizing center (MTOC). To gain insight into the underlying mechanism, we explored the CD2 signaling network by phosphoproteomics, which revealed 616 CD2-regulated phosphorylation events in 373 proteins implicated in the regulation of vesicular trafficking, cytoskeletal organization, autophagy, and metabolism. Signaling by the master metabolic regulator AMP-activated protein kinase (AMPK) was a critical node in the CD2 network, which promoted granule polarization toward the MTOC in CD8+ T cells. Granule trafficking was driven by active AMPK enriched on adjacent lysosomes, revealing previously uncharacterized signaling cross-talk between vesicular compartments in CD8+ T cells. Our results thus establish CD2 signaling as key for mediating cytotoxic killing and granule polarization in freshly isolated CD8+ T cells and strengthen the rationale to choose CD2 and AMPK as therapeutic targets to enhance CTL activity

Proteolytic activity of bovine lactoferrin RID C-3677-2011 RID A-4573-2009

Bovine lactoferrin catalyzes the hydrolysis of synthetic substrates (i.e., Z-aminoacyl-7-amido-4-methylcoumarin). Values of K-m and k(cat) for the bovine lactoferrin catalyzed hydrolysis of Z-Phe-Arg-7-amido-4-methylcoumarin are 50 muM and 0.03 s(-1), respectively, the optimum pH value is 7.5 at 25 degreesC. The bovine lactoferrin substrate specificity is similar to that of trypsin, while the hydrolysis rate is several orders of magnitude lower than that of trypsin. The bovine lactoferrin catalytic activity is irreversibly inhibited by the serine-protease inhibitors PMSF and Pefabloc. Moreover, both iron-saturation of the protein and LPS addition strongly inhibit the bovine lactoferrin activity. Interestingly, bovine lactoferrin undergoes partial auto-proteolytic cleavage at positions Arg415-Lys 416 and Lys440-Lys441.pK(a) shift calculations indicate that several Ser residues of bovine lactoferrin display the high nucleophilicity required to potentially catalyze substrate cleavage. However, a definitive identification of the active site awaits further studies

A role for phosphatidic acid in COPI vesicle fission yields insights into Golgi maintenance

Proteins essential for vesicle formation by the Coat Protein I (COPI) complex are being identified, but less is known about the role of specific lipids. Brefeldin-A ADP-ribosylated substrate (BARS) functions in the fission step of COPI vesicle formation. Here, we show that BARS induces membrane curvature in cooperation with phosphatidic acid. This finding has allowed us to further delineate COPI vesicle fission into two sub-stages: 1) an earlier stage of bud-neck constriction, in which BARS and other COPI components are required, and 2) a later stage of bud-neck scission, in which phosphatidic acid generated by phospholipase D2 (PLD2) is also required. Moreover, in contrast to the disruption of the Golgi seen on perturbing the core COPI components (such as coatomer), inhibition of PLD2 causes milder disruptions, suggesting that such COPI components have additional roles in maintaining Golgi structure other than through COPI vesicle formation