1 research outputs found
Effect of Trehalose and Glycerol on the Resistance of Recombinant Saccharomyces cerevisiae Strains to Desiccation, Freeze-thaw and Osmotic Stresses
Introduction. Baker's yeast Saccharomyces cerevisiae has been used for manufacturing bakery products, food and
feed supplements, alcoholic fermentation etc. In biotechnological processes, yeast cells are exposed to stress factors (high
concentration of sugars and ethanol, high temperature, desiccation or freezing etc.), which negatively affects their viability.
Yeasts possess certain stress protection systems, including increased accumulation of disaccharide trehalose and glycerol
synthesis.
Problem Statement. The strengthening of yeast protective systems by increasing glycerol or trehalose concentrations
can help to get increased stress robustness of the S. cerevisiae strains.
Purpose. To construct the recombinant strains of S. cerevisiae with increased trehalose accumulation or glycerol
production and to estimate the obtained recombinant strains resistance to a range of stress factors.
Materials and Methods. S. Ρerevisiae transformation has been performed using Li-Ac-PEG method. Alcoholic fermentation
has been carried out at a temperature of 30 Β°C with stirring at a rate of 120 rpm.
Results. The recombinant strains of S. cerevisiae with enhanced glycerol production (up to 19 g/L) have been constructed
based on BY4742. The industrial ethanol-producing strain Y-563 has been used as parental one for construction of
recombinant strains with up to 3.3-fold increase in the intracellular trehalose level. The resistance of obtained recombinant
strains to different stress factors has been evaluated. BY/TPI25/gpd1gpp2f/fps1 strain with the highest glycerol
production has been established to have the highest osmotolerance. The BY/TPI25/gpd1gpp2f, 563/TSL1, 563/TPS1/2
and 563/TPS1/2/TSL1 strains have shown higher viability after freeze-thaw as compared with the corresponding parental
strains, but not higher resistance to desiccation. The recombinant strain 563/TPS1/2/TSL1 with a high trehalose content
have been established to have higher activity during fermentation of sugar in sweet dough and to longer keep stable at
35 Β°Π‘ as compared with the initial strain Y-563.
Conclusions. Constructed recombinant strains of S. cerevisiae with higher osmotolerance or freeze-thaw resistance
can be implemented in industrial processes accompanied with these types of stresses. Baker's yeast made of high trehalose-
containing biomass will have prolonged shelf life.ΠΡΡΡΠΏ. ΠΠ΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠΊΡ Π΄ΡΡΠΆΠ΄ΠΆΡ Saccharomyces cerevisiae Π²ΠΈΠΊΠΎΡΠΈΡΡΠΎΠ²ΡΡΡΡ Ρ Π²ΠΈΡΠΎΠ±Π½ΠΈΡΡΠ²Ρ Ρ
Π»ΡΠ±ΠΎΠ±ΡΠ»ΠΎΡΠ½ΠΈΡ
Π²ΠΈΡΠΎΠ±ΡΠ², Ρ
Π°ΡΡΠΎΠ²ΠΈΡ
ΡΠ° ΠΊΠΎΡΠΌΠΎΠ²ΠΈΡ
Π΄ΠΎΠ±Π°Π²ΠΎΠΊ, Π°Π»ΠΊΠΎΠ³ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΡΡ ΡΠΎΡΠΎ. Π£ Π±ΡΠΎΡΠ΅Ρ
Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΡΡΠ½ΠΈΡ
ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΠ°Ρ
ΠΊΠ»ΡΡΠΈΠ½ΠΈ Π΄ΡΡΠΆΠ΄ΠΆΡΠ² Π·Π°Π·Π½Π°ΡΡΡ Π΄ΡΡ Π·Π½Π°ΡΠ½ΠΎΡ ΠΊΡΠ»ΡΠΊΠΎΡΡΡ ΡΡΡΠ΅ΡΠΎΠ²ΠΈΡ
ΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΡΠ² (Π²ΠΈΡΠΎΠΊΠ° ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΡΡ ΡΡΠΊΡΡ ΡΠ° Π΅ΡΠ°Π½ΠΎΠ»Ρ, ΠΏΡΠ΄Π²ΠΈΡΠ΅Π½Π° ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ°, Π²ΠΈΡΡΡΡΠ²Π°Π½Π½Ρ Π°Π±ΠΎ Π·Π°ΠΌΠΎΡΠΎΠΆΡΠ²Π°Π½Π½Ρ ΡΠΎΡΠΎ), ΡΠΎ Π½Π΅Π³Π°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎ Π²ΠΏΠ»ΠΈΠ²Π°Ρ Π½Π° ΡΡ
ΠΆΠΈΡΡΡΠ·Π΄Π°ΡΠ½ΡΡΡΡ. ΠΡΡΠΆΠ΄ΠΆΡ Π²ΠΎΠ»ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ ΠΏΠ΅Π²Π½ΠΈΠΌΠΈ
ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°ΠΌΠΈ Π·Π°Ρ
ΠΈΡΡΡ Π²ΡΠ΄ ΡΡΡΠ΅ΡΡ, Π·ΠΎΠΊΡΠ΅ΠΌΠ° Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠ΅Π½Π½Ρ Π΄ΠΈΡΠ°Ρ
Π°ΡΠΈΠ΄Ρ ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·ΠΈ ΡΠ° ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ²Π°Π½Π½Ρ Π³Π»ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ½Ρ.
ΠΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌΠ°ΡΠΈΠΊΠ°. ΠΠΎΡΠΈΠ»Π΅Π½Π½Ρ Π΄ΡΡ Π·Π°Ρ
ΠΈΡΠ½ΠΈΡ
ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌ Π΄ΡΡΠΆΠ΄ΠΆΡΠ² ΡΠ»ΡΡ
ΠΎΠΌ Π·Π±ΡΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΡΡ Π³Π»ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ½Ρ Π°Π±ΠΎ
ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·ΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅ Π½Π°Π΄Π°ΡΠΈ Π±ΡΠ»ΡΡΠΎΡ ΡΡΡΠ΅ΡΠΎΡΡΡΠΉΠΊΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°ΠΌΠ°ΠΌ S. cerevisiae.
ΠΠ΅ΡΠ°. ΠΠΎΠ½ΡΡΡΡΡΠ²Π°Π½Π½Ρ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΡΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΈΡ
ΡΡΠ°ΠΌΡΠ² S. cerevisiae Π· ΠΏΡΠ΄Π²ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠΌ ΡΡΠ²Π½Π΅ΠΌ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠ΅Π½Π½Ρ ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·ΠΈ Π°Π±ΠΎ
ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ²Π°Π½Π½Ρ Π³Π»ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ½Ρ ΡΠ° ΠΎΡΡΠ½ΠΊΠ° ΡΡΡΠΉΠΊΠΎΡΡΡ ΠΎΡΡΠΈΠΌΠ°Π½ΠΈΡ
ΡΡΠ°ΠΌΡΠ² Π΄ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΈ ΡΡΡΠ΅ΡΠΎΠ²ΠΈΡ
ΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΡΠ².
ΠΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ°Π»ΠΈ ΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈ. Π’ΡΠ°Π½ΡΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΡΡ S. cerevisiae Π·Π΄ΡΠΉΡΠ½ΡΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Li-Ac-PEG. ΠΠ»ΠΊΠΎΠ³ΠΎΠ»ΡΠ½Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΡΡ
Π·Π΄ΡΠΉΡΠ½ΡΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ 30 Β°Π‘ ΠΏΡΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΡΡΡΠ²Π°Π½Π½Ρ Π·Ρ ΡΠ²ΠΈΠ΄ΠΊΡΡΡΡ 120 ΠΎΠ±/Ρ
Π².
Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΈ. ΠΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Ρ ΡΡΠ°ΠΌΡ S. cerevisiae BY4742 Π±ΡΠ»ΠΎ ΡΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΉΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΡΠ½Π°Π½ΡΠ½Ρ ΡΡΠ°ΠΌΠΈ Π· ΠΏΡΠ΄Π²ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠΌ
ΡΡΠ²Π½Π΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ²Π°Π½Π½Ρ Π³Π»ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ½Ρ (Π΄ΠΎ 19 Π³/Π»). ΠΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΠΈΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°ΠΌΡ Y-563 ΡΠΊ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠ΅Π½ΡΠ° Π΅ΡΠ°Π½ΠΎΠ»Ρ Π±ΡΠ»ΠΎ
ΡΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΉΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΡΠ½Π°Π½ΡΠ½Ρ ΡΡΠ°ΠΌΠΈ Π· ΠΏΡΠ΄Π²ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠΌ Π² 3,3 ΡΠ°Π·ΠΈ Π²Π½ΡΡΡΡΡΠ½ΡΠΎΠΊΠ»ΡΡΠΈΠ½Π½ΠΈΠΌ Π²ΠΌΡΡΡΠΎΠΌ ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·ΠΈ. ΠΠΈΠ·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΎ
ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΡΡΡ ΠΎΡΡΠΈΠΌΠ°Π½ΠΈΡ
ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΡΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΈΡ
ΡΡΠ°ΠΌΡΠ² Π΄ΠΎ ΡΡΠ·Π½ΠΈΡ
ΡΡΡΠ΅ΡΠΎΠ²ΠΈΡ
ΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΡΠ². Π¨ΡΠ°ΠΌ BY/TPI25/gpd1gpp2f/fps1 Π·
Π½Π°ΠΉΠ²ΠΈΡΠΈΠΌ ΡΡΠ²Π½Π΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡΡ Π³Π»ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ½Ρ Π²ΠΈΡΠ²Π»ΡΠ² Π½Π°ΠΉΠ²ΠΈΡΡ ΠΎΡΠΌΠΎΡΠΎΠ»Π΅ΡΠ°Π½ΡΠ½ΡΡΡΡ. Π¨ΡΠ°ΠΌΠΈ BY/TPI25/gpd1gpp2f, 563/
TSL1, 563/TPS1/2 ΡΠ° 563/TPS1/2/TSL1 Ρ
Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ·ΡΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ ΠΏΡΠ΄Π²ΠΈΡΠ΅Π½ΠΎΡ ΠΆΠΈΡΡΡΠ·Π΄Π°ΡΠ½ΡΡΡΡ ΠΏΡΡΠ»Ρ Π·Π°ΠΌΠΎΡΠΎΠΆΡΠ²Π°Π½Π½Ρ-
ΡΠΎΠ·ΠΌΠΎΡΠΎΠΆΡΠ²Π°Π½Π½Ρ ΠΏΠΎΡΡΠ²Π½ΡΠ½ΠΎ Π· Π±Π°ΡΡΠΊΡΠ²ΡΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΡΡΠ°ΠΌΠ°ΠΌΠΈ, ΠΏΡΠΎΡΠ΅ Π½Π΅ Π²ΠΈΡΠ²Π»ΡΠ»ΠΈ Π²ΠΈΡΠΎΡ ΡΡΡΠΉΠΊΠΎΡΡΡ Π΄ΠΎ Π²ΠΈΡΡΡΡΠ²Π°Π½Π½Ρ.
Π Π΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΡΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΈΠΉ ΡΡΠ°ΠΌ 563/TPS1/2/TSL1 Π· Π²ΠΈΡΠΎΠΊΠΈΠΌ Π²ΠΌΡΡΡΠΎΠΌ ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·ΠΈ Π²ΠΈΡΠ²Π»ΡΠ² Π²ΠΈΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ Π·Π±ΡΠΎΠ΄ΠΆΡΠ²Π°Π½Π½Ρ
ΡΡΠΊΡΡ Π² Π·Π΄ΠΎΠ±Π½ΠΎΠΌΡ ΡΡΡΡΡ ΡΠ° Π΄ΠΎΠ²ΡΠ΅ Π·Π±Π΅ΡΡΠ³Π°Π² ΠΆΠΈΡΡΡΠ²ΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ 35 Β°Π‘, ΠΏΠΎΡΡΠ²Π½ΡΠ½ΠΎ Π· Π±Π°ΡΡΠΊΡΠ²ΡΡΠΊΠΈΠΌ ΡΡΠ°ΠΌΠΎΠΌ Y-563.
ΠΠΈΡΠ½ΠΎΠ²ΠΊΠΈ. Π‘ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΉΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΡΠ½Π°Π½ΡΠ½Ρ ΡΡΠ°ΠΌΠΈ S. cerevisiae ΠΌΠΎΠΆΡΡΡ Π±ΡΡΠΈ Π²ΠΈΠΊΠΎΡΠΈΡΡΠ°Π½Ρ Π² ΠΏΡΠΎΠΌΠΈΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ
ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΠ°Ρ
, ΡΠΎ ΡΡΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΆΡΡΡΡΡΡ Π·Π°ΠΌΠΎΡΠΎΠΆΡΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ-ΡΠΎΠ·ΠΌΠΎΡΠΎΠΆΡΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΊΠ»ΡΡΠΈΠ½ Π΄ΡΡΠΆΠ΄ΠΆΡΠ² Π°Π±ΠΎ Π²ΠΈΡΠΎΠΊΠΈΠΌ ΠΎΡΠΌΠΎΡΠΈΡΠ½ΠΈΠΌ ΡΠΈΡΠΊΠΎΠΌ Ρ ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π΄ΠΎΠ²ΠΈΡΡ. Π₯Π»ΡΠ±ΠΎΠΏΠ΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠΊΡ Π΄ΡΡΠΆΠ΄ΠΆΡ Π· ΠΏΡΠ΄Π²ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠΌ Π²Π½ΡΡΡΡΡΠ½ΡΠΎΠΊΠ»ΡΡΠΈΠ½Π½ΠΈΠΌ Π²ΠΌΡΡΡΠΎΠΌ ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·ΠΈ ΠΌΠ°ΡΡΡ Π±ΡΠ»ΡΡ ΡΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΡΠ½ Π·Π±Π΅ΡΡΠ³Π°Π½Π½Ρ.ΠΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅. ΠΠ΅ΠΊΠ°ΡΡΠΊΠΈΠ΅ Π΄ΡΠΎΠΆΠΆΠΈ Saccharomyces cerevisiae ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ Ρ
Π»Π΅Π±ΠΎΠ±ΡΠ»ΠΎΡΠ½ΡΡ
ΠΈΠ·Π΄Π΅Π»ΠΈΠΉ,
ΠΏΠΈΡΠ΅Π²ΡΡ
ΠΈ ΠΊΠΎΡΠΌΠΎΠ²ΡΡ
Π΄ΠΎΠ±Π°Π²ΠΎΠΊ, Π°Π»ΠΊΠΎΠ³ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈ Ρ.Π΄. Π Π±ΠΈΠΎΡΠ΅Ρ
Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ°Ρ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ Π΄ΡΠΎΠΆΠΆΠ΅ΠΉ
ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΡΡΠ΅ΡΡΠΎΠ²ΡΡ
ΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΠΎΠ² (Π²ΡΡΠΎΠΊΠ°Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ°Ρ
Π°ΡΠ° ΠΈ ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π°,
ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ°, Π²ΡΡΡΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠ»ΠΈ Π·Π°ΠΌΠΎΡΠ°ΠΆΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ΅), ΡΡΠΎ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π²Π»ΠΈΡΠ΅Ρ Π½Π° ΠΈΡ
ΠΆΠΈΠ·Π½Π΅ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ. ΠΡΠΎΠΆΠΆΠΈ Π²Π»Π°Π΄Π΅ΡΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°ΠΌΠΈ Π·Π°ΡΠΈΡΡ ΠΎΡ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ°, Π² ΡΠ°ΡΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄ΠΈΡΠ°Ρ
Π°ΡΠΈΠ΄Π° ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·Ρ ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½Π°.
ΠΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌΠ°ΡΠΈΠΊΠ°. Π£ΡΠΈΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π·Π°ΡΠΈΡΠ½ΡΡ
ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌ Π΄ΡΠΎΠΆΠΆΠ΅ΠΉ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½Π° ΠΈΠ»ΠΈ
ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠΎΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΠΈ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠΎΠ² S. cerevisiae.
Π¦Π΅Π»Ρ. ΠΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ
ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠΎΠ² S. cerevisiae Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΌ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½Π°, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠ° ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠΎΠ² ΠΊ ΡΡΠ΄Ρ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠΎΠ²ΡΡ
ΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΠΎΠ².
ΠΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Ρ ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ. Π’ΡΠ°Π½ΡΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΡ S. cerevisiae Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Li-Ac-PEG. ΠΠ»ΠΊΠΎΠ³ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΡ
ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ 30 Β°Π‘ ΠΏΡΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠΎ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡΡ 120 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½.
Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ. ΠΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠ° S. cerevisiae BY4742 Π±ΡΠ»ΠΈ ΡΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΡ Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½Π° (Π΄ΠΎ 19 Π³/Π»). ΠΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠΌΡΡΠ»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠ° Y-563 ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠ΅Π½ΡΠ° ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π° Π±ΡΠ»ΠΎ ΡΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΡ Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌ Π² 3,3 ΡΠ°Π·Π° Π²Π½ΡΡΡΠΈΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΡΠΌ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·Ρ. ΠΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΎ ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ
ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ
ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠΎΠ² ΠΊ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠΌ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠΎΠ²ΡΠΌ
ΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΠ°ΠΌ. Π¨ΡΠ°ΠΌΠΌ BY/TPI25/gpd1gpp2f/fps1 Ρ Π½Π°ΠΈΠ²ΡΡΡΠΈΠΌ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½Π°, ΠΈΠΌΠ΅Π» Π½Π°ΠΈΠ²ΡΡΡΡΡ
ΠΎΡΠΌΠΎΡΠΎΠ»Π΅ΡΠ°Π½ΡΠ½ΠΎΡΡΡ. Π¨ΡΠ°ΠΌΠΌΡ BY/TPI25/gpd1gpp2f, 563/TSL1, 563/TPS1/2 ΠΈ 563/TPS1/2/TSL1 ΠΈΠΌΠ΅Π»ΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΠΆΠΈΠ·Π½Π΅ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ Π·Π°ΠΌΠΎΡΠ°ΠΆΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ-ΡΠ°Π·ΠΌΠΎΡΠ°ΠΆΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΠΎΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»ΡΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠ°ΠΌΠΈ, Π½ΠΎ Π½Π΅ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΠ»ΠΈ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡΠΎΠΉΠΊΠΎΡΡΠΈ ΠΊ Π²ΡΡΡΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ. Π Π΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠ°ΠΌΠΌ 563/TPS1/2/TSL1 Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠΌ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ
ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·Ρ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΠ» Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈ Π±ΡΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ°Ρ
Π°ΡΠ° Π² ΡΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎΠΌ ΡΠ΅ΡΡΠ΅ ΠΈ Π΄ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ ΡΠΎΡ
ΡΠ°Π½ΡΠ» ΠΆΠΈΠ·Π½Π΅ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈ 35 Β°Π‘, ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΠΎΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»ΡΡΠΊΠΈΠΌ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠΎΠΌ Y-563. ΠΡΠ²ΠΎΠ΄Ρ. Π‘ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΡ S. cerevisiae ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ Π² ΠΏΡΠΎΠΌΡΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ°Ρ
, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠΎΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠΆΠ΄Π°ΡΡΡΡ Π·Π°ΠΌΠΎΡΠ°ΠΆΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ-ΡΠ°Π·ΠΌΠΎΡΠ°ΠΆΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π΄ΡΠΎΠΆΠΆΠ΅ΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠΌ ΠΎΡΠΌΠΎΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ Π΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅Π΄Π΅. Π₯Π»Π΅Π±ΠΎΠΏΠ΅ΠΊΠ°ΡΡΠΊΠΈΠ΅ Π΄ΡΠΎΠΆΠΆΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌ Π²Π½ΡΡΡΠΈΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΡΠΌ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ·Ρ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π΄Π»ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠΊ Ρ
ΡΠ°Π½Π΅Π½ΠΈΡ