Régulation de l'expression du gène Pax-3 par les facteurs de transcription Cdx

La formation du tube neural et l'induction de la crête neurale sont des processus importants qui se passent au cours de la neurulation. Le système nerveux central se forme à partir du tube neural, alors que le système nerveux périphérique, le squelette cranio-facial et les mélanocytes se forment à partir de la crête neurale. Cependant, plusieurs maladies génétiques liées au développement anormal du tube neural et de la crête neurale existent chez l'homme. Donc, notre équipe s'est intéressée à faire une recherche au niveau moléculaire dans ce domaine. Le développement du tube neural et des cellules de la crête neurale est influencé par la présence de plusieurs voies de signalisation y compris la voie Wnt. Nous avons focalisé notre étude sur la transcription du gène Pax3 qui code pour un facteur de transcription qui s'exprime dans le tube neural et les cellules pré-migratoires de la crête neurale. L'induction de Pax3, des cellules de la crête neurale ainsi que l'expression des gènes Cdx (Cdx1, Cdx2 et Cdx4) se font par la voie de signalisation Wnt. Le chevauchement de l'expression des gènes Pax3 et Cdx se passe lors de l'induction de la crête neurale à la plaque neurale postérieure aussi bien que pendant la formation du tube neural et des cellules de la crête neurale. Les résultats préliminaires par ChIP ont montré la présence physique de Flag-Cdx1 et Flag-EnRCdx1 sur le promoteur proximal de Pax3. Notre étude par RT-PCR sur la régulation de l'expression de Pax3 par les facteurs de transcription Cdx a démontré la régulation endogène de Pax3 par ces protéines dans les cellules Neuro2a. L'essai Luciférase montre l'induction de l'expression de Pax3 par la surexpression des protéines Cdx et la diminution de son expression par la surexpression du dominant négatif EnRCdx1 dans les cellules Neuro2a. Après avoir identifié les sites potentiels de liaison pour les protéines Cdx sur le promoteur proximal de Pax3, nous avons procédé à une délétion des différentes régions de ce promoteur. On a remarqué la forte induction du promoteur au niveau de NCE (Neural Crest Enhancer). Pourtant, la mutation en combinaison de ces sites n'a pas montré la diminution de l'activité de ce promoteur. Étant donné la présence d'un site potentiel de liaison pour Brn1 sur le promoteur proximal de Pax3, notre étude par l'essai Luciférase a mis en évidence une synergie entre les co-facteurs Cdx2 et Brn1 dans les cellules Neuro2a. Le même phénomène a été observé dans les cellules P19. Pourtant, la mutation du site de Brn1 n'a pas diminué l'activité du promoteur proximal de Pax3. En conclusion, nos résultats mettent en évidence la non fonctionnalité des sites de liaison pour les facteurs de transcription Cdx sur le promoteur proximal de Pax3 ainsi que la synergie entre la protéine Cdx2 et son co-facteur Brn1 dans les cellules Neuro2a ce qui suggère que la régulation directe de Pax3 par les protéines Cdx n'implique pas de liaison des Cdx à l'ADN. \ud ______________________________________________________________________________ \ud MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Neurulation, tube neural, crête neurale, neuroectoderme, système nerveux, voie de signalisation Wnt, transcription, facteur de transcriptio

Solid state synthesis of carbon-encapsulated iron carbide nanoparticles and their interaction with living cells †

Superparamagnetic carbon-encapsulated iron carbide nanoparticles (NPs), Fe 7 C 3 @C, with unique properties, were produced from pure ferrocene by high pressure-high temperature synthesis. These NPs combine the merits of nanodiamonds and SPIONs but lack their shortcomings which limit their use for biomedical applications. Investigation of these NPs by X-ray diffraction, electron microscopy techniques, X-ray spectroscopic and magnetic measurement methods has demonstrated that this method of synthesis yields NPs with perfectly controllable physical properties. Using magnetic and subsequent fractional separation of magnetic NPs from residual carbon, the aqueous suspensions of Fe 7 C 3 @C NPs with an average particle size of $25 nm were prepared. The suspensions were used for in vitro studies of the interaction of Fe 7 C 3 @C NPs with cultured mammalian cells. The dynamics of interaction of the living cells with Fe 7 C 3 @C was studied by optical microscopy using time-lapse video recording and also by transmission electron microscopy. Using novel highly sensitive cytotoxicity tests based on the cell proliferation assay and long-term live cell observations it was shown that the internalization of Fe 7 C 3 @C NPs has no cytotoxic effect on cultured cells and does not interfere with the process of their mitotic division, a fundamental property that ensures the existence of living organisms. The influence of NPs on the proliferative activity of cultured cells was not detected as well. These results indicate that the carbon capsules of Fe 7 C 3 @C NPs are air-tight which could offer great opportunities for future use of these superparamagnetic NPs in biology and medicine

Modifications minimales d'oligonucléotides naturels dans le cadre de la stratégie antisens

PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Solid State Synthesis of Carbon-Encapsulated Iron Carbide Nanoparticles and Their Interaction with Living Cells

International audience[No abstract