新生児および骨髄移植患者のサイトカイン産生態と感染象の特異性に関する研究

金沢大学医学部ヒト末梢血細胞のうち、種々の刺激によりILー1、ILー6を産生する主たる細胞は単球であることを免疫疫組織染色、in situ hybridization法により確認し、臍帯血、成人末梢血を全血のまま刺激する方法でこれらのサイトカイン産生能を検討した。生下時体重1,800gm以上の児ではこれらのサイトカイン産生能は既に成人のレベルに達していたが、存胎30週未満、生下時体重1,500gm以下の極小未熟児では種々の刺激によるILー6の産生が不良なことから、単球のモノカイン産生態は在胎30週前後に成熟に達するものと推察される。また、骨髄移植後のIL6産生能も、かなり早い時期に獲得されるようであるヒト末梢血T細胞におけるCD45抗原群の発現状態を見ると、臍帯血T細胞の殆どはCD45ROー,CD45RA+の形質をもつナイ-ブT細胞からなるが、年令の進むにつれCD45Ro+(メモリ-)T細胞の比率が増す。ウイルス感染症では急性期にCD45RO+T細胞の著増がみられ、回復期にいたり次第2減少する現象がみられ、ヒト末梢血のCD45RO+T細胞の比率は、その個体が生後に受けたな抗原刺激の総和を反映するものかもしれない。臍帯血のCD4+T細胞は殆どがCD45RA+,CD45RO-(ナイ-ブ)T細胞からなり、IL-4,IL-5,IFN-γ産生態を欠き、B細胞の免疫グロブリン産生をヘルプし得ないが、数日間のin vitro PHA刺激によりCD45RA+、RO-からCD45RA-,RO+への形質変換がおこり、これに伴ってIL-4,IL-5,IFN-γなどのサイトカイン産生態、ヘルパ-能が出現することが確かめられた。単離したナイ-ブT細胞を抗CD2抗体で刺激しても増殖反応はみられないが、メモリ-T細胞は旺盛な増殖をしめす。メモリ-T細胞は抗CD2抗体刺激により自らが微量のIL-6を産生し、オ-トクリン機構を介して増殖し得るが、ナイ-ブT細胞はIL-6産生能を欠くため、IL-6ソ-スとしての単球の共存なしには増殖し得ないことが明らかにされた。Several kinds of cytokines were identified in blood plasma when heparinized whole blood was stimulated directly with various stimuli, such as bacteria, bacterial products, and lectins. Immunohistologic and in situ hybridization studies confirmed that IL-1, IL-6, and EFN-gamma were produced almost exclusively by stimulated monocytes in this whole blood system. IL-6 producing ability of cord blood from neonates with over 1,800 gm of birth weight was comparable to adult controls, while very low birth weight infants born at less than 30 weeks of gestation weighing less than 1,500 gm showed poor ability to produce IL-6.It has been claimed that isoform expression patterns of CD45 antigen family denote mutually exclusive two T cell subsets : "naive" T cells expressing CD45RA^+, RO^- and "memory T cells with CD45RO^-, RO^+ phenotype. Almost all T cells in cord blood expressed naive phenotype. Relative proportions of circulating memory T cells increased with advancing age and reached adult levels around 12 years of age.By using reverse transcriptase/PCR technology, it was confirmed that CD4^+CD45RO^- naive T cells could not express mRNAs for IL-4, IL-5, and IFN-gamma on stimulation. CD4^+, CD45RO^+ memory T cells had the ability to produce these lymphokines. In addition, CD4^+ naive T cells as well as whole cord CD4^+ T cells exerted no significant help for B cell differentiation, while CD4^+ memory T cells acted as an efficient helper in PWM- stimulated coculture system. In vitro stimulation of CD4^+ naive T cells and whole cord CD4^+ T cells with PHA in the presence of exogenous IL-2 caused phenotypic conversion from CD45RO^- to CD45RO^+. Following phenotype conversion, originally naive CD4^+ T cells acquired some memory T cellーlike function.FACS-purified CD4^+ naive T cells could not respond to a combination of anti-CD2 antigens in the absence of monocytes, whereas CD4^+ memory T cells showed vigorous proliferation. CD4^+ memory T cells, but not CD4^+ naive T cells, could produce IL-6 in response to anti-CD2. Whether IL-6 was produced or not seems to be crucial for anti-CD-2mediated cellular proliferation.研究課題/領域番号:01480257, 研究期間(年度):1989 – 1990出典：研究課題「新生児および骨髄移植患者のサイトカイン産生態と感染象の特異性に関する研究」課題番号01480257（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-01480257/014802571990kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作

ヒトFcリセプター陽性Tリンパ球に関する研究

金沢大学医学部研究課題/領域番号:X00090----357320研究期間(年度):1978出典：「ヒトFcリセプター陽性Tリンパ球に関する研究」研究成果報告書　課題番号X00090----357320（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-X00090----357320/）を加工して作

胎生期・乳児期のNK細胞の分化とリンホカイン応答性に関する研究

金沢大医学部1.ヒト胎児末梢血のNK細胞活性は、姙娠後3半期にいたり出現し、姙娠月数の進むにつれ増強するが、その活性は生下時にはなお弱く、成人対照の1/2〜1/3に止まる。リンホカイン応答性についてみると、インターフェロン・ガンマ(IFN-γ)によるNK細胞活性の増強は、basal存NK細胞活性に依存し、NK細胞活性を欠く胎生20週令では、IFN-γによるNK細胞活性の誘導はみられないが、インターロイキン・2(IL-2)により、IFN-γ産生を介することなく、強にNK細胞活性が誘導される。また、新生児Leu【11^+】細胞のNK細胞活性は低いが、IL-2により成人対照レベルにまで増強され、さらに、basalなNK細胞活性を欠く新生児Leu【11^-】細胞群にも強いNK細胞活性が誘導されてくる。このような所見から、IFN-γ反応性NK細胞は、かなり分化は進んでいるが、機能的にはなお未熟なNK細胞と考えられ、IL-2反応性細胞は、より幼弱なNK前駆細胞であろうと推論された。2.新生児期にはLeu【11^+】細胞は成人レベルに近いが、HNK-【1^+】細胞に乏しい。新生児期の抗【CD_3】誘導性細胞障害能が極めて微弱なことは、HNK-【1^+】細胞に乏しい現象と深く関連するもののようである。3.新生児期のPHA誘導性IFN-γ産生は不良であり、3-4才にいたり初めて成人レベルに達するが、放射線照射後のPHA刺激,OK-432刺激では、新生児リンパ球でも良好なIFN-γの産生がみられ、免疫組織学的にも確かめられた。新生児期のPHA誘導性IFN-γ産生の不良な原因として、PHA刺激により、IFN-γ産生に抑制的に仂く、この時期に特徴的なサプレッサー細胞の活性化が強く起っていることが明らかにされた。このようなサプレッサー前駆細胞は、【T4^+】ヘルパー形質をもち、放射線感受性であることが判明した。1. Peripheral blood mononuclear cells(MNC) from fetuses of estimated gestational age of 20 wk lacked NK cell activity against K 562 target cells even after 18 hr-treatment with interferon- (IFN- ). Low, but significant levels of basal and IFN- -inducible NK cell activity were observed in premature infants of 27-wk-gestation, with a progressive increase of these activities during the last trimester of pregnancy. Contrary to IFN- , interleukin-2(IL-2) could induce a marked NK cell activity even in MNC from fetuses of 20-wk-gestational age and in Leu- cell population of cord MNC, each of them lacked both basal and IFN- -inducible NK cell activity. These ontogenic development and lymphokine responsiveness of human NK cell activity indicated that putative precursors of NK effector cells might be divided into IFN- -responsive, more mature inactive forms of NK cells and into putative NK progenitors responding well to IL-2, but not to IFN- , which might appear at an earlier stage of fetal development than IFN- -responsive ones.2. In cord blood, Leu- cells were comparable in number with adult controls, but Leu- cells were very meager. Preliminary studies indicated that low levels of Leu- cells in cord MNC might be responsible for the poor ability of cord blood in their anti-CD3-inducible cytotoxicity.3. Dissociated production of IL-2 and IFN- , ample production of IL-2 and poor secretion of IFN- , on PHA stimulation is a characteristic of cord MNC. In this report, some experimental data suggesting that IFN- production by PHA-stimulated cord MNC to be down-regulated by preferential activation of suppressor precursors against IFN- production, were presented. These PHA-inducible suppressor precursors in cord MNC expressed in large T4 helper phenotype and were radiosensitive in nature.研究課題/領域番号:60480242, 研究期間(年度):1985 – 1986出典：研究課題「胎生期・乳児期のNK細胞の分化とリンホカイン応答性に関する研究」課題番号60480242（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-60480242/604802421986kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作

小児における特異的免疫能の成立とメモリーT細胞の動態に関する研究

金沢大学医学部ヒトTリンパ球はCD45抗原ファミリーの発現を指標に、ナイーブT細胞、メモリーT細胞に大別されることが知られてきた。ヒト新生児T細胞の殆どはCD45RA^+ナイーブT細胞からなるが、生後、様々な抗原刺激によりCD45RA^+からCD45RO^+への形質変換、機能的成熟を遂げ、成長につれ特異的免疫能を獲得したメモリーT細胞プールが増大すると考えられる。伝染性単核症をモデルに、ウイルス感染時のT細胞の活性化と増殖、それに引き続く特異的なメモリーT細胞の成立の機構を解析した。1)伝染性単核症T細胞を免疫原として、IMN3・1単クローン抗体を作成した。この抗体は、伝染性単核症などにみられる活性化細胞、AIDSのCD4^+T細胞、胸腺細胞など、アポトーシスに陥り易いT細胞に選択的に発現する新しいT細胞後期活性化抗原(分子量約120kDa)を認識する。2)伝染性単核症急性期には、活性化を受け、CD45RO抗原を発現した異型リンパ球の著増する。このような活性化T細胞はFas/Apo-1抗原を発現し、アポトーシスに陥り易く、疾患の経過とともに急速に除かれる。3)正常人のCD45RO^+メモリーT細胞にもFas抗原の発現がみられるが、伝染性単核症のCD45RO^+T細胞と異なり、アポトーシス抵抗性である。前者にはbcl-2蛋白の細胞内発現がみられるが、後者にはbcl-2蛋白の発現はみられない。同じくFas抗原を発現した細胞でも、bcl-2発現の強弱によりアポトーシス感受性に差がある。一般に、T細胞の活性化に伴いbcl-2蛋白の発現減弱、Fas抗原の発現増強がみられ、アポトーシス感受性は亢進するが、なんらかの機構でFas^+/bcl-2^+の形質を獲得した一部のT細胞が細胞死を免れ、T細胞メモリーが成立するものと考えられる。4)Fas抗原は末梢リンパ球の一部、単球、好中球に発現がみられるが、Bcl-2発現はリンパ球、単球、好中球の順に減弱し、それぞれの細胞群のアポトーシス抵抗性と密接に関係するもののようである。Immune stimulation of T cells resulted in the conversion CD45 antigen expression form CD45RA \u27naive\u27 to CD45RO \u27primed\u27 phenotype. It has been suggested that memory T cells reside within CD45RO \u27primed\u27 T CELL POOL.As T cells response during EBV-induced infectious mononucleosis is particularly intense. dynamics in the acquisition and generation of T cell memory was evauated largely in this disease model.1. Monoclonal antibody IMN3.1, prodced with T cells in the acute phase of infectious mononucleosis as imunogen, identified a novel T cell activatin antigen, which was expressed preferentially on apoptosis-prone T cells, such as mononucleosis T cels, thymocytes, and anti-Fas-sensitive T cell lines, but not on resting circulating T cellls.2. Atypical lymphocytes in infectious mononuchlosis are activated CD45RO^+ T cells. The majority of these stimulated T cells seemed to be eliminated in vivo by apoptotic cel death.3. CD45RO^+ T cells in infectious mononucleosis expressed Fas as well as IMN3.1 antigen and were sensitive to apoptotsis. In contrast, CD45RO^+ T cells from healthy individuals expressed Fas, but not IMN3.1, antigen, and were resistant to apoptosis. CD45RO^+ blastoid T cells in mononucleosis expressed no detectable leels of bc1-2 protein, whereas CD45RO^+ T cells in healthy subjects were seemingly a quiescent state and expressed considerable levels of bc1-2. The reduced expression of bc1-2 on the majority of stimulated Tcells might render these cells rone to apoptosis. Onyly a few of stimulated T cells expressing both Fas and bcl by unclear mechanisms, however, might be rescued from cell death and might re-enter to a quiescent state as specified functional memory T cells4. Apoptotic tendency in vitro aging of lymhocytes, monocytes, and neutrohils was in increasing order of sensitivity and seeed to be inversely correlaed with their expression levels of bc1-2.研究課題/領域番号:03404034, 研究期間(年度):1991 – 1993出典：研究課題「小児における特異的免疫能の成立とメモリーT細胞の動態に関する研究」課題番号03404034（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-03404034/034040341993kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作

ウイルス感染症および川崎病における活性化リンパ球の形質,機能とその臨床的意義

金沢大学医学部1.ウイルス感染症、川崎病などでは急性期の末梢血中にはKiー67抗体と反応するあらたな核抗原を発現した細胞が増加し、その殆どが活性化T細胞であることが明らかにされた。一方、敗血症、化膿性髄膜炎などの細菌感染症ではこのようなKiー67陽性細胞の増加は観察されず、末梢血におけるKiー67陽性細胞の増加は、ウイルス感染と細菌感染の鑑別に役立つものと考えられる。古典的結節性動脈炎ではKiー67陽性細胞の増加はみられないが、川崎病ではKiー67陽性細胞の長期に亙る増加が観察され、その多くはCD4形質をもつ特徴がありウイルス感染の可能性を暗示する。2.新生児のILー1、ILー6産生能を成人対照と比較した。全血のまま短期間培養することにより、無刺激時にはこれらのモノカインの産生は殆どみられず、LPS、ConA刺激時にはその大部分が単球により産生されることが、特異抗体をもちいて免疫組織学的に証明された。全血法による検討ではILー1、ILー6の産生能には新生児、成人の間に差はみられず、モノカイン産生能からみた単球の機能は、生下時すでに成人のレベルにあることが確かめられた。また、川崎病をはじめとする種々の疾患時の血清ILー6の動態につき検索し、いわゆる急性期蛋白との関係を明らかにした。3.T細胞レセプターγ/δ鎖陽性細胞の組織分布と、疾患時の動態につき検討した。胸腺では1%内外の細胞が、panーγ/δ抗体とされるTCR-δ1と反応し、δ-TCS1+細胞は主に皮質にみられ、Ti-γA+細胞は主に髄質には分布し、数的にはほぼ等しい。一方、末梢リンパ組織、血液では数%以下の細胞がTCR-δ1+で、Ti-γA+細胞がその大部分をしめ、δ-TCS1+細胞は極めて少ない。これらは主にCD3+、doublenegative T細胞である。TCR-γ/δ細胞の異常増殖疾患における宿主の免疫能につき検討中である。1. A monoclonal antibody, Ki-67, could recognize a nuclear antigen expressed in proliferating cells, but not in resting cells. In acute stage of common viral diseases, various proportions of circulating T cells expressed Ki-67-reactive nuclear antigen, whereas there was no significant appearance of Ki-67^+ cells in the cases of bacterial infection examined. Thus, enumeration of ciruculating Ki-67^+ cells might provide a useful tool for the differentiation between viral and bacterial infection in clinical practice. Of particularly interest is the fact that a significant and prolonged increase of Ki-67^+ cells in Kawasaki\u27s disease and idiopathic myocarditis suggests the possible implication of viral agents in the pathogenesis of these disorders.2. Producing ability of monokines, such as IL-1 and IL-6, of cord blood leukocytes assessed by a whole blood culture method was comparable to that of abult controls, indicating the monokine-producing capability to be mature at the time of birth. In various febrile conditions including Kawasaki\u27s disease, serum levels of IL-6 were markedly elevated at the acute stage of the disease and decreased rapidly at convalescence in accordance with the decline of several species of the acute phase proteins, indicating the acute phase nature of IL-6.3. By using three kinds of monoclonal antibodies against T-cell receptor(TCR)-|chains, anti-TCR 1 (seemingly anti-pan TCR|, anti-Ti- A, and anti- -TCS1, tissue distributions of lymphocyte subsets expressing TCR-|chains was evaluted immunohistochemically. In peripheral lymphoid organs, less than 5% of lymphocytes expressed TCR- 1^+ determinants, of which the majority were Ti- A^+ cells. The cells expressing -TCS1^+ determinants were very small in number. Clinical studies suggested that preferential proliferation of a subset of TCR-|^+ lymphocytes in peripheral lymphoid organs might indicate impaired immune status of the host in response to viral agents.研究課題/領域番号:62440043, 研究期間(年度):1987 – 1988出典：研究課題「ウイルス感染症および川崎病における活性化リンパ球の形質,機能とその臨床的意義」課題番号62440043（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-62440043/624400431988kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作

T細胞の活性化抗原発現能, TCGF産生能を中心とする小児期免疫異常状態の解析

金沢大学医学部研究課題/領域番号58440046, 研究期間(年度):1983 – 1984出典：研究課題「T細胞の活性化抗原発現能, TCGF産生能を中心とする小児期免疫異常状態の解析」課題番号58440046（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-58440046/）を加工して作

遺伝性ムコ多糖尿症に関する研究

金沢大学医学部研究課題/領域番号:X00095----967023, 研究期間(年度):1974出典：「遺伝性ムコ多糖尿症に関する研究」研究成果報告書　課題番号：X00095----967023（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-X00095----967023/）を加工して作

Involvement of S-adenosylmethionine-dependent halide/thiol methyltransferase (HTMT) in methyl halide emissions from agricultural plants: isolation and characterization of an HTMT-coding gene from Raphanus sativus (daikon radish)

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Biogenic emissions of methyl halides (CH₃Cl, CH₃Br and CH₃I) are the major source of these compounds in the atmosphere; however, there are few reports about the halide profiles and strengths of these emissions. Halide ion methyltransferase (HMT) and halide/thiol methyltransferase (HTMT) enzymes concerning these emissions have been purified and characterized from several organisms including marine algae, fungi, and higher plants; however, the correlation between emission profiles of methyl halides and the enzymatic properties of HMT/HTMT, and their role in vivo remains unclear.</p> <p>Results</p> <p>Thirty-five higher plant species were screened, and high CH₃I emissions and HMT/HTMT activities were found in higher plants belonging to the Poaceae family, including wheat (<it>Triticum aestivum </it>L.) and paddy rice (<it>Oryza sativa </it>L.), as well as the Brassicaceae family, including daikon radish (<it>Raphanus sativus</it>). The in vivo emission of CH₃I clearly correlated with HMT/HTMT activity. The emission of CH₃I from the sprouting leaves of <it>R. sativus</it>, <it>T. aestivum </it>and <it>O. sativa </it>grown hydroponically increased with increasing concentrations of supplied iodide. A gene encoding an <it>S</it>-adenosylmethionine halide/thiol methyltransferase (HTMT) was cloned from <it>R. sativus </it>and expressed in <it>Escherichia coli </it>as a soluble protein. The recombinant <it>R. sativus </it>HTMT (RsHTMT) was revealed to possess high specificity for iodide (I^-), bisulfide ([SH]^-), and thiocyanate ([SCN]^-) ions.</p> <p>Conclusion</p> <p>The present findings suggest that HMT/HTMT activity is present in several families of higher plants including Poaceae and Brassicaceae, and is involved in the formation of methyl halides. Moreover, it was found that the emission of methyl iodide from plants was affected by the iodide concentration in the cultures. The recombinant RsHTMT demonstrated enzymatic properties similar to those of <it>Brassica oleracea </it>HTMT, especially in terms of its high specificity for iodide, bisulfide, and thiocyanate ions. A survey of biogenic emissions of methyl halides strongly suggests that the HTM/HTMT reaction is the key to understanding the biogenesis of methyl halides and methylated sulfur compounds in nature.</p