Исследование противогриппозной активности комплексов миРНК против клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 на модели in vitro

Objectives. Evaluation of changes in the viral activity of influenza A/WSN/33 after complex knockdown of combinations of cellular genes FLT4, Nup98 and Nup205 in human lung cell culture A549. Methods. The work was carried out using the equipment of the Center for Collective Use of the I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Russia. The authors performed transfection of combinations of small interfering ribonucleic acid (siRNA) complexes that cause simultaneous disruption of the expression of cellular genes FLT4, Nup98, and Nup205. Within three days from the moment of transfection and infection, the supernatant fluid and cell lysate were taken for subsequent viral reproduction intensity determination using the titration method for cytopathic action. The dynamics of changes in the concentration of viral ribonucleic acid (vRNA) was determined by real-time reverse transcription polymerase chain reaction (real-time RT-PCR). The nonparametric Mann–Whitney test was used to calculate statistically significant differences between groups.Results. Using all of the combinations of siRNA complexes, cell viability did not decrease below the threshold level of 70%. In cells treated with complex FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205 at the multiplicity of infection (MOI) equal to 0.1, a significant decrease in viral reproduction by 1.5 lg was noted on the first day in relation to nonspecific and viral controls. The use of siRNA complexes at MOI 0.01 resulted in a more pronounced antiviral effect. The viral titer in cells treated with siRNA complexes FLT4.2 + Nup98.1 and Nup98.1 + Nup205 decreased by 1.5 lg on the first day. In cells treated with complexes FLT4.2 + Nup205 and FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205, it decreased by 1.8 and 2.0 lg on the first day and by 1.8 and 2.5 lg on the second day, respectively, in relation to nonspecific and viral controls. When conducting real-time RT-PCR, a significant decrease in the concentration of vRNA was noted. At MOI 0.1, a 295, 55, and 63-fold decrease in the viral load was observed with the use of siRNA complexes FLT4.2 + Nup98.1, Nup98.1 + Nup205, and FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205, respectively. On the second day, a decrease in vRNA was also observed in cells treated with complex A. A 415-fold decrease in vRNA on the third day was noted in cells treated with complex FLT4.2 + Nup205. At MOI 0.01, the concentration of vRNA decreased 9.5 times when using complex B relative to nonspecific and viral control.Conclusions. The study showed a pronounced antiviral effect of siRNA combinations while simultaneously suppressing the activity of cellular genes (FLT4, Nup98, and Nup205), whose expression products are playing important role in the viral reproduction process, and obtained original designs of siRNA complexes. The results obtained are of great importance for the creation of emergence prophylactic and therapeutic drugs, whose action is based on the mechanism of RNA interference.Цели. Оценка изменения вирусной активности гриппа A/WSN/33 после комплексного нокдауна комбинаций клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 в культуре легочных кле­ток человека А549.Методы. Работа выполнена с использованием оборудования центра коллективного поль­зования Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им И.И. Мечникова (Россия). Авторами выполнялась трансфекция комбинаций комплексов миРНК, вызыва­ющих одновременное нарушение экспрессии клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205. В течение трех дней с момента трансфекции и заражения проводился отбор надосадоч­ной жидкости и клеточного лизата для последующего определения интенсивности ви­русной репродукции по методу титрования по цитопатическому действию. Динамику изменения концентрации вирусной рибонуклеиновой кислоты (вРНК) определяли мето­дом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального вре­мени (ОТ-ПЦР-РВ). Для вычисления статистически значимых различий между группами использовали непараметрический критерий Манна-Уитни.Результаты. При использовании всех комбинаций комплексов малых интерферирую­щих РНК (миРНК) жизнеспособность клеток не снижалась ниже порогового уровня в 70%. В клетках, обработанных комплексом FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205 при множественности заражения (Multiplicity of infection, MOI) 0.1 достоверное снижение вирусной репродукции на 1.5 lg отмечалось на первые сутки по отношению к неспецифическому и вирусному контролям. Использование комплексов миРНК при MOI 0.01 приводило к более выражен­ному противовирусному эффекту. Вирусный титр в клетках, обработанных комплек­сами миРНК FLT4.2 + Nup98.1 и Nup98.1 + Nup205 снижался на первые сутки на 1.5 lg. В клетках, обработанных комплексами FLT4.2 + Nup205 и FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205 снижался на 1.8 и 2 lg на первые сутки и на 1.8 и 2.5 lg на вторые сутки соответствен­но по отношению к неспецифическому и вирусному контролям. При проведении ОТ-ПЦР-РВ отмечено достоверное снижение концентрации вирусной РНК. При MOI 0.1 снижение ви­русной в 295, 55 и 63 раза отмечался при использовании комплексов миРНК FLT4.2 + Nup98.1, Nup98.1 + Nup205 и FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205 соответственно. На вторые сутки сниже­ние вирусной РНК также отмечалось в клетках, обработанных комплексом FLT4.2 + Nup98.1. Снижение вРНК на третьи сутки в 415 раз отмечалось в клетках, обработанных ком­плексом FLT4.2 + Nup205. При MOI 0.01 концентрация вРНК снизилась в 9.5 раз при ис­пользовании комплекса Nup98.1 + Nup205 относительно неспецифического и вирусного контроля.Выводы. В ходе исследования был показан выраженный противовирусный эффект ком­бинаций миРНК при одновременном подавлении активности клеточных генов (FLT4, Nup98 и Nup205), чьи продукты экспрессии играют важное участие в процессе вирусной репродукции, а также получены оригинальные конструкции комплексов миРНК. Полу­ченные результаты имеют важное значение для создания препаратов для экстренной профилактики и терапии, чье действие основано на механизме РНК-интерференции

Worked Problems in Descriptive Geometry

331 tr. ; 22 cm

"Комп'ютерне моделювання і керування в техніці та технологіях КМКТТ-2021", Дев’ята міжнародна науково-практична конференція

На основі запропонованої термокінетичної моделі вивчено теплову поведінку реакційної системи нікелю з алюмінієм під час спікання. Із використанням комп'ютерного експерименту досліджено вплив температур зовнішнього середовища, температурного ініціювання на характер процесів, що протікають у системі. Встановлено, що оптимальним для реакційної спікання є забезпечення близькості за величиною температур ініціювання та зовнішнього середовища.On the basis of the proposed thermokinetic model, the thermal behavior of the reaction system of nickel with aluminum during sintering has been studied. A computer experiment has been used to study the influence of the temperature of the external environment, as well as the temperature of initiation on the nature of the ongoing processes. It has been established that the optimal for reaction sintering is to ensure the proximity in terms of the initiation temperature and the external environment.На основе предложенной термокинетической модели изучено тепловое поведение реакционной системы никеля с алюминием при спекании. Компьютерным экспериментом исследовано влияние температуры внешней среды, температуры инициирования на характер протекающих процессов. Установлено, что оптимальным для реакционного спекания является обеспечение близости по величине температур инициирования и внешней среды

Macromicroscopic and quatitative characteristics of innerorgans blood vessels of placenta in norm

В статті викладені результати макромікроскопічного дослідження нормальної плаценти в її різних топографічних зонах та приведенні дані порівняльного морфологічного та морфометричного аналізу внутрішньорганних кровоносних судин ворсин плаценти. Виявлені закономірності розподілу судин в вище означених ділянках. Зазначено що, в середній зоні плаценти кровоносні судини характеризуються самим меншим зовнішнім діаметром. Число кровоносних судин на одиницю площі тут максимальне. Встановлено, що надбазальна зона характеризується збільшенням середніх значень зовнішнього діаметра щодо всіх кровоносних судин. Кількісно судин на одиницу площі тут меньше, в порівнянні з середньою зоною, але більше, ніж в підхоріальній ділянці. На всіх ділянках гістотопографічних зрізів загальна площина розтину вен в середньому в півтора раза перевищує діаметр щодо артерій.Тобто в плаценті є зони, які відрізняються суттєво одна від одної розташуванням, кількістю, будовою кровоносних судин, особливостями васкуляризації і гемодинамики; In the article there were given the results of macromicroscopic investigation of normal placenta in its different topographic zones and the data of comparative morphological and morphometical analysis of innerorganic blood vessels of villuses of placenta. There were revealed the laws of distribution of vessels in the mentioned sections. It was determined that in the middle zone of placenta the blood vessels are characterised by the least of external diameter. The number of blood vessels on the unit of area is maximal here. It was determined that suprabasalis zones characterised by the increase of middle meanings of the external diameter that up to all blood vessels. Quatitively the vessels on the unit of area is lowered here in comparison with the middle zone but more than in subchorialis sections, general area of the veins out are 1,5 times more than the diameter of the arteries. I. e. in placenta there are zones that are different by the placing, the number building of blood vessels, peculiarities of vascularization and hemodynamics

THE DEVELOPMENT OF DIAGNOSTICS AND ALIMENTARY PREVENTION SYSTEM OF NON-COMMUNICABLE DISEASES

Background: Violation of dietary intake structure leads to changes in nutritional status. This contributes to the development of non-communicable diseases, which account for more than half of causes of death inRussia. Materials and methods: In a consultative and diagnostic center "Healthy Nutrition" of theInstituteofNutritionthe nutritional status of 3580 patients (mean age 48.4±0.3  years) has been examined, including genomic and post-translational analysis. 30.0% of patients were overweight and 34.1% were obese.Results: Analysis of actual dietary intake showed an increase in energy intake due to excess intake of total (44.2%  energy) and saturated fat (13.6%). Serum biochemistry analyses revealed increased cholesterol levels in 68.7%  of patients, increased low-density lipoprotein cholesterol in 63.9%, increased triglycerides in 22.5%, and increased blood glucose in 29.4%. The frequencies of risk alleles of genes associated with development of obesity and type 2 diabetes mellitus were as follows: 47.8% for the polymorphism rs9939609 (FTO gene), 8.3% for the polymorphism rs4994 (gene ADRB3), 60.2% for the polymorphism rs659366 (gene UCP2), 36.6% for the rs5219  polymorphism in the gene of ATPdependent potassium channel.Conclusion: These results can be used for development of a personalized diet based on assessment of a patient's nutritional status