Estudo quantitativo da infecção por babesia bovis e Babesia bigemina em diferentes grupos genéticos de bovinos de corte.

Dissertação ( Mestrado em Genética e melhoramento Animal) - Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias UNESP. Sob orientação da Dra.Pesquisadora Márcia Cristina Sena de Oliveira

Estudo do nível de infecção por Babesia bovis e Babesia bigemina em bovinos da raça canchim naturalmente infestados com o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus.

Entre as principais causas de perdas produtivas em bovinos criados nos trópicos está a infestação pelo carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e, consequentemente, dos hemoparasitas transmitidos por ele. A resistência dos zebuínos e de animais cruzados com raças taurinas à infestação por esse ácaro é amplamente conhecida. Entretanto, no que se refere à suscetibilidade às babesioses bovinas, existem evidências de que o grupo genético também pode interferir na resistência, seguindo o mesmo padrão observado para o carrapato vetor, com os taurinos apresentando maior sensibilidade. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a parasitemia por Babesia bovis e Babesia bigemina em 50 novilhas da raça Canchim ( Charolês + Zebu) naturalmente infestadas pelo R. (B.) microplus nas quatro estações do ano durante 24 meses, além de caracterizar o perfil de citocinas que podem estar associados ao fenótipo de resistência e suscetibilidade aos hemoparasitas do gênero Babesia spp. Foram realizadas contagens de fêmeas adultas de carrapatos com tamanho igual ou superior a 4,5 mm de diâmetro, presentes no lado esquerdo de cada bovino. As amostras de DNA extraídas foram submetidas à amplificação por meio da Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa em Tempo Real (qPCR), utilizando iniciadores que flanqueiam fragmentos dos genes mitocondriais do citocromo b (mt-cyt B), específicos para B. bovis e B. bigemina. O RNA extraído do sangue, foi usado para sintetizar o DNA complementar (cDNA) para análise de expressão dos genes do IFN- , TNF- , IL-10 e IL-12B por meio da quantificação relativa (RTqPCR). Foram observadas diferenças significativas (P0,05) nas colheitas realizadas entre novembro de 2013 a janeiro de 2014 e entre os meses janeiro e fevereiro de 2015. A frequência da parasitemia no rebanho foi de 98%. Dentre as amostras de DNA que puderam ser quantificadas pela qPCR, 98% e 95,4% foram positivas para B. bovis e B. bigemina, respectivamente. Com relação ao número de cópias (NC) dos fragmentos dos genes mt-cyt B específicos para B. bovis e B. bigemina foram observados efeitos significativos (P<0,05) para ambas as espécies e interação das mesmas com as colheitas realizadas nas diferentes estações do ano. A análise do nível de expressão de mRNA do IFN- , TNF- e IL-12B revelou que houve um efeito siginificativo (P<0,05) da interação entre animais dos extremos de resistência/suscetibilidade e estações do ano, exceto para IL-10. Conclui-se que, a qPCR apresenta alta sensibilidade e especificidade para o diagnóstico das babesioses bovinas em amostras de sangue e que a oscilação na carga parasitária nas diferentes estações do ano pode estar associada com o perfil de expressão de citocinas apresentada.Orientador: Dr. Henrique Nunes de Oliveira, UNESP. Co-orientador: Dra. Márcia Cristina de Sena Oliveira, Embrapa Pecuária Sudeste

Estudo comparativo entre técnicas de extração de DNA para o futuro diagnóstico do endossimbionte Wolbachia em Haematobia irritans.

Editores técnicos: João de Mendonça Naime, Caue Ribeiro, Maria Alice Martins, Elaine Cristina Paris, Paulino Ribeiro Villas Boas, Ladislau Marcelino Rabello

Estudo da resistência/suscetibilidade aos endo e ectoparasitas em bovinos Nelore e cruzados com raças taurinas.

A resistência à infecção natural por nematódeos gastrintestinais e à infestação por ectoparasitas foi comparada em 45 animais, machos e fêmeas, dos grupos genéticos, Nelore (NI, n=28) e ?three cross? ½ Angus + ¼ Canchim + ¼ Nelore (TC, n=17). A contagem do número de ovos por grama de fezes (OPG), as coproculturas e a determinação do volume globular (VG) foram feitos mensalmente. Foram contados os ectoparsitas Rhipicephalus (Boophilus) microplus, bernes (larvas de Dermatobia hominis) e moscas-dos-chifres (Haematobia irritans). Nos estudos com os endoparasitas foi verificada influência significativa do mês da colheita (P<0,01) sobre o OPG, entretanto, não foram evidenciados efeitos significativos de grupo genético, sexo ou das possíveis interações entre esses efeitos. Os seguintes gêneros de nematódeos foram encontrados nas coproculturas: Haemonchus spp.,Cooperia spp., Oesophagostomum spp. e Trichostrongylus spp. As médias mensais de VG foram mais altas (P<0,01) para os animais NI (40,6%) quando comparadas às do grupo TC (38,6%). Os animais do grupo NI apresentaram menores médias de contagem de parasitas externos, quando comparados aos TC (P<0,01). Este estudo evidenciou a importância das infecções por nematódeos gastrintestinais inclusive por Cooperia spp. em bovinos, principalmente na raça Nelore, e que os animais NI são mais resistentes ao carrapato R. (B.) microplus, à mosca-dos-chifres e às infestações pelas larvas de D. hominis, quando comparados aos TC

Estimativa do Nível de Infecção por Babesia bigemina Utilizando a qPCR em Bovinos de Corte de Diferentes Grupos Genéticos.

O objetivo deste trabalho foi padronizar um protocolo de quantificação que possibilitasse estimar o nível de infecção por de Babesia bigemina em bovinos de corte de três grupos genéticos e faixas etárias diferentes. Foram colhidas amostras de sangue de 149 animais, criados em regiões endêmicas para as babesioses. Após a extração do DNA, foi realizada a técnica de qPCR em todos os indivíduos. A curva padrão foi elaborada a partir da purificação e quantificação dos produtos de PCR. A análise estatística foi realizada com os dados transformados por logaritmos, empregando-se o programa computacional Statistical Analysis System v.9.1 (SAS). A metodologia empregada não permitiu estimar o nível de infecção na raça Nelore, entretanto, para animais Angus e cruzados, foram observadas diferenças significativas (P<0,05) em nível de infecção entre grupos genéticos e categorias etárias estudadas

Padronização das análises moleculares para a pesquisa de Wolbachia em artrópodes parasitas de interesse pecuário.

Insetos e outros artrópodes são hospedeiros comuns de bactérias transmitidas por via materna (Duron; Hurst, 2013). Esses endossimbiontes hereditários podem ter uma forte influência na ecologia do hospedeiro. Tais bactérias transmitidas verticalmente são numerosas e dependentes do hospedeiro para sobrevivência e transmissão. Certas associações são obrigatórias para ambos os parceiros, e geralmente envolvem um benefício nutricional para o hospedeiro. Outras bactérias hereditárias são facultativas e variam, em associações, de mutualistas a parasitas quando observadas sob a perspectiva do hospedeiro. Entre estas, a Wolbachia é a mais comum e a mais difundida simbionte facultativa de insetos e artrópodes (Hilgenboecker et al., 2008; Zug; Hammerstein, 2012).bitstream/item/210573/1/PadronizacaoAnalises.pd

Differential Haematobia irritans infestation levels in beef cattle raised in silvopastoral and conventional pasture systems.

The use of silvopastoral systems (SPS) can be a good alternative to reduce the environmental impacts of livestock breeding in Brazil. One of the reasons for its scarce adoption is the lack of information on health and productivity of cattle raised under these conditions. The experiment reported here was designed to compare the infestation by external parasites ? the cattle tick (Rhipicephalus microplus), horn fly (Haematobia irritans), and larvae of the botfly (Dermatobia hominis) ? in beef cattle raised in a SPS and a conventional pasture system (CPS), evaluated for 24 months. Data on air and soil temperature, solar radiation, wind incidence and water balance were used to characterize the SPS and CPS. R. microplus adult females and D. hominis larvae were counted on the body of each animal to determine the parasites burdens, but we did not find significant differences between the two systems. Horn flies counts on animals? body, and analysis of the horn fly and its pupal parasitoids associated with the dung pats were obtained in the two systems. Horn fly infestation was significantly lower (p = 0.01) in the SPS (13.17 ± 3.46) in comparison with the CPS (24.02 ± 4.43). In SPS and CPS, respectively, the mean densities of pupae of H. irritansin dung pats were 9.8 and 10.7; the mean density of adults of H. irritans, 3.7 and 3.5; and the density of its pupal parasitoids were 20.5 and 5.4. The effect of production system was significant (p < 0.05) only for the occurrence of pupal parasitoids of the horn fly, where the greatest occurrences of these natural enemies were in the SPS. These data indicate that natural enemies were able to control, at least partially, the horn fly populations in the cattle