Physiologically induced restructuring of focal adhesions causes mobilization of vinculin by a vesicular endocytic recycling pathway

AbstractIn epithelial cells, vinculin is enriched in cell adhesion structures but is in equilibrium with a large cytosolic pool. It is accepted that when cells adhere to the extracellular matrix, a part of the soluble cytosolic pool of vinculin is recruited to specialized sites on the plasma membrane called focal adhesions (FAs) by binding to plasma membrane phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PtdIns(4,5)P2). We have previously shown that bradykinin (BK) induces both a reversible dissipation of vinculin from FAs, by the phospholipase C (PLC)-mediated hydrolysis of PtdIns(4,5)P2, and the concomitant internalization of vinculin. Here, by using an immunomagnetic method, we isolated vinculin-containing vesicles induced by BK stimulation. By analyzing the presence of proteins involved in vesicle traffic, we suggest that vinculin can be delivered in the site of FA reassembly by a vesicular endocytic recycling pathway. We also observed the formation of vesicle-like structures containing vinculin in the cytosol of cells treated with lipid membrane-affecting agents, which caused dissipation of FAs due to their deleterious effect on membrane microdomains where FAs are inserted. However, these vesicles did not contain markers of the recycling endosomal compartment. Vinculin localization in vesicles has not been reported before, and this finding challenges the prevailing model of vinculin distribution in the cytosol. We conclude that the endocytic recycling pathway of vinculin could represent a physiological mechanism to reuse the internalized vinculin to reassembly new FAs, which occurs after long time of BK stimulation, but not after treatment with membrane-affecting agents

Esfingosina 1 fosfato como regulador de la dínamica de lipid droplets

Los efingolípidos son lípidos complejos que participan en variados procesos celulares. En el laboratorio hemos descripto la participación de estos en la diferenciación celular del túbulo colector renal. Mas aun, también actúan en fenómenos a nivel tisular modulando su arquitectura, al desencadenar procesos que regulan su homeostasis, como lo es la extrusión celular.Fil: Santacreu, Bruno J.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y TécnicasFil: Romero, Daniela J.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y TécnicasFil: Tarallo, Estefania. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y TécnicasFil: Sterin de Speziale, Norma. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y TécnicasFil: Favale, Nicolás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnica

La coordinación entre esfingolípidos y fosfoinosítidos es esencial para la diferenciación de las células tubulares renales

La diferenciación de las células epiteliales se produce por maduración de la membrana apical y desarrollo de cilio primario. Resultados previos de nuestro laboratorio demostraron que la hipertonicidad extracelular induce la diferenciación de las células MDCK, una línea celular derivada de túbulos colectores renales caninos, y que en este proceso son esenciales los esfingolípidos. Por otro lado, los fosfoinosítidos, otros lípidos bioactivos, son considerados determinantes de la polaridad apico - basal, dada su ubicación en dominios específicos de membrana en células epiteliales polarizadas: con PI(4,5)P2 localizado en el dominio apical y PI(3,4,5)P3 en el basolateral. Esta ubicación específica es la que determina el reclutamiento de complejos importantes de polaridad, como el Par3/Par6/aPKC.Fil: Pescio Lucila G.. Universidad de Buenos AiresFil: Romero, Daniela J.. Universidad de Buenos AiresFil: Santacreu, Bruno J.. Universidad de Buenos AiresFil: Francisco, María N..Fil: Favale, Nicolás O.. Universidad de Buenos AiresFil: Sterin-Speziale, Norma B.. Universidad de Buenos Aire

Fatty Acid Percentage Distribution in Complex Lipids of Breast Milk From Mothers on a Low Docosahexaenoic Acid Diet

The aim of this study was to assess the fatty acid (FA) percentage distribution in complex lipids of breast milk from mothers on a low docosahexaenoic acid (DHA) diet. We performed a descriptive, cross-sectional study of milk samples (n = 14) collected 90 days after delivery and analyzed them using gas chromatography, thin-layer chromatography, and the Fiske-Subbarow method. Complex lipid distribution was 40.70 ± 5.11% sphingomyelin (SM), 26.03 ± 5.98% phosphatidylethanolamine (PE), 21.12 ± 2.32% phosphatidylcholine, 7.94 ± 1.96% phosphatidylserine, and 4.22 ± 1.25% phosphatidylinositol. Median DHA and arachidonic acid values were 0.13% (0.12; 0.18) and 0.42% (0.33; 0.53), respectively. Mean FA percentage in SM and PE was as follows: palmitic acid, 34.45 ± 1.94% and 5.38 ± 0.94%; oleic acid, 16.50 ± 4.07% and 9.43 ± 4.05%; linoleic acid, 5.91 ± 4.69% and 9.05 ± 4.5%. DHA was not detectable in SM, but it was found in PE (55.33 ± 14.46). In conclusion, breast milk of mothers on a low DHA diet contained 55% DHA in PE, but no DHA in SM.Fil: Gonzalez, Horacio Federico. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata. Instituto de Desarrollo e Investigaciones Pediátricas; ArgentinaFil: Malpeli, Agustina. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata. Instituto de Desarrollo e Investigaciones Pediátricas; ArgentinaFil: Fasano, Maria Victoria. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata. Instituto de Desarrollo e Investigaciones Pediátricas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pescio, Lucila Gisele. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Sterin Speziale, Norma B.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Visentin, Silvana. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de La Plata. Instituto de Desarrollo e Investigaciones Pediátricas; Argentin

Novel cellular mechanism that mediates the collecting duct formation during postnatal renal development

We have previously demonstrated that kidney embryonic structures are present in rats, and are still developing until postnatal Day 20. Consequently, at postnatal Day 10, the rat renal papilla contains newly formed collecting duct (CD) cells and others in a more mature stage. Performing primary cultures, combined with immunocytochemical and time-lapse analysis, we investigate the cellular mechanisms that mediate the postnatal CD formation. CD cells acquired a greater degree of differentiation, as we observed that they gradually lose the ability to bind BSL-I lectin, and acquire the capacity to bind Dolichos biflorus. Because CD cells retain the same behavior in culture than in vivo, and by using DBA and BSL-I as markers of cellular lineage besides specific markers of epithelial/mesenchymal phenotype, the experimental results strongly suggest the existence of mesenchymal cell insertion into the epithelial CD sheet. We propose such a mechanism as an alternative strategy for CD growing and development.Fil: Guaytima, Edith del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Humana; ArgentinaFil: Brandán, Yamila Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Humana; ArgentinaFil: Favale, Nicolas Octavio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Sterin Speziale, Norma B.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Márquez, María Gabriela. Universidad Nacional de La Rioja. Departamento de Ciencias de la Salud y Educación. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Humana; Argentin

Expresión de esfingosina quinasa-1 en carcinoma escamoso de cabeza y cuello y su correlación con el tiempo de sobrevida

La esfingosina quinasa-1 (SK-1) es una enzima clave del metabolismo de los esfingolípidos. Estudios recientes involucran a esta enzima en la tumorigénesis, aunque pocos trabajos han analizado su expresión en tumores humanos, y no hay registros de su expresión en carcinomas celulares escamosos de cabeza y cuello (HNSCC). Por ello, el objetivo de este estudio fue investigar la expresión de SK-1 en estos tumores y correlacionarla con parámetros clínicos. Se analizaron por inmunohistoquímica dos microarreglos de tejido conteniendo 246 muestras de HNSCC. El 45% de los tumores resultaron positivos para SK-1. No se halla- ron correlaciones significativas entre la expresión de SK-1 y el grado de diferenciación (P= 0.15), el sitio primario del tumor (P=0.23) o el país de origen (P= 0.10) (Test Chi Cuadrado y Mann- Whitney). En cambio sí se encontró correlación entre expresión positiva de SK-1 y menor tiempo de sobrevida (P=0.001, Kaplan- Meier, Log Rank test) con diferencias significativas entre el tiempo medio de sobrevida correspondiente a los tumores SK-1 posi- tivos y los negativos (P=0.02). También se estudió la expresión de la enzima en 37 biopsias quirúrgicas incluidas en parafina detectándose expresión en el 48% de los tumores. La expresión estaba restringida casi totalmente a las células neoplásicas y fue prácticamente indetectable en las células del estroma tumoral. Este resultado fue confirmado por detección de ARNm mediante microdisección con captura láser y RT-PCR. Sorprendentemente algunas células mostraron expresión nuclear. En conclusión, SK- 1 se expresa en aproximadamente la mitad de los HNSCC (45- 48%) investigados y dicha expresión se limita a las células epiteliales del tumor. Además, la expresión de la enzima se correlaciona con el tiempo de sobrevida de los pacientes. Este resultado podría deberse al hecho que SK-1 disminuye la concentración de ceramida (pro-apoptótica) e incrementa la de esfingosina 1 fosfato (anti-apoptótica y pro-proliferativa).Fil: Lang, Cecilia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Fermento, María Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Gandini, Norberto Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Maturi, Horacio Vicente. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Sterin Speziale, Norma. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Biología Celular e Histología; ArgentinaFil: Patel, Vyomesh. National Institutes of Health; Estados UnidosFil: Gutkind, Silvio. National Institutes of Health; Estados UnidosFil: Curino, Alejandro Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Facchinetti, Maria Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaLIII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Reunión Científica de la Sociedad Argentina de FisiologíaMar Del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de Fisiologí