Higher-dose primaquine to prevent relapse of Plasmodium vivax Malaria. Reply

Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta, GA

Nested PCR utilizando a gota espessa como fonte do DNA de Plasmodium: uma alternativa para esfregaços de sangue arquivados

Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.The study aimed to evaluate a protocol of nested PCR using archival Giemsa-stained thick blood smears (GTS)as source of Plasmodium DNA. A total of 138 GTS from patients of five municipalities from Pará State (Amazon Region, Brazil) was included in this survey. These samples were classified in three groups (group 1: 85 Plasmodium positive and negative GTS stored in plastic box during five years; group 2: 28 Plasmodium positive and negative GTS stored in wooden box during 10 years; and group 3: 25 Trypanosoma cruzi GTS negative for Plasmodium stored in plastic box during a month) and were submitted to DNA extraction with Chelex-100. Subsequently, extracted DNA samples were quantified and the integrity was verified by electrophoresis. Nested PCR protocol was performed to detect Plasmodium species. The results of nested PCR were compared to microscopy and statistic parameters were calculated by screening test. DNA samples from all groups had acceptable quantity and purity level, but the evaluation of integrity showed 19 degraded samples from group 2. By nested PCR, this group showed very low sensitivity (29.63%) and accuracy (32.14%), while nested PCR for samples from group 1 showed 100% of sensitivity and 97.65% of accuracy. The results of this research showed that samples stored until five years can be useful as Plasmodium DNA source for nested PCR to identify Plasmodium species, being an important alternative to support retrospective studies.O estudo teve como objetivo avaliar um protocolo de nested PCR, utilizando o teste de gota espessa corada por Giemsa (GTS) como fonte de DNA de Plasmodium. Um total de 138 amostras de GTS de pacientes de cinco municípios do Estado do Pará (Região Amazônica, Brasil) foi incluído neste estudo. Essas amostras foram classificadas em três grupos (grupo 1: 85 Plasmodium GTS positivos e negativos armazenados em uma caixa de plástico durante cinco anos; grupo 2: 28 Plasmodium GTS positivos e negativos armazenados na caixa de madeira durante 10 anos; e grupo 3: 25 Trypanosoma cruzi GTS negativos para Plasmodium armazenados em caixa de plástico durante um mês) e foram submetidas à extração de DNA com Chelex-100. Subsequentemente, as amostras de DNA extraídas foram quantificadas e sua integridade foi verificada pela eletroforese. O protocolo de nested PCR foi realizado para detectar resultados das espécies de Plasmodium. Os resultados do nested PCR foram comparados com os de microscopia e os parâmetros estatísticos foram calculados pelo teste de triagem. As amostras de DNA de todos os grupos obtiveram nível, quantidade e pureza aceitáveis, mas a avaliação da integridade mostrou 19 amostras degradadas do grupo 2. Pelo nested PCR, esse grupo mostrou baixa sensibilidade (29,63%) e precisão (32,14%), enquanto que as amostras do grupo 1 apresentaram 100% de sensibilidade e 97,65% de precisão. Os resultados desta pesquisa apontam que as amostras armazenadas até cinco anos podem ser úteis como fonte de DNA de Plasmodium para que o nested PCR identifique as espécies de Plasmodium, sendo uma alternativa importante para apoiar estudos retrospectivos

Higher-dose Primaquine to prevent relapse of Plasmodium vivax Malaria

U.S. Agency for International Development; ClinicalTrials.gov number, NCT03610399Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade Federal do Pará. Programa de Pós-Graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, BrasilUniversidade Federal do Pará. Belém, PA, Brasil / Secretaria de Saúde do Estado do Acre. Cruzeiro do Sul, AC, BrazilCenter for Surveillance, Epidemiology, and Laboratory Services. Epidemic Intelligence Service. Brazil / Centers for Disease Control and Prevention. Center for Global Health. Division of Parasitic Diseases and Malaria. The Malaria Branch. Atlanta, United States.Universidade Federal do Pará. Belém, PA, Brasil / Secretaria de Saúde do Estado do Acre. Cruzeiro do Sul, AC, BrazilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilUniversidad Ricardo Palma. Instituto de Investigaciones en Ciencias Biomedicas. Lima, Peru / Universidad Nacional Toribio Rodríguez de Mendoza de Amazonas. Instituto de Enfermedades Tropicales. Chachapoyas, PeruUniversidade Federal do Pará. Programa de Pós-Graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, Brasil / Universidade Federal do Pará. c Laboratório de Genética de Doenças Complexas. Belém, PA, BrasilUniversidade Federal do Pará. Instituto de Ciências da Saúde. Laboratório de Farmacocinética de Drogas Antimaláricas. Belém, PA, BrasilUniversidade Federal do Pará. Programa de Pós-Graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, Brasil / Universidade Federal do Pará. Laboratório de Genética de Doenças Complexas. Belém, PA, BrasilUniversidade Federal do Pará. Instituto de Ciências da Saúde. Laboratório de Farmacocinética de Drogas Antimaláricas. Belém, PA, BrasilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Departamento de Imunização e Doenças Transmissíveis. Coordenação-Geral de Vigilância de Zoonoses e Doenças de Transmissão Vetorial. Grupo Técnico da Malária. Brasilia, DF, BrasilSecretaria Estadual de Saúde do Distrito Federal. Subsecretaria de Vigilância em Saúde. Diretoria de Vigilância Epidemiológica. Brasília, DF, BrazilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade Federal do Pará. Programa de Pós-Graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, BrasilCenters for Disease Control and Prevention. Center for Global Health. Division of Parasitic Diseases and Malaria. The Malaria Branch. Atlanta, United StatesBACKGROUND: In most of the Americas, the recommended treatment to prevent relapse of Plasmodium vivax malaria is primaquine at a total dose of 3.5 mg per kilogram of body weight, despite evidence of only moderate efficacy. METHODS: In this trial conducted in Brazil, we evaluated three primaquine regimens to prevent relapse of P. vivax malaria in children at least 5 years of age and in adults with microscopy-confirmed P. vivax monoinfection. All the patients received directly observed chloroquine for 3 days (total dose, 25 mg per kilogram). Group 1 received a total primaquine dose of 3.5 mg per kilogram (0.5 mg per kilogram per day) over 7 days with unobserved administration; group 2 received the same regimen as group 1 but with observed administration; and group 3 received a total primaquine dose of 7.0 mg per kilogram over 14 days (also 0.5 mg per kilogram per day) with observed administration. We monitored the patients for 168 days. RESULTS: We enrolled 63 patients in group 1, 96 in group 2, and 95 in group 3. The median age of the patients was 22.4 years (range, 5.4 to 79.8). By day 28, three P. vivax recurrences were observed: 2 in group 1 and 1 in group 2. By day 168, a total of 70 recurrences had occurred: 24 in group 1, 34 in group 2, and 12 in group 3. No serious adverse events were noted. On day 168, the percentage of patients without recurrence was 58% (95% confidence interval [CI], 44 to 70) in group 1, 59% (95% CI, 47 to 69) in group 2, and 86% (95% CI, 76 to 92) in group 3. Survival analysis showed a difference in the day 168 recurrence-free percentage of 27 percentage points (97.5% CI, 10 to 44; P<0.001) between group 1 and group 3 and a difference of 27 percentage points (97.5% CI, 12 to 42; P<0.001) between group 2 and group 3. CONCLUSIONS: The administration of primaquine at a total dose of 7.0 mg per kilogram had higher efficacy in preventing relapse of P. vivax malaria than a total dose of 3.5 mg per kilogram through day 168