Detection and Identification of Old World Leishmania by High Resolution Melt Analysis

Protozoal parasites of the genus Leishmania are transmitted by sand fly bites to humans and animals. Three major forms of disease are caused by these parasites: cutaneous leishmaniasis, responsible for disfiguring skin wounds; mucocutaneous leishmaniasis, causing non-healing ulceration around the mouth and nose; and the potentially fatal visceral leishmaniasis, involving internal organs such as the spleen and liver. More than 2 million new human infections are caused annually by leishmaniasis globally, it is endemic in more than 88 countries and prevalent also as an imported disease in non-endemic regions due to travel and tourism. Most species of Leishmania that infect humans are zoonotic and transmitted from animal reservoir hosts. As various leishmanial parasites cause disease with similar symptoms, but require different therapeutic regimens and have dissimilar prognoses, reliable, sensitive and rapid diagnostic assays are needed. This study focuses on the five main species that cause leishmaniasis in the Old World. It presents a new assay for rapid detection, species identification and quantification of leishmanial parasites in clinical samples, reservoir hosts and sand flies. This technique could be especially valuable in regions where several leishmanial species exist, in non-endemic regions where infected patients require a rapid diagnosis, and for epidemiological host and vector studies leading to prevention programs

An epidemiological study on canine leishmaniasis (canl) and sand flies in northern cyprus

Amaç: Çalışmada, Kuzey Kıbrıs’ta ev ve sokak köpeklerinde kanin leishmaniasis (KanL) prevalansının belirlenmesi ve olası vektör kum sineği türlerinin saptanması amaçlanmıştır. Yöntemler: Araştırma, 2004 ve 2012’de iki ayrı dönemde gerçekleştirilmiş olup birinci dönemde 83 köpekten toplanan kan örnekleri ile serolojik (IFAT, rK39 hızlı tanı testi) ve moleküler (PCR) testler çalışılmıştır. Birinci çalışmada, 13A/13B primer çiftinin kullanıldığı “kinetoplastik minicircle” sabit gen bölgesinin hedeflendiği PCR testi, ikinci dönemde ise klinik şüpheli 5 köpekten toplanan kan örneklerine R221/ R332 ve R223/333 primer setlerinin kullanıldığı genomik nested-PCR testi uygulanmıştır. İkinci çalışmada, bölgedeki faunanın belirlenmesi amacıyla Girne ili ve Lapta kasabasından ışıklı tuzak yardımıyla kum sinekleri toplanmış ve direkt mikroskobi ile Leishmania parazitinin varlığı araştırılmıştır. Bulgular: Toplamda, 2004 yılında rastgele örneklenen 83 köpekten 3 (%3.61) tanesi herhangi bir test ile KanL açısından pozitif bulunurken, 2012 yılında klinik olarak şüpheli 5 köpekten 3 tanesi pozitif bulunmuştur. Toplanan kum sineklerinden 296 dişi diseke edilmiş ve Phlebotomus ile Sergentomyia cinslerine ait 9 tür belirlenmiştir. Dişi kum sineklerinde promastigot şekline rastlanmamıştır. Sonuç: İnsanlarda ve köpeklerde leishmaniasis insidansının belirlenmesi için Kuzey Kıbrıs’ta ileri çalışmalar yapılmalıdır. KanL olgularına doğru ve zamanında tanı konmalı ve yeni enfeksiyonların önlenebilmesi için kontrol önlemleri uygulanmalıdır. İki ayrı dönemde yapılan araştırma sonuçları Kuzey Kıbrıs’ta toplum ve hayvan sağlığı açısından KanL riskinin arttığını ve daha ciddiye alınması gerektiğini göstermektedir.Objective: In this study, the investigation on the prevalence of canine leishmaniasis (CanL) and sand fly species incriminated as potential vectors of leishmaniasis in the northern part of the Cyprus were aimed. Methods: This research was conducted in two periods; 2004 and 2012. Serological (IFAT and rK39) and molecular (PCR) tests were performed on 83 dog blood samples during the 2004 survey. PCR was performed using primers 13A/13B targeting kinetoplastid minicircle constant region. Genomic Nested-PCR was applied using R221/R332 and R323/333 primers for 5 clinically suspected dog samples in 2012. Sand flies were collected from the Lapithos town and Kyreniae province using CDC light traps and midgut dissection was done for the presence of Leishmania parasites during the 2012 survey.Results: Three (3.61%) out of 83 dogs were found to be positive for CanL in 2004, while 3 out of 5 clinically suspected dogs were positive in 2012. In total 296 female sand flies were dissected and 9 species belonging to Phlebotomus and Sergentomyia genera were determined. No promastigote was found in the dissected females. Conclusion: The results obtained in two different periods showed that the importance and risk of canine disease are increasing in the northern Cyprus and further studies should be performed in northern Cyprus for determining the incidence of canine and human leishmaniasis

Periodontal hastalığı bulunan kişilerde diş eti plaklarında entamoeba gingivalis ve trichomonas tenax araştırılması

The oral cavity is suitable for invasion of many microorganisms. Entamoeba gingivalis (E.gingivalis) and Trichomonas tenax (T.tenax) settle in the oral cavity of patients with poor oral hygiene and gingival disease. In the present study, two slide specimens were prepared from the cole region of the teeth of 46 persons for investigation of the parasites. One of the slide specimens was dried in the air while the other one put into fixative and they were stained with trichrome and Giemsa stains. The two staining methods were used for 36 samples and only Giemsa, for 10 samples. E. gingivalis was positive in 7 (19.44%) out of 36 samples stained by the trichrome stain while T. tenax was positive in one (2.17%) out of 46 samples stained by Giemsa stain. Parasitic infections were found to be positive in seven (21.2%) specimen from 33 patients with periodontal disease and in one (7.69%) specimen from 13 healthy controls. Dental policlinics are generally far from parasitology laboratories and microscopical wet mount examination can not be performed. Therefore dentists can send the specimens and have the parasites diagnosed with Giemsa and trichrome staining methods as an alternative to wet mount examination.Ağız boşluğu birçok mikroorganizmanın yerleşmesine elverişlidir. Sudaki, besinlerdeki, hava ve ellerdeki mikroorganizmalar kolayca ağız boşluğuna girebilirler. Ağız florasında çok sayıda ve değişik türde mikroorganizma bulunmaktadır. Parazitlerden ise Entamoeba gingivalis (E.gingivalis) ve Trichomonas tenax (T.tenax) protozoon parazitleri ağızda yerleşmekte ve apatojen olarak kabul edilmektedirler. Ancak ağız hijyeni bozuk ve diş eti hastalığı bulunan kişilerde daha yüksek oranda saptanmaktadırlar. Çalışmamızda, ağız boşluğunda yerleşen parazitlerin araştırılması amacıyla toplam 46 kişiden dişin kole bölgesinden 2 lama kazıntı örnekleri alınmıştır. Lamlardan birisi fiksatif içerisinde diğeri de havada kurutularak Parazitoloji laboratuvarına getirilerek Trichrome ve Giemsa boyaları ile boyanmışlardır. Kırkaltı örneğin tümüne Giemsa boyası uygulanırken, 36 örneğe ayrıca Trichrome boyası da uygulanmıştır. Trichrome boyası ile boyanan 36 örnekten 7'sinde (%19,44) E.gingivalis'e rastlanmıştır. Giemsa ile boyanan 46 örnekten birisinde (%2,17) T.tenax görülmüştür. Çalışmamızda periodontal hastalığı bulunan 33 kişiden 7'sinde (%21,2) parazit saptanırken 13 kişilik sağlıklı kontrol grubunda ise bir kişide (%7,69) parazit saptanmıştır. Diş Hekimliği poliklinikleri genellikle Parazitoloji polikliniklerinden uzakta bulunmakta ve preparatların direkt bakısı mümkün olamamaktadır. Bu nedenle ağızda yerleşen parazitlerin tanısında taze direkt bakıya alternatif olarak Giemsa ve Trichrome boya yöntemlerinin uygulanması, Diş Hekimlerinin Parazitoloji laboratuvarlarına örnek gönderebilmelerini ve böylece tanı konabilmesini sağlayacaktır

Serological monitoring of paediatric visceral leishmaniasis by IFA and ELISA methods

Objective: Visceral leishmaniasis (VL) is endemic in all Mediterranean countries including Turkey, and children are at greater risk than adults in endemic areas. In VL patients, serological assays are considered to be sensitive for the diagnosis and/or follow up. The aim of this study was to assess the usefulness of serology for following up of childhood VL in Turkey. Methods: Sera obtained from twenty parasitologically confirmed children with VL were tested using IFAT and ELISA. The patients were monitored clinically and serologically (range: 20-500 days) during and after treatment. All VL patients were treated with meglumine antimonate. Results: Anti-Leishmania antibodies in successfully treated VL patients showed a steep decline but, in three patients who had relapsed, an increase was detected. Significantly lower values were observed after treatment with both serological techniques. Mean ELISA optical density values before and after treatment were: 0.78;plusmn;0.36 (0.26-1.76) and 0.38;plusmn;0.24 (0.09-0.83) respectively, (p;lt;0.001) and mean IFAT values (log10 transformed titers) before and after treatment were: 3.02;plusmn;0.90 (1.81-4.51) and 2.16;plusmn;0.75 (1.20-3.90) respectively, (p;lt;0.001). Conclusion: ELISA and IFAT are valuable not only for diagnosis but also for monitoring of drug therapy in childhood visceral leishmaniasis as rapid and non-invasive techniques. (Turkiye Parazitol Derg 2011; 35: 125-8)Amaç: Visseral leishmaniasis (VL) Türkiye'nin de içinde bulunduğu Akdeniz ülkelerinde yaygın olarak görülür ve endemik bölgelerde çocuklar yetişkinlere göre daha büyük risk altındadırlar. VL hastalarında serolojik testler tanı ve/veya izlem açısından hassas olarak kabul edilmektedir. Bu çalışmanın amacı, Türkiye'de çocukluk çağı VL izlemi açısından serolojinin yararlılığını değerlendirmektir. Yöntemler: VL olduğu parazitolojik olarak doğrulanan yirmi çocuktan alınan serumlar IFAT ve ELISA testleriyle çalışıldı. Hastalar; tedavi süresince ve tedavi sonrasında (aralık: 20–500 gün) serolojik ve klinik olarak izlendi. Tüm VL hastaları meglumin antimonat ile tedavi edildi. Bulgular: Başarıyla tedavi edilen VL hastalarında anti-Leishmania antikorlarında keskin bir düşüş, nüks olan üç hastada ise antikorlarda artış tespit edildi. Anlamlı düşük değerler her iki serolojik teknikle tedavi sonrasında gözlendi. Tedavi öncesi ve sonrası ortalama ELISA OD değerleri: sırasıyla 0.78±0.36 (0.26-1.76) ve 0.38±0.24 (0.09-0.83) (p0.001) idi ve tedavi öncesi ve sonrası (log10 transformed titers) IFAT ortalama değerleri ise sırasıyla 3.02±0.90 (1.81-4.51) ve 2.16±0.75 (1.20-3.90) (p0.001) olarak saptandı. Sonuç: ELISA ve IFAT testleri; sadece tanı için değil aynı zamanda hızlı ve invaziv olmayan teknikler olarak Çocuk visseral leishmaniasis ilaç tedavisi izleminde de değerlidir. (Turkiye Parazitol Derg 2011; 35: 125-8

Visceral leishmaniasis: A rarely diagnosed adult case in Turkey

A 37 year-old woman patient, from the Turgutlu district of the city of Manisa, was given a diagnosis of visceral leishmaniasis. Immunosuppression was not detected with flow cytometric analysis. Fungizone was given to the patient in 50 mg doses on alternative days 20 times. the treatment was successful and no important side effect was recorded. Considering the importance of visceral leishmaniasis in Turkey and the rarity of adult cases, we decided to present this as a case report.Manisa'nın Turgutlu ilçesinden gelen 37 yaşındaki bir bayan hastaya visseral leishmaniasis tanısı konulmuştur. Hastada flow sitometri ile yapılan testler sonucunda immunsupresyon saptanmamıştır. Hasta, gün aşırı 50 mg olmak üzere toplam 20 doz kullanılan Fungizon. verilerek başarı ile tedavi edilmiş ve herhangi bir yan etki gözlenmemiştir. Ülkemizde visseral leishmaniasisin önemi ve erişkinlerde nadir olarak görülmesi nedeniyle olgu sunumu olarak sunulması düşünülmüştür