Prise en charge médicamenteuse de la maladie d'Alzheimer et évaluation du traitement par dispositif transdermique (Exelon® patch)

DIJON-BU Médecine Pharmacie (212312103) / SudocSudocFranceF

Physiologie, biochimie et modélisation de la germination et de la croissance de Penicillium chrysogenum et autre micromycètes

La microbiologie prévisionnelle vise à prévoir le comportement de microorganismes à l'aide de modèles mathématiques. Cependant, les travaux de recherche dans ce domaine ne concernent, en majorité, que le règne bactérien et la modélisation de la croissance des micromycètes n'a pas du tout reçu le même niveau d'attention. L'objectif de ce travail a donc été l'élaboration de modèles décrivant la croissance de champignons filamenteux tel que Penicillium chrysogenum, en fonction de paramètres environnementaux. Une première partie est conscrée à la sélection des facteurs environnementaux à prendre en compte pour la construction des modèles mathématiques. Par une approche mettant en œuvre des plans d'expériences, il est mis en évidence les effets prédominants de l'activité de l'eau (aw) et de la température sur la germination des spores de P. chrysogenum. La deuxième partie concerne l'élaboration de modèles décrivant l'influence de l'aw et/ou de la température sur le développement mycélien de P. chrysogenum et d'autres micromycètes. Enfin une troisième partie est consacrée à la recherche de marqueurs biochimiques de la germination des spores de P. chrysogenum...DIJON-BU Sciences Economie (212312102) / SudocSudocFranceF

Rôle du pharmacien d'officine dans la prévention et la prise en charge d'une maladie émergente (la borréliose de Lyme)

La maladie de Lyme ou borréliose de Lyme est une affection émergente en France et au sein de l hémisphère nord, elle est transmise par une tique vectrice du genre Ixodes ricinus porteuse de bactéries spirochètes, Borrelia burgdorferi. Elle se caractérise par un érythème migrant lors de la phase primaire et peut évoluer vers des stades plus tardifs avec de multiples manifestations : cutanées, rhumatologiques, neurologiques et cardiaques. Le diagnostic est parfois difficile et repose sur des arguments anamnestiques cliniques et biologiques. Le traitement repose sur une antibiothérapie et est d autant plus efficace qu il est débuté le plus précocement possible. En l absence de vaccin, la prévention reste fondamentale pour se protéger contre les morsures de tiques et il est également essentiel d extraire la tique au plus vite afin d éviter une éventuelle transmission de la maladie.DIJON-BU Médecine Pharmacie (212312103) / SudocSudocFranceF

Plasmodium knowlesi (une nouvelle espèce émergente responsable du paludisme chez l'homme)

Plasmodium knowlesi est désormais clairement identifié comme une nouvelle espèce plasmodiale capable d infecter l homme. Dans certaines régions d Asie du Sud-Est, ce parasite pose un réel problème de santé publique puisqu il peut être responsable de plus de 50 % des accès palustres, notamment dans la partie centrale de l île de Bornéo. Les macaques, très largement répandus dans toute l Asie du Sud-Est, constituent son principal réservoir naturel. Les vecteurs sont des anophèles dont le biotope est la forêt dense, l homme s infectant généralement lors d un séjour en milieu forestier. Des formes graves voire mortelles peuvent survenir dans des proportions non négligeables. L identification microscopique du parasite est difficile car sa morphologie est proche de P. falciparum (formes jeunes) et P. malariae (formes âgées), si bien que le diagnostic fait principalement appel à des outils moléculaires (PCR). Désormais, les biologistes et les cliniciens doivent savoir évoquer ce nouveau Plasmodium devant tout accès palustre chez un voyageur de retour d un séjour en Asie du Sud-Est.DIJON-BU Médecine Pharmacie (212312103) / SudocSudocFranceF

A temperature-type model for describing the relationship between fungal growth and water activity

International audienc

Development of an improved in vitro model of human intestinal follicle associated epithelia to study cellular and molecular interactions of Candida albicans with M cells

International audienceCandida albicans is a commensal inhabitant of the human mucosa causing harmful invasive infections in immuno-compromised patients, taking origin mainly from the gastro-intestinal tract. A better understanding of the mechanisms by which C. albicans interacts with the intestinal mucosa will improve our knowledge of the physiopathology of disseminated candidiasis. C. albicans can grow upon mucosal surfaces in both the yeast and the hyphal forms, the transition from the yeast to the hyphal form playing a key role in its virulence. Mucosal immunity contributes to both commensalism and pathogenicity of the fungus, possibly through presentation of C. albicans antigens to the underlying organized lymphoid structures via transcytosis that could probably be mediated by the specialized epithelial M cells. With this aim, we developed an in vitro model of the human intestinal Follicle Associated Epithelium (FAE) where enterocytes of the Caco-2 cell line in close contact with mucosal lymphocytes differentiate in M cells. Studying adherence, invasion and translocation of C. albicans across co-cultures suggest that C. albicans interacts differentially with M cells / enterocytes co-cultures as compared to mono-layers of Caco-2 cells alone. The uptake mechanism allowing C. albicans to translocate across the co-culture model is under investigation. Moreover, the respective contribution of the yeast and hyphal forms to this process will be studied using KO mutants of C. albicans unable to produce hyphae. Finally the cytokine production resulting from C. albicans and M cells / Caco-2 co-cultures interaction will be studied

Évaluation du kit de PCR en temps réel MycoGENIE ® Pneumocystis jirovecii pour le diagnostic moléculaire de la pneumocystose

International audiencePneumocystis jirovecii (Pj) est un champignon pathogène opportuniste strictement humain. Il colonise transitoirement et sans symptôme l’arbre respiratoire des patients immunocompétents, et peut être responsable d’infections pulmonaires sévères chez les patients immunodéprimés. Le diagnostic biologique de pneumocystose repose sur la mise en évidence du pathogène à l’examen direct d’un prélèvement pulmonaire profond. Si l’examen direct manque souvent de sensibilité, de nombreuses techniques de PCR se sont développées pour améliorer la sensibilité de détection du champignon. Les techniques de PCR quantitatives (qPCR) permettent de quantifier la charge fongique dans le prélèvement, et potentiellement de différencier la colonisation de l’arbre respiratoire par Pj d’une véritable infection généralement associée à une charge fongique plus élevée.L’objectif de notre travail était d’évaluer les performances du kit MycoGENIE® P. jirovecii (Ademtech) dans le diagnostic de la pneumocystose en comparaison avec la technique de qPCR utilisée en routine au laboratoire de parasitologie-mycologie du CHU de Dijon.Soixante-dix-huit échantillons respiratoires (72 LBA, 3 ATP, 3 crachats) ont été testés en parallèle : 46 échantillons rétrospectifs (prélevés entre janvier 2016 et juin 2016 et conservés à −80 °C) et 32 échantillons prospectifs prélevés entre juillet 2016 et septembre 2016. Les 78 échantillons ont été extraits par l’automate Magtration System 12GC® (Bionobis). Les deux techniques de PCR utilisées dans notre étude ciblaient la même séquence d’ADN de 79 pb du gène mitochondrial codant la grosse sous-unité de l’ARN ribosomal (mtLSU rRNA). Les PCR ont été réalisées sur l’automate LC480 II (Roche Diagnostics). Le test MycoGENIE® Pj contenait une gamme étalon permettant de quantifier la charge fongique du prélèvement en nombre de copies/mL ainsi qu’un contrôle interne d’inhibition. Le kit est marqué CE-IVD.Sur les 46 échantillons testés rétrospectivement, 36 étaient positifs et 9 étaient négatifs par les deux techniques. Un seul résultat était discordant (négatif avec la technique de notre laboratoire et positif avec le kit MycoGENIE® Pj). Les résultats des 32 échantillons testés prospectivement étaient concordants (12 positifs et 20 négatifs). La concordance entre les 2 tests est donc de 98,7 %. Aucun inhibiteur n’a été détecté avec le kit MycoGENIE® Pj. La détection de l’ADN a été plus précoce pour l’ensemble des échantillons positifs avec le kit MycoGENIE® Pj, avec un seuil de détection plus précoce en moyenne de 1,2 cycle. Le résultat discordant concernait un patient atteint d’une leucémie aiguë myéloblastique en aplasie post-inductive intensive pour lequel la radiologie et la clinique orientaient le diagnostic vers une pneumopathie interstitielle hypoxémiante et bilatérale.La quantification de l’ADN n’a pas permis de définir de seuil pour différencier pneumocystose maladie et colonisation : des taux très faibles ont été retrouvés chez des patients dont le diagnostic retenu était une pneumocystose ; à l’inverse, des taux élevés d’ADN de Pj étaient observés chez des patients considérés comme colonisés. D’autres éléments comme le terrain, l’aspect radiologique, la clinique et d’autres marqueurs biologiques (ex. β-glucanes) devraient être pris en compte pour préciser le diagnostic de pneumocystose ou de colonisation à Pj

<em>Candida albicans</em> interaction with M cells in an in vitro model of the human intestinal Follicle Associated Epithelium (FAE)

National audienceCandida albicans (C. albicans) is a microorganism belonging to the commensal flora of the intestinal, oral and vaginal mucosal surfaces in healthy humans. This commensalism results from a balance between the virulence factors of the yeast and defense mechanisms of the host. However, disturbance of this balance in a vulnerable patient may result in intense mucosal colonization that promotes invasion of epithelial cells, translocation across the intestinal epithelial barrier and, eventually hematogenous dissemination. A better understanding of the mechanisms by which C. albicans interacts with the intestinal mucosa will improve our knowledge of the physiopathology of disseminated candidiasis. Mucosal immunity contributes to both commensalism and pathogenicity of the fungus, possibly through presentation of C. albicans antigens to the underlying organized lymphoid structures via transcytosis, mediated by the specialized epithelial M cells. With this aim, we developed an in vitro model of the human intestinal Follicle Associated Epithelium (FAE) where enterocytes of the Caco-2 cell line in close contact with mucosal lymphocytes differentiate in M cells. Studying adherence, invasion and translocation of C. albicans across co-cultures suggests that C. albicans interacts differentially with M cells / enterocytes co-cultures compared to monolayers of Caco-2 cells alone. The uptake mechanism allowing C. albicans to translocate across the co- culture model is under investigation, as well as the respective contribution of the yeast and hyphal forms to this process using KO mutants of C. albicans unable to produce hyphae. Finally the cytokine production by intestinal cells resulting from C. albicans and M cells / Caco-2 co-cultures interaction will be studied

Development of a high throughput cytotoxicity assay of Caco-2 cells using a Candida albicans homozygous deletion library

International audienceIntroduction: The opportunistic yeast Candida albicans gains access to the bloodstream mainly through translocation across the intestinal barrier. Using an in vitro model of interaction with the enterocytic-like cell line Caco-2, it has been shown that C. albicans is capable of adhering to, invading and damaging intestinal cells, probably through a combination of phenotypic properties including adherence, yeast to hyphae transition and secretion of lytic enzymes (Dalle et al., Cell. Microbiol. 12:248, 2010). However the sequence of events together with the genes involved in these processes remain to be clarified. The aim of our study was to screen a C. albicans isogenic collection of homozygous knock-out strains for genes involved in the infectivity of enterocytes using a Caco-2 in vitro model. Methods: A high throughput screening tool adapted from our Caco- 2 model was used for testing the infectivity of 674 C. albicans homozygous deletion strains (equivalent to ~ 11% of the genome, Noble et al., Nat. Genet. 42:590, 2010). Infectivity was measured as the cytotoxic effect of individual mutants upon Caco-2 cell monolayers. For each of the mutants tested, cytotoxicity was expressed as the percentage of variation as compared to the C. albicans SC5314 reference strain. Results: We identified 66 mutants out of 674 with marked increase or decrease in Caco-2 cell cytotoxicity. These mutants were selected as the 10% fraction of the population lying in the tails of the Gaussian distribution, with 5% on each side of the distribution. A gene ontology term analysis of the 66 ORFs showed functional enrichment of genes involved in filamentous growth (p-value of 0.07, false discovery rate of 0%) among the 674 ORFs tested. An additional screen of independent mutants for these 66 genes is currently under investigation to confirm these observations. Conclusions: Our study demonstrated the potential of our screen to identify genes involved in C. albicans ability to cause enterocyte cell damage. Known genes and yet uncharacterized ORFs have been identified for which deletion increases or decreases C. albicans virulence in vitro. Further studies will be conducted to confirm the involvement of these genes or ORFs in in vivo models of disseminated candidiasis originating from the gastrointestinal tract

Genetic and phenotypic characterization of commensal and clinical Candida albicans isolates reveals heterogeneous distribution of adherence and invasiveness properties

International audienceConsidering Candida albicans as a primarily clonal model of reproduction, distinct lineages of C. albicans could propagate independently, each clonal lineage having possibly variations in biological traits contributing to the pathogenicity of the fungus such as adherence or the yeast-hyphae transition. Indeed, adherence to epithelial cells is considered a virulence trait of C. albicans since contributing to the first contact of the fungus with the host’s epithelial layers. Moreover the ability of C. albicans to switch from the yeast to the hyphae form is an important determinant of C. albicans virulence since favoring invasion of the fungus into the host’s tissues. Using a Multi-Locus Microsatellite Typing (MLMT) approach, we previously addressedthe question of the pathogenicity of lineages of C. albicans with regard to their origin in three series of C. albicans isolates: 82 commensal isolates collected in healthy individuals, 46 invasive bloodstream isolates and 46 of nonbloodstream clinical isolates. In the current study, invasiveness (i.e. cytotoxicity effect) and adherence to epithelial cells of representative strains of the 3 series previously characterized at the genotypic level were investigated in the Caco-2 in vitro model of human intestinal barrier. Correlations between invasiveness, adherence, genotype and origin were then investigated. Principal component factor analysis failed to reveal specific correlation between genotypic and phenotypic characters for all of the strains studied. However, it was possible to group strains into three clusters based on their capabilities to adhere to and to invade intestinal cells. Interestingly, some clinical strains presented a decrease in their cytotoxic effect associated with a defect in their filamentation capability. To illustrate these observations, the clinical strain n°926 was further characterized in vitro with regard to its filamentation capabilities as compared to the reference strain C. albicans SC5314. Colony morphology on specific agar media reported a strong defect in its filamentation ability. This was confirmed by microscopic observations in specific liquid media. Despite similar adherence capability to epithelial cells, cytotoxicity of the strain n°926 was significantly lower than the reference strain C. albicans SC5314. These data suggest that (i) invasion of epithelial cells is mainly driven by the ability of C. albicans to switch from the yeast to the hyphal form and (ii) natural C. albicans strains could harbor atypical defect in their filamentation capabilities. Experiments are in progress in a mouse model of disseminated candidiasis originating from the gastro-intestinal tract to confirm the defect in filamentation capabilities of C. albicans natural strains observed in vitro