Alcances del desarrollo y aplicación de las técnicas moleculares en el diagnóstico y tratamiento de la patología endocrina

Las técnicas moleculares han tenido y aún tienen en la actualidad un fuerte impacto en la investigación clínica como así también en el diagnóstico de múltiples patologías endocrinas. Con el advenimiento, en los últimos años, de nuevas técnicas moleculares, los futuros avances en endocrinología analizarán el impacto de las características génicas particulares de un individuo sobre la síntesis y degradación de proteínas específicas. Las técnicas moleculares han permitido conocer y entender muchos procesos celulares a nivel molecular. Durante muchos años se pensó que cada gen daba lugar a una única proteína; sin embargo, en la mayoría de los casos un único gen da lugar a varias proteínas. Por lo tanto, el tamaño del proteoma de un organismo no puede fácilmente predecirse por el tamaño y características particulares de su genoma. A través del Proyecto Genoma Humano se ha estimado que el número total de genes es de aproximadamente 20000, y el número de proteínas codificadas por esos genes se ha estimado entre 100000 y 2000000. Esta discrepancia entre el número de genes y proteínas puede ser explicada por al menos dos mecanismos importantes intracelulares: por procesamiento post-transcripcional del precursor de RNA mensajero (mRNA), y por modificación post-traduccional de las proteínas. La expresión del gende hormona de crecimiento humano (GH-1) es un ejemplo de procesamiento tanto a nivel del mRNA como también de modificaciones post-traduccional para generar a partir de un único gen múltiples formas proteicas moleculares.Fil: Marino, Roxana Marcela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Rivarola, Marco Aurelio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Belgorosky, Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentin

Estrogens in Human Male Gonadotropin Secretion and Testicular Physiology From Infancy to Late Puberty

Several reports in humans as well as transgenic mouse models have shown that estrogens play an important role in male reproduction and fertility. Estrogen receptor alpha (ERα) and beta (ERβ) are expressed in different male tissues including the brain. The estradiol-binding protein GPER1 also mediates estrogen action in target tissues. In human testes a minimal ERα expression during prepuberty along with a marked pubertal up-regulation in germ cells has been reported. ERβ expression was detected mostly in spermatogonia, primary spermatocytes, and immature spermatids. In Sertoli cells ERβ expression increases with age. The aromatase enzyme (cP450arom), which converts androgens to estrogens, is widely expressed in human tissues (including gonads and hypothalamus), even during fetal life, suggesting that estrogens are also involved in human fetal physiology. Moreover, cP450arom is expressed in the early postnatal testicular Leydig cells and spermatogonia. Even though the aromatase complex is required for estrogen synthesis, its biological relevance is also related to the regulation of the balance between androgens and estrogens in different tissues. Knockout mouse models of aromatase (ArKO) and estrogen receptors (ERKOα, ERKOβ, and ERKOαβ) provide an important tool to study the effects of estrogens on the male reproductive physiology including the gonadal axis. High basal serum FSH levels were reported in adult aromatase-deficient men, suggesting that estrogens are involved in the negative regulatory gonadotropin feedback. However, normal serum gonadotropin levels were observed in an aromatase-deficient boy, suggesting a maturational pattern role of estrogen in the regulation of gonadotropin secretion. Nevertheless, the role of estrogens in primate testis development and function is controversial and poorly understood. This review addresses the role of estrogens in gonadotropin secretion and testicular physiology in male humans especially during childhood and puberty.Fil: Guercio, Gabriela Viviana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Costanzo, Mariana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Marino, Roxana Marcela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Ramirez, Pablo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Berensztein, Esperanza Beatriz. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Rivarola, Marco Aurelio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Belgorosky, Alicia. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Functional Characterization of Two Mutations Located in the Ligand Binding Domain in the SF1

Purpose: Since SF1 gene mutations located in the ligand binding domain are associated with a wide phenotypic spectrum in 46,XY subjects, the functional and structural characterization of these variations is of great interest. The aim of this study is to evaluate the clinical phenotype, hormonal pattern and molecular studies (genetic, functional data and protein structural analysis) in two non-related 46,XY disorder of sex development (DSD) index patients. Methods: Clinical characteristics, genomic DNA sequencing analysis, protein prediction software study and protein structure analysis, and functional characterization of the mutations was carried out. Results: Both index DSD patients showed a similar phenotype, however several affected members of Family 1 showed variable phenotypes. While in Family 1 a previously reported heterozygous missense point mutation (p.Arg313His) was found, in Family 2 a novel heterozygous missense point mutation (p.Ser303Arg) was detected. Both mutations were predicted to be as “probably damaging”. The transcriptional activity of SF1 mutants p.Arg313His and p.Ser303Arg, studied using two different promoters in two cell lines, exhibited significant reductions of transactivation activity. Structural analysis showed differences between both mutants, such as changes in the flexibility of the receptor backbone and in the tertiary structure around the ligand and in the AF-2 domain. Conclusions: One of these ligand binding domain mutations in SF1 showed phenotypic heterogeneity among family members, while both variations showed similarities in prepubertal phenotype, as well as in damage prediction and experimental decreases in transcriptional activity, but marked differences in structural consequence predictions. Finally the present study reinforces the concept of the wide variability in the clinical phenotype in affected 46,XY DSD patients.Fil: Perez Garrido, Natalia Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marino, R.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Ramirez, P.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Ciaccio, Marta Graciela Cristina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Costanzo, M.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Guercio, Gabriela Viviana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Warman, M.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Minini, L.. Universidad de la República. Facultad de Ciencias; UruguayFil: Portillo Ledesma, S.. Universidad de la República. Facultad de Ciencias; UruguayFil: Rivarola, Marco Aurelio. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Coitiño, E. L.. Universidad de la República. Facultad de Ciencias; UruguayFil: Belgorosky, Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentin

Homeostasis loss in VIP deficient mice is associated with altered regulatory T cells recruitment

In order to have a successful pregnancy, it is required a balance between proinflammatory and tolerogenic mediators. Since VIP (vasoactive intestinal peptide) is a master regulator associated with Tregs induction and recruitment, we aim to understand the relevance of VIP in normal pregnancy with focus on the Tregs.Fil: Gallino, Lucila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Hauk, Vanesa Cintia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Grasso, Esteban Nicolas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Palligas, Marcos Abdul. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Berensztein, Esperanza Beatriz. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Pascuali, Natalia Marisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Perez Leiros, Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Ramhorst, Rosanna Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Whaschek, James. University of California; Estados UnidosInternational Federation of Placenta Associations 2019 (IFPA2019); 8th Latin American Symposium on Maternal-Fetal Interaction and Placenta (VIII SLIMP) "Placenta: the origin of pregnancy health and disease"Buenos AiresArgentinaInternational Federation of Placenta Associations 201

VIP Promotes Recruitment of Tregs to the Uterine–Placental Interface During the Peri-Implantation Period to Sustain a Tolerogenic Microenvironment

Uterine receptivity and embryo implantation are two main processes that need a finely regulated balance between pro-inflammatory and tolerogenic mediators to allow a successful pregnancy. The neuroimmune peptide vasoactive intestinal peptide (VIP) is a key regulator, and it is involved in the induction of regulatory T cells (Tregs), which are crucial in both processes. Here, we analyzed the ability of endogenous and exogenous VIP to sustain a tolerogenic microenvironment during the peri-implantation period, particularly focusing on Treg recruitment. Wild-type (WT) and VIP-deficient mice [heterozygous (HT, +/−), knockout (KO, −/−)], and FOXP3-knock-in-GFP mice either pregnant or in estrus were used. During the day of estrus, we found significant histological differences between the uterus of WT mice vs. VIP-deficient mice, with the latter exhibiting undetectable levels of FOXP3 expression, decreased expression of interleukin (IL)-10, and vascular endothelial growth factor (VEGF)c, and increased gene expression of the Th17 proinflammatory transcription factor RORγt. To study the implantation window, we mated WT and VIP (+/−) females with WT males and observed altered FOXP3, VEGFc, IL-10, and transforming growth factor (TGF)β gene expression at the implantation sites at day 5.5 (d5.5), demonstrating a more inflammatory environment in VIP (+/−) vs. VIP (+/+) females. A similar molecular profile was observed at implantation sites of WT × WT mice treated with VIP antagonist at d3.5. We then examined the ability GFP-sorted CD4+ cells from FOXP3-GFP females to migrate toward conditioned media (CM) obtained from d5.5 implantation sites cultured in the absence/presence of VIP or VIP antagonist. VIP treatment increased CD4+FOXP3+ and decreased CD4+ total cell migration towards implantation sites, and VIP antagonist prevented these effects. Finally, we performed adoptive cell transfer of Tregs (sorted from FOXP3-GFP females) in VIP-deficient-mice, and we observed that FOXP3-GFP cells were mainly recruited into the uterus/implantation sites compared to all other tested tissues. In addition, after Treg transfer, we found an increase in IL-10 expression and VEGFc in HT females and allowed embryo implantation in KO females. In conclusion, VIP contributes to a local tolerogenic response necessary for successful pregnancy, preventing the development of a hostile uterine microenvironment for implantation by the selective recruitment of Tregs during the peri-implantation period.Fil: Gallino, Lucila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Hauk, Vanesa Cintia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Fernández, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Soczewski, Elizabeth Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Gori, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Grasso, Esteban Nicolas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Calo, Guillermina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan". Servicio de Endocrinología; ArgentinaFil: Berensztein, Esperanza Beatriz. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Waschek, James A.. University of California at Los Angeles; Estados UnidosFil: Perez Leiros, Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Ramhorst, Rosanna Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Alcances del desarrollo y aplicación de las técnicas moleculares en el diagnóstico y tratamiento de la patología endocrina

Las técnicas moleculares han tenido y aún tienen en la actualidad un fuerte impacto en la investigación clínica como así también en el diagnóstico de múltiples patologías endocrinas. Con el advenimiento, en los últimos años, de nuevas técnicas moleculares, los futuros avances en endocrinología analizarán el impacto de las características génicas particulares de un individuo sobre la síntesis y degradación de proteínas específicas. Las técnicas moleculares han permitido conocer y entender muchos procesos celulares a nivel molecular. Durante muchos años se pensó que cada gen daba lugar a una única proteína; sin embargo, en la mayoría de los casos un único gen da lugar a varias proteínas. Por lo tanto, el tamaño del proteoma de un organismo no puede fácilmente predecirse por el tamaño y características particulares de su genoma. A través del Proyecto Genoma Humano se ha estimado que el número total de genes es de aproximadamente 20000, y el número de proteínas codificadas por esos genes se ha estimado entre 100000 y 2000000. Esta discrepancia entre el número de genes y proteínas puede ser explicada por al menos dos mecanismos importantes intracelulares: por procesamiento post-transcripcional del precursor de RNA mensajero (mRNA), y por modificación post-traduccional de las proteínas. La expresión del gende hormona de crecimiento humano (GH-1) es un ejemplo de procesamiento tanto a nivel del mRNA como también de modificaciones post-traduccional para generar a partir de un único gen múltiples formas proteicas moleculares.Fil: Marino, Roxana Marcela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Rivarola, Marco Aurelio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Belgorosky, Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentin

Human Aromatase Deficiency

Several molecular CYP19A1 gene alterations associated with cytochrome P450 aromatase (cP450arom) deficiency have been describedin both females and males. This has contributed considerably to the understanding of cP450arom activity in different tissues, influencingsexual differentiation, patterns of gonadotropin secretion by the hypothalamic?pituitary axis, reproductive capacity, lipid metabolism,insulin sensitivity, and skeletal maturation and growth. Studies of aromatase deficiency in humans were complemented with studies inmouse knockout models that demonstrated the role of estrogens in several tissues. In this article, molecular studies, the clinical phenotypicvariations throughout life in both sexes, gonadal function, fertility, and gender identity are addressed.Fil: Guercio, Gabriela Viviana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Costanzo, Mariana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Marino, Roxana Marcela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Belgorosky, Alicia. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Endocannabinoid signaling impairs syncytialization: Using flow cytometry to evaluate forskolin-induced cell fusion

Cytotrophoblast cells fuse to form the syncytiotrophoblast, the main structure responsible for the placenta's specialized functions. This complex process denominated syncytialization is fundamental for a correct pregnancy outcome. We observed that the endocannabinoid anandamide disrupts syncytialization employing traditional techniques and flow cytometry in BeWo cell line.Fil: Etcheverry, Tomás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Accialini, Paula Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Palligas, Marcos Abdul. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan". Servicio de Endocrinología; ArgentinaFil: Loureiro, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan". Servicio de Endocrinología; ArgentinaFil: Martinez, Nora Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay; ArgentinaFil: Farina, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; Argentin

DNA methylation is not involved in specific down-regulation of HSD3B2, NR4A1 and RARB genes in androgen-secreting cells of human adrenal cortex

We hypothesized that DNA methylation is involved in human adrenal functional zonation. mRNAsexpression and methylation pattern of RARB, NR4A1 and HSD3B2 genes in human adrenal tissues (HAT)and in pediatric virilizing adrenocortical tumors (VAT) were analyzed. For analysis of the results sampleswere divided into 3 age groups according to FeZ involution, pre and post-adrenarche ages. In all HAT,similar RARB mRNA was found including microdissected zona reticularis (ZR) and zona fasciculata, butHSD3B2 and NR4A1 mRNAs were lower in ZR (p < 0.05). NR4A1 and RARB promoters remainedunmethylated in HAT and VAT. No adrenal zone-specific differences in NR4A1 methylation wereobserved.In summary, RARB was not associated with ZR-specific downregulation of HSD3B2 in postnatal humanadrenocotical zonation. DNA methylation would not be involved in NR4A1 adrenocortical cell-typespecific downregulation. Lack of CpG islands in HSD3B2 suggested that HSD3B2 ZR-specific downregulationwould not be directly mediated by DNA methylation.Fil: Baquedano, María Sonia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Perez Garrido, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Goñi, Javier. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Saraco, Nora Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Aliberti, Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Berensztein, Esperanza Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rivarola, Marco Aurelio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; ArgentinaFil: Belgorosky, Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría "Juan P. Garrahan"; Argentin

An Intron 9 CYP19 Gene Variant (IVS9+5G>A), Present in an Aromatase-Deficient Girl, Affects Normal Splicing and Is Also Present in Normal Human Steroidogenic Tissues

Background/Aims: Splicing CYP19 gene variants causingaromatase deficiency in 46,XX disorder of sexual development(DSD) patients have been reported in a few cases. Amisbalance between normal and aberrant splicing variants was proposed to explain spontaneous pubertal breast developmentbut an incomplete sex maturation progress. Theaim of this study was to functionally characterize a novelCYP19A1 intronic homozygote mutation (IVS9+5G>A) in a46,XX DSD girl presenting spontaneous breast developmentand primary amenorrhea, and to evaluate similar splicing variant expression in normal steroidogenic tissues. Methods:Genomic DNA analysis, splicing prediction programs,splicing assays, and in vitro protein expression and enzymeactivity analyses were carried out. CYP19A1 mRNA expressionin human steroidogenic tissues was also studied. Results:A novel IVS9+5G>A homozygote mutation was found.In silico analysis predicts the disappearance of the splicingdonor site in intron 9, confirmed by patient peripheral leukocytecP450arom and in vitro studies. Protein analysisshowed a shorter and inactive protein. The intron 9 transcriptvariant was also found in human steroidogenic tissues.Conclusions: The mutation IVS9+5G>A generates a splicingvariant that includes intron 9 which is also present in normalhuman steroidogenic tissues, suggesting that a misbalancebetween normal and aberrant splicing variants might occurin target tissues, explaining the clinical phenotype in the affectedpatient.Fil: Saraco, Nora Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría ; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Nesi Franca, Suzana. Universidade Federal do Paraná; BrasilFil: Sainz, Romina Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría ; ArgentinaFil: Marino, Roxana Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría ; ArgentinaFil: Marques Pereira, Rosana. Universidade Federal do Paraná; BrasilFil: La Pastina, Julia. Universidade Federal do Paraná; BrasilFil: Perez Garrido, Natalia. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría ; ArgentinaFil: Sandrini, Romolo. Universidade Federal do Paraná; BrasilFil: Rivarola, Marco Aurelio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría ; ArgentinaFil: Lacerda, Luiz de. Universidade Federal do Paraná; BrasilFil: Belgorosky, Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Pediatría ; Argentin